气相色谱法测定香砂养胃丸中乙酸龙脑酯、龙脑及樟脑的含量

刘中和 姚卫波

（1.南华附二醴陵兆和医院 湖南醴陵 412200；2.临湘市聂市镇西医内科诊所）

1 前言

香砂养胃丸是一种使用率较高的中成药， 主要药效成分包括甘草、大枣、木香、砂仁、制半夏、茯苓、陈皮、生姜等，临床用于胃阳不足、湿阻气滞所致胃痛的治疗，具有温中和胃的作用[1]。 香砂养胃丸在治疗嘈杂不适、不思饮食、胃上部隐痛、四肢倦怠、呕吐酸水等方面均有临床应用，并有相关报道[2]。 现代药理学研究证实，香砂养胃丸的主要药效成分为乙酸龙脑酯、龙脑及樟脑，上述药物能够发挥抗菌、抗炎、镇痛、抗溃疡、止泻等功效，因而对乙酸龙脑酯、龙脑及樟脑等含量水平的控制是保证药效发挥的前提[3]。鉴于当前药典中没有关于香砂养胃丸中乙酸龙脑酯、龙脑及樟脑含量的测定方法，本文通过气相色谱法（GC）对香砂养胃丸中乙酸龙脑酯、龙脑及樟脑的含量进行测定，可为香砂养胃丸中主要成分的含量控制提供依据。

2 材料与方法

2.1 仪器与材料

仪器：电子天平、气相色谱仪。

材料：乙酸龙脑酯对照品（含量为99.60%，批号为110759-201105）、樟脑对照品（含量为98.70%，批号为110747-201409）、龙脑对照品（含量为96.80%，批号为110881-201508）（所有标准质控品均来源于中国食品药品检定研究院）；环己烷、无水乙醇（分析纯）；香砂养胃丸（从不同药品生产厂家购买，共8批，均有明确的生产厂家、批准文号）。

2.2 方法

对香砂养胃丸中的乙酸龙脑酯、龙脑及樟脑等含量使用GC 测定，具体如下。

（1） 色谱条件：色谱柱参数：30 m×0.320 mm×0.50 μm；进样口温度：230℃；以氮气为载气，流速：4.0 mL/min；氮气、氢气与空气比例：1∶1∶10；进样量：1 μL；选择分流进样，分流比：10∶1；氢火焰离子检测器对应温度：280℃。通过程序完成柱温升温，初始柱温：60℃，以每分钟升高5℃升高到130℃，保持5 min，然后以每分钟20℃升高到230℃，维持5 min。

（2）制备对照品溶液，分别称取乙酸龙脑酯、龙脑、樟脑对照品 17.19、10.82、11.38 mg，使用无水乙醇将其制备成不同浓度的对照品，其浓度分别为乙酸龙脑酯 34.24 μg/mL、龙脑 21.49 μg/mL、樟脑45.06 μg/mL。

（3）制备供试品溶液，选取8 g 供试品，精细研磨，按照挥发油测定方法完成提取操作，加入3 mL环己烷，加热至沸腾，持续1 h，静置30 min，用5 mL容量瓶提取液体，使用1 mL 环己烷对挥发油测定器冲洗并倒入5 mL 容量瓶中，用环己烷稀释至刻度线位置，充分混合后摇匀、过滤。

（4）配制对照品溶液，横坐标为对照品进样量（ng），纵坐标为峰面积，绘制不同成分标准曲线，得到线性回归方程。 研究证实进样量在一定范围内同峰面积有良好的线性关系。

（5）稳定性试验分析，选择配制的同一供试品溶液，并在 0、4、12、24 h 分别进行测定，计算不同供试品峰面积的相对标准偏差（RSD）。

（6）重复性试验，选择同一供试品，将其制作成6 份供试品溶液， 分别对3 种不同成分含量水平予以测定，计算测定结果的RSD。

（7）精密度试验分析，准确吸取 1 μL 对照品溶液，根据确定的色谱分析条件进行重复性试验，共6 次，计算不同成分峰面积积分值，最终得到不同成分峰面积的RSD。

（8）回收率试验分析，准确称取供试品6 份，其中，乙酸龙脑酯、龙脑及樟脑的对应含量分别为0.017、0.011、0.039 mg/g，每份含量 4 g。 将其加入已知浓度的混合对照品溶液中， 对不同供试品回收率予以计算，确定其回收率。

（9）对8 批次的香砂养胃丸进行供试品制备，然后根据色谱条件完成不同含量的测定。

2.3 统计学方法

采用统计学软件SPSS21.0 分析数据，其中，计量资料（±s），计数资料（n，%）。

3 结果

通过稳定性试验分析，乙酸龙脑酯、龙脑及樟脑峰面积RSD 计算结果分别为1.28%、1.43%、1.46%。重复性试验分析显示，乙酸龙脑酯、龙脑及樟脑对应含量测定的RSD 分别为3.14%、2.38%、2.15%，结果证实该测定方法重复性较好。 精密度试验分析显示乙酸龙脑酯、龙脑及樟脑峰面积RSD 计算结果分别为0.68%、0.33%、0.63%，测定方法精密度较好。回收率试验分析，乙酸龙脑酯回收率在81.85%～86.38%，平均回收率为（83.56±0.92）%；龙脑回收率在94.47%～101.46%，平均回收率为（98.24±0.81）%；樟脑回收率在 85.45%～91.92%，平均回收率为（87.15±0.84）%，具体数据详见表1，结果表明该检测方法对应的回收率较高。通过对8 批次香砂养胃丸中乙酸龙脑酯、龙脑及樟脑的含量测定，不同批次药品上述3 种成分质量分数有偏差，但是偏差不明显，具体检测结果详见表2。

表1 香砂养胃丸不同成分回收率

表2 8 批次香砂养胃丸不同成分质量分数检测结果（单位：%）

4 讨论

本研究使用GC 对香砂养胃丸中乙酸龙脑酯、龙脑及樟脑的含量进行测定分析，供试品提取时间约为1 h。 从不同角度对试验予以分析，结果证实本研究中所确定的色谱条件能够满足不同流速、升温条件、进样口、检测器温度等条件下的测定。

通过对重复性、回收率等进行相关试验分析，证实了GC 对香砂养胃丸中乙酸龙脑酯、龙脑及樟脑的含量测定有良好的重复性、稳定性以及较高的回收率[4]。不同批次香砂养胃丸中乙酸龙脑酯含量水平绝大多数都低于樟脑。 药典中要求乙酸龙脑酯含量水平需要超过樟脑，考虑到药物主要成分会直接影响疗效与使用安全性，而且中药材容易出现以次充好问题以及假冒伪劣产品[5]，使用GC 对主要成分的含量测定能够确认不同批次香砂养胃丸的药效成分特点，对提高香砂养胃丸的生产质量具有重要价值[6]。使用GC 对香砂养胃丸中乙酸龙脑酯、龙脑及樟脑的含量进行测定，获取的结果可直观了解主要成分在药物中的占比，实际应用期间需要严格按照操作流程进行，有效控制色谱气相检测条件。 综上所述，GC 检测结果安全可靠，能够用于香砂养胃丸中乙酸龙脑酯、龙脑及樟脑含量的测定。