兽药残留快速检测之试剂盒筛选研究

2020-11-19刘冰

中国动物保健 2020年6期

关键词：兽药灵敏度回收率

刘冰

（石家庄市畜产品质量监测中心石家庄 050000）

1 兽药残留的概念

兽药残留是指动物源食品中的兽药残留，是畜禽动物使用药物后致动物性食品中可食用部分残留了兽药原型化合物和兽药代谢物，包括一些代谢过程中产生及伴随的杂质物质。

2 兽药快速检测方法

目前兽药检测中常用的筛选方法有试剂盒、试纸条和微生物法，其他方法如传感器和蛋白芯片。试剂盒法中主要有酶联免疫试剂盒、双向酶联免疫试剂盒、化学发光试剂盒和放射免疫试剂盒。常用的试纸条有胶体金试纸条、彩色乳胶试纸条和免疫荧光试纸条。微生物法可以用杯碟法、纸片法和琼脂扩散法等。其中酶联免疫试剂盒中最常用的是ELISA 试剂盒，它有灵敏度高、高通量、半定量以及可以用于大量样品快速筛选等优点。

3 试剂盒评价

试剂盒评价是根据灵敏度、特异性、精密度、准确度和稳定性与仪器方法比对。

3.1 标准曲线

标准曲线是判断灵敏度的指标之一，需要研究的浓度应该在标准曲线的范围内，酶联免疫的标准曲线为s 曲线，曲线中部有一段相对直线，以此为依据比较准确。但是标准曲线的影响因素很多，每次测定都需要做标准曲线，局限性较大，且标准曲线范围之外的数据不能用外延法定量。50%抑制浓度（IC50）是指反应被抑制一半时药物的浓度，即0 浓度标准溶液的吸光度值50%处所对应的待测物浓度，它是判断灵敏度的重要指标。

3.2 检测限

检测限也是判断灵敏度的主要指标之一，20 份不同来源的空白样品测定平均值加3 倍标准差即为检测限，检测限以下99%以上可能为阴性。其数值差异来源为不同动物个体，试剂盒灵敏度，不同的处理方法和不同的组织样本。动物个体差异很大需要用不同来源的空白试样进行测定，才能保证数据的准确性。

3.3 判定限

判定限是判定检测结果阴性阳性的分界线，是检测结果的依据。检测结果可以按照阳性添加的回收率折算。一般的常用药物以最高残留限量（MRL）为判定限，对于禁用药物，一般由任务下达单位给出判定限且该值应该是公认的一个指标。

3.4 准确度

准确度是用回收率表示，回收率应≥40%，优质试剂盒回收率一般在70%～120%之间，回收率过低或过高都表示试剂盒抗干扰能力较差。

3.5 与仪器方法比较

用一定数量的样品，运用试剂盒方法和仪器方法进行比较。仪器方法检测为阴性的样品，允许试剂盒有假阳性结果，仪器方法测定为阳性的结果，试剂盒不能有假阴性结果。

4 特异性

特异性是指方法在一个混合体系中对特异目标分析物的识别能力，特异性的测定是采用与待检药物同类药物、类似物、代谢物或者可能的联合使用药物测定IC50 来计算交叉反应率得来。比如选择β 兴奋剂试剂盒的时，需要看药物的交叉反应率（表1）。

表1 交叉反应率

假设试剂盒的IC50 都是1ppb，判定限也为1ppb，图中试剂盒A 克伦特罗和沙丁胺醇的交叉反应率均为100%，则两种药物在1ppb 都可以检出，反之图中试剂盒B 克伦特罗为100%，沙丁胺醇为10%，则说明克伦特罗在IC50 为1ppb 左右就可以检出，而沙丁胺醇则需要10ppb 才可以检出，这样就达不到检测要求。试剂盒C 同理。所以要根据检测任务来选择合适的试剂盒，才能得到满意结果。