紫茎泽兰提取液对猪链球菌的抑菌活性研究

张小苗，周玉照*，张以芳

试验研究

紫茎泽兰提取液对猪链球菌的抑菌活性研究

张小苗1，周玉照1*，张以芳2

（1.大理农林职业技术学院，云南 大理 671003；2.云南农业大学动物医学院，云南 昆明）

为了解紫茎泽兰提取液对猪链球菌的抑菌效果。试验通过将紫茎泽兰的叶和茎分别进行提取，经旋转蒸发仪浓缩至10g/ml，2种提取液分别对150μl猪链球菌(1×108个/ml)进行抑制效果测定、最低抑菌浓度测定、最低杀菌浓度测定。结果显示，茎提取液的抑菌圈直径是14.75±0.23mm；叶提取液抑菌圈直径为8.12±0.50mm。叶提取液对猪链球菌的最低抑菌浓度为250mg/ml；茎提取液对猪链球菌的最低抑菌浓度为125mg/ml。叶和茎提取液对猪链球菌的最低杀菌浓度分别为500mg/ml和250mg/ml。紫茎泽兰的叶和茎两种提取液对猪链球菌有不同程度的抑制作用，且茎提取液对猪链球菌的抑菌效果优于叶提取液。

紫茎泽兰；提取液；猪链球菌；抑菌活性

紫茎泽兰为菊科泽兰属多年生植物，是一种世界性的恶性杂草[1]。从近些年对紫茎泽兰抑菌性的研究可以看出，紫茎泽兰提取液以及所含的化学成分都具有一定的抑菌活性[2]。猪链球菌病是一种人畜共患的急性、热性传染病主要表现为急性出血性败血症、心内膜炎、脑膜炎、关节炎、哺乳仔猪下痢和孕猪流产等。所以紫茎泽兰提取液对猪链球菌有无抑菌效果的研究很有临床意义。前人的研究表明，紫茎泽兰95%乙醇提取物对兔痒螨和疥螨具有较强的离体杀灭活性；紫茎泽兰石油醚萃取物对牛足螨也有较强的离体杀灭活性[3]；紫茎泽兰经甲醇石油醚丙酮萃取后对黏虫触杀效果较好的部位是花和叶[4]；紫茎泽兰提取液可致弱鸡球虫卵囊活性[5]；紫茎泽兰挥发油对金黄色葡萄球菌有抗菌作用[6]；紫茎泽兰乙酸乙酯部位具有良好的抗肝癌活性，能引起凋亡相关蛋白Caspase-3与PARP的活化，从而诱导肝癌细胞凋亡，但对正常肝细胞影响较小[7]；猪粪与紫茎泽兰混合发酵可以提高发酵的产气效果[8]；紫茎泽兰提取物具有除粪臭和驱避蚊蝇效果[9]。目前，紫茎泽兰提取物抑制动物病原菌的报道很少，试验拟提取不同部位紫茎泽兰成分浸提物，并分别对猪链球菌进行体外抑菌活性研究。试验初步探讨紫茎泽兰不同部位提取液对猪链球菌的抑菌效果，以期为充分、合理利用紫茎泽兰资源，使之变害为利提供参考。

1 材料与方法

1.1 材料

紫茎泽兰全草采自公路边；猪链球菌由云南农业大学实验室保存；血清琼脂培养基、 MH肉汤均购自天根生化科技(北京)有限公司。

1.2 方法

1.2.1 紫茎泽兰叶、茎提取液的制备 将采集的紫茎泽兰叶、茎洗净，晾干后各取500g剪碎后置于500ml锥形瓶中，加入400ml纯净水置于80℃恒温水浴锅中浸泡24h后，将提取液过滤，3000 r/min离心15min，取上清液置于旋转蒸发仪器中蒸发浓缩为50ml，提取液终浓度为10g/ml。

1.2.2 猪链球菌的制备 抽取保存的猪链球菌菌液2ml于MH肉汤中，37℃恒温培养18h，4℃保存备用。

1.2.3 紫茎泽兰不同部位提取液对猪链球菌的抑制效果测定 在血清琼脂培养基中均匀涂布0.5ml猪链球菌，待表面干燥后用打孔器在涂菌的血清琼脂培养基上均匀打孔，并在孔底在酒精灯火焰上略微加热，使底部培养基熔化与平皿底壁紧密结合，分别抽取的紫茎泽兰叶、茎提取液0.2ml加入各孔中，37℃恒温培养24h后。分别观察并测量抑菌圈直径大小(mm)。

1.2.4 紫茎泽兰不同部位提取液最低抑菌浓度的测定 用分光光度计校正猪链球菌菌液，使其含量约为1×108~2×108CFU/ml。取无菌试管20支，分二组，每组10支，第一组1~9管分别加入MH肉汤2ml；在第1管中加入紫茎泽兰叶提取液2ml混匀，倍比稀释至第8管，后从第8管中吸取2ml弃去，第10管加入2ml紫茎泽兰叶提取液；第二组1~9管分别加入MH肉汤2ml；在第1管中加入紫茎泽兰茎提取液2ml混匀，倍比稀释至第8管，后从第8管中吸取2ml弃去，第10管加入2ml紫茎泽兰茎提取液。将制备的猪链球菌菌液用MH培养液作1:1000稀释，分别在两个组的1~9管中加入0.1ml猪链球菌菌液，使每管最终菌液浓度约为1× 104~2×104CFU/ml。将接种好的稀释管塞好塞子，置37℃孵育。以肉眼观察培养物透明、不发生浑浊变化的最高液稀释浓度作为紫茎泽兰叶和茎提取液的最低抑菌浓度。

1.2.5 紫茎泽兰不同部位提取液最低杀菌浓度的测定 测定出最低抑菌浓度后，再依次从未见细菌生长的各试管培养物中分别吸取0.1ml，接种于普通的平皿血清琼脂培养基上，轻轻摊开菌液，37℃培养24h，观察有无细菌生长。以菌落数少于5个视为无细菌生长，以无细菌生长的紫茎泽兰叶和茎提取液最低浓度作为该最小杀菌浓度。

2 结果与分析

2.1 紫茎泽兰不同部位提取液对猪链球菌的抑制效果

表1 紫茎泽兰不同部位提取液的抑菌圈直径 (mm)

紫茎泽兰叶和茎提取液对猪链球菌均有一定的抑制效果，茎提取液抑菌圈直径为14.75±0.23 mm，叶提取液抑菌圈直径为8.12±0.50mm。说明茎提取液的抑菌效果优于叶提取液(见表1)。

2.2 紫茎泽兰不同部位提取液最低抑菌浓度

表2 紫茎泽兰不同部位提取液的最低抑菌浓度(mg/ml)

紫茎泽兰叶提取液对猪链球菌的最低抑菌浓度为250mg/ml，紫茎泽兰茎提取液对猪链球菌的最低抑菌浓度为125mg/ml。说明紫茎泽兰茎提取液对猪链球菌的抑菌效果强于叶提取液(见表2)。

2.3 紫茎泽兰不同部位提取液最低杀菌浓度

紫茎泽兰叶和茎提取液对猪链球菌的最低杀菌浓度分别为500mg/ml和250mg/ml。说明同一浓度的紫茎泽兰叶和茎提取液对猪链球菌的杀菌效果茎强于叶(见表3)。

表3 紫泽兰不同部位提取液的最低杀菌浓度(mg/ml)

3 讨论

关于紫茎泽兰的研究，目前的研究主要集中在其生物学特征、危害及其控制措施等方面。大量数据表明，紫茎泽兰汁液对多种植物致病菌均有较高的抑制效果[2]。理论上讲，紫茎泽兰对动物致病菌也应有抑制作用，但对紫茎泽兰提取液抑制动物病原菌的报道几乎没有，基于这样的设想，我们开展了紫茎泽兰提取液对动物源性猪链球菌的抑菌活性研究。试验结果显示，紫茎泽兰各部分的水提取液对猪链球菌均有不同程度的抑制作用。就总体情况来看，紫茎泽兰茎的水提取液抑制效果比叶的水提取液的抑制效果好。这可能是叶中的抑菌活性成分较茎的少，也可能是因为水提取叶中的抑菌活性成分效果不如其他的溶剂好。因此，造成茎对猪链球菌的抑菌效果优于叶的具体原因，还有待进一步研究，而且，关于紫茎泽兰提取液的杀菌图谱、作用方式和作用机制也有待进一步研究。

4 结论

目前，国内对于植物提取液测定抑菌效果，还没有标准的评价方法，无法根据抑菌圈直径大小评定是否敏感，只能根据琼脂扩散实验抑菌圈的有无进行判定，抑菌圈越大说明效果就越好，至于抑菌圈达到多大才能算做敏感，还需要进一步的研究，因此还不能完全用于指导临床用药。这为猪链球菌病这一困扰养猪产业的一大疾病的治疗提供了一种新的可能的治疗药物，也为云南省紫茎泽兰的进一步研究与开发应用提供一定的科学依据。

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（2020–07–20）

S853.73+2

A

1007-1733(2020)11-0001-03