浅析检验检测机构中方法验证的要点和重要性

马明茹

山东省枣庄市产品质量监督检验所 山东枣庄 277100

在《检验检测机构通用要求》标准中在对检测方法的控制要求中提出 “方法验证” 的概念，检验方法验证这一程序在实验室体系建设中非常重要，在检验机构化学检测领域实验室中，对于一些方法，检测人员很难做到很好的理解，同时也很难取进行验证，以致于在掌握检测标准的技术能力方面存在很大的不确定度，本文从方法验证的不同视角分析阐述，以达到保证检测结果准确、有效的目的。

1 方法验证是检验实验的基础

方法验证是实验室通过核查，提供客观有效证据证明满足检测方法规定的要求。在ISO/IEC 17025《检测和校准实验室能力通用要求》条款中规定 “在引入检测或校准之前，实验室应证实能够正确地运用这些标准方法”。通用要求中条款的规定就意味着实验室在使用标准方法之前，应经过方法验证或证实，并且根据实验室的使用标准，在按照该方法检测之前要对其实际的使用标准方法的水平进行测试，来验证其是否达到了标准方法所需要的技术能力和水平。实验室将这一过程程序化是保障方法能够科学合理进行选择的重要路径，并确保组织实施验证可以有序进行。

2 明确方法验证的重要部分

根据相关标准要求规定，检验检测机构在新检测标准投入使用前要进行方法验证，验证时首先需要评估实验室所拥有的人员、设备、方法、试剂材料和检测环境等资源条件是否满足检测标准要求，可以称为环境资源验证。其后还需要验证实验室是否已经具备准确执行该检测标准的技术能力，可以称为技术能力验证。我们将环境资源验证和技术能力验证并列为方法验证的左膀右臂。

对化学检测实验室而言技术能力验证，而技术能力验证首先需要完成技术实验，并且借助技术实验才能证实相关检测人员完成方法的各项指标是否达标，而这些指标包括方法标准曲线、检出限、回收率和精密度等。

而一旦实际使用当中的检测标准改变，那么检测人员的首要任务就是对其进行针对性的评估，随后寻找其中具体发生改动的地方，如果整体的标准技术路线没有发生变化，而仅是名称、年号等发生变化，那么不需要进行其他评判就可以直接通过技术评审，投入使用，随后只需要在第一时间向实验室提交申请，随后实验室决定是否认可标准的改变，而如果发生新标准路线改变的情况下，那则需要对实验室的评审人员，以及其内部设备，检测方法以及环境，和试剂材料重新审核，并且重新借助试验相关技术参数来研究实验室是否仍然具备准确执行该新的检测标准的技术能力。

其中定量分析方法是测定被分析物的质量或质量分数的分析方法，可用适当的单位数值表示。定性分析方法是根据物质的化学、生物或物理性质对其进行鉴定的分析方法。

3 方法验证中的技术参数

实验室化学检测的对象按性质可分为不得检出的物质 ( 禁用物质) 、无限制使用物质、限制使用的物质 ( 已制定最高允许残留限量物质) 三类。最终分析实验方案以及结果的时候，也需要针对三类物质其自身的特性来执行，而国际部分的组织在执行这方面的验证工作的时候都对其有着较高的技术要求或可参考的技术参数。

如果从论证的有效性看，或者说从方法验证参数的科学程度来看，化学检测的方法以及技术指标都可以分为多种，其中包括从校准曲线、回收率、精密度、准确度 ( 正确度) 试验等。

在检测中如对不同的样品基质，两个重复样品在三个含量水平上加以分析。建议的含量水平为空白（无分析物）、低浓度（接近方法的最低适用浓度）和高浓度（接近方法的最高适用浓度），可用标准加入法得到适当的深度，可理解为按照同一个方法实施检测时，将测试样品分成两个或更多部分。一部分进行常规分析，其他部分在分析前加入已知量的标准分析物。而这些标准分析物的量也应该有着一定的范围，一般为样品中分析物大致含量的两倍到五倍，当然也可以按照既定方法定量限，或是容许限等等均可以来以此计算标准分析物的量。而如果想要衡量方法的回收率，那么可以采用标准添加法，不过这可以受限于样品内部的基质以及分析物的实际含量，当然这种方法也可以用于其他方面的评估，例如在定量限、容许限等水平上的正确度。

（1）方法的校准曲线。实验室首先要找准检测方法校准曲线的数学方程，并且划分好校准曲线的工作范围，这样才能使得其浓度有一个合适的范围，使得浓度在一个数量级内，至少作5 个点 ( 不包括空白)。对于筛选方法 ( 即指定性方法或半定量方法)，方法线性回归方程的相关系数不应低于0．98，对于确证方法( 即能准确定量的方法)，方法线性回归方程的相关系数不应低于0．99。测试溶液中被测组分浓度必须在校准曲线的线性范围内。

（2）方法的回收率。被测物的浓度水平实际上是会影响到回收率的实验结果的，有可能会导致结果偏高，或是偏低，这就要求在实际的方法回收验证实验时，一些禁用的物质，以及回收率的方法测定应当分三水平，分别是低限 (LOD)、两倍方法测定低限和十倍方法测定；而后针对已制定最高残留限量MRL 的最大化学残留量，回收率应在方法LOD、MRL、选一合适点进行三水平试验；对于未制定MRL 的，回收率应在方法LOD、常见限量指标、选一合适点进行三水平试验。每一水平做双平行。

（3）方法的精密度。方法的精密度于测试人员的稳定水平相挂钩，这也是其在实际测试过程当中所能获得测试结果的一种体现，在实际的测试以及验证过程当中，对于禁用物质，精密度试验也应该分为三个量级，分别是LOD、两倍LOD 和十倍LOD；对于已制定MRL 的，精密度试验的范围为LOD、MRL，还有选一适合的点进行测试，而针对部分没有制定MRL 的，精密度试验发范围应该为LOD、常见限量指标、选一合适点三个水平进行。每一浓度水平的重复测定次数＞6。精密度测试的结果可通过实验室内的变异系数（CV= 标准偏差/ 平均值）来表达，标准偏差s 可通过贝塞尔Bessel 公式计算得到，并可参考实验室内变异系数表给出的数据进行精密度结果的评价。

（4）方法的准确度。方这个准确度同时也叫做准确度，其代表的是对于视线样品进行重复的分析研究，来测定其含量，并且最终借助校正来得出测定值于实际值之间的差距。