2019年新疆部分地区猪繁殖与呼吸综合征病毒抗体检测与分析

常军帅屈勇刚*于会举 吴圆圆 魏 其谷思颖张家瑞 李 静李 岩

（1石河子大学动物科技学院，新疆石河子 832003；2新疆生产建设兵团畜牧兽医工作总站，新疆乌鲁木齐 830063）

猪繁殖与呼吸综合征（Porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS）是以母猪发生繁殖障碍和幼猪表现呼吸系统疾病为主要症状的病毒性传染病，部分患病生猪耳部和腹部皮肤呈蓝紫色，故称“蓝耳病”。1987年美国发现此病后称其为“神秘猪病”，在随后极短的时间内通过贸易往来及空气传播、接触传播、胎盘传播等多种传播途径使全球养猪业出现“流产风暴”，严重影响了生猪养殖产生的经济效益，被世界动物卫生组织（OIE）列为必须报告的动物疫病，我国将PRSS列为二类动物疫病，于2008年被我国规定为免疫接种病种[1,2]。PRRS在我国的流行包括两个开始阶段，第一阶段以1996年郭宝清等在我国北京市某猪场母猪流产的胎儿内发现猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）为起点；2006年夏季开始的第二阶段——我国多地暴发了以高热为特征的高致病性猪繁殖与呼吸综合征（HP-PRRS），HP-PRRS给我国养猪业发展造成了严重威胁，母猪的流产率达30%，仔猪死亡率近80%，被列为一类动物疫病[3-6]。根据遗传进化的差异，可将PRRSV分为美洲型和欧洲型，我国以流行美洲型为主。由于PRRSV的毒株多样性、广泛变异加剧、免疫抑制及抗体依赖增强作用（ADE），导致此病在我国难以控制且无特效药，采用高效的抗体检测技术来改善免疫程序可以对本病起到更好的预防作用。为了解新疆部分地区PRRSV抗体水平，本试验于2019年在新疆6个地区采集了599份血清样品，进行了PRRSV抗体检测分析，以期为我区PRRS的免疫防控提供流行病学数据。

1 材料与方法

1.1 样品

2019年1月至2019年12月期间从新疆巴州、伊宁、塔城、阿克苏、奎屯、石河子6个地区的11个规模化养猪场，共采集599份血清样品。其中哺乳仔猪75份、保育猪125份、育肥猪35份、后备猪38份、种公猪87份、繁殖母猪239份。

1.2 材料和仪器

诊断试剂盒（99-40959）为PRRSV的ELISA抗体检测试剂盒，购自北京爱德士元亨生物科技有限公司；兽用一次性采血器5 mL为武汉民生医用器材有限公司产品；微量移液器（Eppendorf）、自动酶标仪（美国BioTek公司生产）；1.5 mL的EP管与枪头若干。

1.3 方法

1.3.1 样品处理

根据猪只日龄的不同从耳缘静脉或前腔静脉采集3～5 mL血液，室温下静置析出清亮、无溶血的血清，收集至EP管直接检测。

1.3.2 间接ELISA检测法

根据PRRSV的ELISA抗体检测试剂盒说明书进行操作。操作前将所有试剂和反应板避光恢复到室温（20～25℃）。先将已作40倍稀释（5 μL血清样品加入195 μL的样品稀释液）的血清样品100 μL、100 μL未做稀释的阴性和阳性样品（各设2组）加入抗原包被板内，于18～26℃条件下孵育30 min。孵育后洗涤3次，加入100 μL酶标抗体，再次孵育30 min，然后洗涤3次。最后加入100 μL的TMB底物孵育15 min，加入100 μL终止液使反应终止，用酶标仪于650 nm处进行测定并保留数据。

1.3.3 结果判定

试验成立的条件是阴性对照的OD650nm平均值≤0.150，阳性对照OD650nm平均值减去阴性对照OD650nm平均值的差≥0.150。若不成立，重新进行试验。

其中S＝样品OD650nm值－阴性对照OD650nm平均值，P＝阳性对照OD650nm平均值－阴性对照OD650nm平均值。计算S/P值，S/P≥0.4为阳性，S/P＜0.40判为阴性。

1.3.4 数据分析

使用SPSS软件对数据进行统计，分析PRRSV抗体的S/P平均值、标准差、阳性率、阴性率，用变异系数来表示各类别猪群的抗体的离散度，其中变异系数＝（标准差÷S/P平均值）×100%。

2 结果

2.1 11个规模化养猪场PRRSV抗体检测结果

在来自11个规模化养猪场的599份血清样品中，PRRSV抗体ELISA检测平均阳性率为92.82%（556/599）；S/P平均值为2.17±1.43，变异系数为65.83%。A～K各猪场阳性率都高于70.00%，除B场和K场外阳性率均高于90.00%。A～K各猪场变异系数最高的为A场（84.07%），最低的为H场（24.98%）。不同猪场之间PRRSV平均抗体水平存在差异，K场和A、D、E、F、G、H、I、J这8个场差异显著（＜0.05），D场和A、B、E、F、G、H、I、J这8个场差异不显著（＞0.05）。结果见表1。

2.2 各类别猪群PRRSV抗体检测结果

有2个猪群阳性率达到100.00%，分别是育肥猪（35/35）和后备猪（38/38），哺乳仔猪的阳性率最低，为80.00%（60/75）。育肥猪的 S/P值最高（3.12±0.76），哺乳仔猪的S/P值最低（1.73±1.59）。变异系数最高的为哺乳仔猪（91.83%）、最低的是育肥猪（24.37%）。不同猪群之间PRRSV平均抗体水平存在差异，种公猪和哺乳仔猪、育肥猪差异显著（＜0.05）；保育猪和哺乳仔猪、后备猪、种公猪差异不显著（＞0.05）。结果见表2。

表1 新疆11个规模化养猪场PRRSV抗体检测结果

表2 各类别猪群PRRSV抗体检测结果

3 讨论与分析

3.1 11个规模化养猪场免疫效果评价

新疆11个规模化养猪场的PRRSV平均抗体阳性率为92.82%（556/599），A～K各猪场的PRRSV抗体阳性率都高于国家规定的抗体水平标准（70%），能够达到规模化养猪场控制PRRS疫情所达到的抗体合格率（90%以上） 有 A、C、D、E、F、G、H、I、J 场[7]。2011年张鲁安等检测到新疆部分地区的PRRS免疫抗体阳性率为55.52%[8]。2011年4月至2013年3月期间，席悦曾对新疆奇台县进行PRRSV抗体检测的阳性率为78.19%[9]。2013年10月至2014年1月期间，王礼伟等从石河子市周边13个规模化养猪场中的726份血清样品中检测出该地区PRRS免疫抗体阳性率平均为87.33%[10]。陆民2016年曾对克拉玛依市的PRRSV抗体进行调查，发现该市5个区的抗体阳性率都不低于94.58%[11]。宋敏曾通过ELISA检测试验得出新疆某母猪存栏量达2 500头的规模化养猪场的PRRSV抗体阳性率为90.23%[12]。以上结果说明，近几年新疆地区的PRRSV抗体阳性率呈逐年递增趋势。D、F、G、H猪场的变异系数均≤40%，抗体整齐度高，免疫状况良好。A、B、K猪场的变异系数均大于60%，对抗体为阴性的猪只还需要进行补免。新疆地区整体的PRRSV抗体变异系数为65.83%，造成抗体水平差异变大的原因有很多，可能有疫苗质量不高、疫苗的保存和注射操作不规范、免疫程序制定不合理、饲养管理出现失误、母源抗体干扰及免疫抑制疾病的感染等。

3.2 各类别猪群抗体的差异

统计试验结果发现，各类别猪群的PRRSV抗体水平存在差异。其中哺乳仔猪和保育猪的抗体阳性率较低，分别为 80.00% （60/75）和 86.40% （108/125）；最高的是后备猪和育肥猪，均为100.00%；种公猪和繁殖母猪抗体阳性率分别为96.55%（84/87）和96.65%（231/239）。哺乳仔猪和保育猪抗体阳性率低的原因，一方面可能是哺乳仔猪临近断奶，母源抗体水平逐步降低；另一方面可能是当哺乳仔猪转至保育圈舍时由于断奶及环境的改变产生应激，易造成部分猪感染发病，建议及时进行疫苗免疫，提高猪只的自身抗体水平。繁殖母猪和种公猪的变异系数分别为72.91%和45.67%，高于农业农村部关于阳性抗体变异系数小于40%的规定，说明这两个猪群PRRSV抗体水平整齐度差，需要引起足够的重视[13]。