LSP1基因单核苷酸多态性与乳癌临床病理特征关系

李睿 李革 张司敏 刘溪 苏红梅

[摘要] 目的 探討淋巴细胞特异蛋白1（LSP1）致病基因位点rs3817198多态性与乳癌临床病理特征的相关性，为乳癌的诊疗提供新线索。方法 对105例乳癌病人及382例体检健康者LSP1 rs3817198位点基因型进行检测，分析乳癌临床病理参数与基因型的相关性;Logistic回归方法分析基因位点与乳癌发病风险之间的关系。结果 乳癌组的初潮年龄小于健康对照组（t=5.291，P<0.05），无母乳喂养史、无生育史、肿瘤家族史与乳癌发病相关（χ2=3.930～7.265，P<0.05）。乳癌组与对照组LSP1 rs3817198位点的基因型分布差异有显著性（χ2=8.100，P<0.05）。Logistic回归分析显示，LSP1 rs3817198位点TC、CC基因型增加乳癌的发病危险性（TC基因型：OR=2.017，95%CI=0.910～4.471，P<0.05;CC基因型：OR=2.684，95%CI=1.318～5.463，P<0.05）;绝经、有哺乳史降低了乳癌发生风险（绝经：OR=0.998，95%CI=0.998～0.999，P<0.05;有哺乳史：OR=0.064，95%CI=0.010～0.408，P<0.05），而有肿瘤家族史及LSP1基因rs3817198位点TC、CC基因型增加了乳癌发生风险（肿瘤家族史：OR=2.998，95%CI=1.456～6.172，P<0.05;CC+TC基因型：OR=3.051，95%CI=1.185～7.855，P<0.05）。基因型TC、CC乳癌病人的孕激素受体阴性率显著高于基因型TT病人（χ2=5.970，P<0.05）。结论LSP1 rs3817198位点基因型TC、CC可能与乳癌预后不良有关，LSP1 rs3817198位点基因型可作为检测妇女乳癌易感性的生物标志物。

[关键词] 淋巴细胞特异蛋白1;多态性，单核苷酸;乳房肿瘤;病理学，临床

[中图分类号] R737.9  [文献标志码] A  [文章编号] 2096-5532（2020）06-0719-04

doi：10.11712/jms.2096-5532.2020.56.174 [开放科学（资源服务）标识码（OSID）]

[网络出版] https：//kns.cnki.net/kcms/detail/37.1517.R.20201016.1124.001.html;

[ABSTRACT] Objective To investigate the association of the polymorphism of the pathogenic gene locus rs3817198 of lymphocyte specific protein 1 （LSP1） with the clinicopathological features of breast cancer， and to provide new clues for the diagnosis and treatment of breast cancer.  Methods The genotype of LSP1 rs3817198 locus was determined for 105 breast cancer patients and 382 healthy persons who underwent physical examination， and the association between clinicopathological parameters of breast cancer and genotype was analyzed. A Logistic regression analysis was used to investigate the association between this gene locus and the risk of breast cancer.  Results The breast cancer group had a significantly younger age of menarche than the healthy control group （t=5.291，P<0.05）， and no history of breastfeeding， no history of childbirth， and a family history of tumor were associated with breast cancer （χ2=3.930-7.265，P<0.05）. There was a difference in the genotype distribution of LSP1 rs3817198 between the breast cancer group and the healthy control group （χ2=8.100，P<0.05）. The Logistic regression analysis showed that TC and CC genotypes of the LSP1 gene rs3817198 increased the risk of breast cancer （TC genotype： OR=2.017，95%CI=0.910-4.471，P<0.05; CC genotype： OR=2.684，95%CI=1.318-5.463，P<0.05）; menopause （OR=0.998，95%CI=0.998-0.999，P<0.05） and a history of breastfeeding （OR=0.064，95%CI=0.010-0.408） reduced the risk of breast cancer; a family history of tumor （OR=2.998，95%CI=1.456-6.172，P<0.05） and TC+CC genotype of the LSP1 gene rs3817198 （OR=3.051，95%CI=1.185-7.855，P<0.05） increased the risk of breast cancer. The breast cancer patients with TC and CC genotypes had a significantly higher negative rate of progesterone receptor than those with TT genotype （χ2=5.970，P<0.05）.  Conclusion The TC and CC genotypes of the LSP1 gene rs3817198 may be associated with the poor prognosis of breast cancer， and the genotype of the LSP1 gene rs3817198 can be used as an important biomarker to detect womens susceptibility to breast cancer.

[KEY WORDS] lymphocyte specific protein 1; polymorphism， single nucleotide; breast neoplasms; pathology， clinical

乳癌为女性最常见恶性肿瘤之一，近年来其发病率逐年上升，居女性常见恶性肿瘤发病之首[1]。有研究显示，2015年我国女性乳癌新发病例高达26.86万，死亡6.95万[2]，总发病数仅次于美国[3-4]。目前，乳癌的病因尚不明确，其发生和发展是一个复杂的多步骤过程，受多种因素的影响。有研究显示，淋巴细胞特异蛋白1（LSP1）基因为乳癌易感性正相关基因，与正常乳房组织的生长、退化、纤维化以及乳房密度等有关[5-6]。本研究分析LSP1基因位点rs3817198单核苷酸多态性（SNP）与乳癌临床病理特征的相关性，为乳癌的诊疗提供线索。

1 資料与方法

1.1 一般资料

选取2013年6月—2018年1月于青岛市市立医院就诊的乳癌病人105例（乳癌组），均为女性，年龄40～73岁，平均（51.28±11.29）岁。以同期年龄与其匹配的体检健康者382例作为对照组。采集两组研究对象血液样本，收集两组病人年龄、家族史等一般资料及乳癌组病人术后病理资料。本研究经医院伦理委员会审查通过，所有参与者均签署知情同意书。

1.2 LSP1 rs3817198位点基因型检测

根据GenBank dbSNP数据库LSP1的SNP位点rs3817198设计引物和TaqMan探针进行基因位点检测，其序列见表1。PCR反应体积为25.0 μL，内含：DNA模板50 ng，2×TaqMan Universal PCR Master Mix 10.0 μL（美国ABI公司），SNP位点PCR引物各0.5 μL，TaqMan探针各0.5 μL。反应在PCR扩增仪（美国BioRad公司）中进行。扩增参数：95 ℃预变性5 min;95 ℃变性15 s，63 ℃退火1 min，共35个循环。用不同的荧光报告基团标记的TaqMan探针分别与野生型和突变型基因杂交，结果由随机软件自动判读。

1.3 统计学方法

应用SPSS 22.0软件进行统计学处理，计量资料用±s表示，数据间比较采用方差分析和秩和检验;计数资料比较采用χ2检验。采用Logistic回归模型进行单因素分析，采用非条件逻辑回归计算相对危险度的近似估计值优势比（OR）估计相关因素与乳癌发病的关联度。

2 结  果

2.1 两组一般资料比较

乳癌组初潮年龄低于对照组，无母乳喂养史、未生育、有肿瘤家族史者占比高于对照组，差异有统计学意义（t=5.291，χ2=3.930～7.265，P<0.05）;两组年龄、绝经年龄、流产史等差异无显著意义（P>0.05）。见表2。

2.2 LSP1 rs3817198位点基因型与乳癌关系

乳癌组与对照组LSP1 rs3817198位点的基因型分布差异有显著性（χ2=8.100，P<0.05）。Logistic回归分析显示，LSP1 rs3817198位点TC、CC基因型增加乳癌的发病危险性（TC基因型：OR=2.017，95%CI=0.910～4.471，P<0.05;CC基因型：OR=2.684，95%CI=1.318～5.463，P<0.05）。见表3、4。

2.3 LSP1 rs3817198位点基因型与乳癌临床病理参数关系

LSP1基因rs3817198位点基因型与乳癌病人的孕激素受体（PR）状态显著相关，差异有统计学意义（χ2=5.970，P<0.05），而与肿瘤大小、淋巴结转移状态、雌激素受体（ER）状态、乳癌分子分型等无相关性 （P>0.05）。见表5。

2.4 乳癌致病危险因素的Logistic回归分析

非条件Logistic回归分析显示，绝经状态、有哺乳史、肿瘤家族史、LSP1 rs3817198位点基因型等与乳癌发病相关，其中绝经、有哺乳史降低了乳癌患病风险（绝经：OR=0.998，95%CI=0.998～0.999，P<0.05;有哺乳史：OR=0.064，95%CI=0.010～0.408，P<0.05），而有肿瘤家族史以及LSP1基因rs3817198位点TC、CC基因型增加了乳癌发生的风险（肿瘤家族史：OR=2.998，95%CI=1.456～6.172，P<0.05;CC+TC基因型：OR=3.051，95%CI=1.185～7.855，P<0.05）。见表6。

3 讨  论

乳癌严重危害女性的健康，其发生、发展受多种因素影响，其发病机制尚不明确，可能与基因和环境密切相关。个体因环境刺激产生的生理反应可被多种遗传变异调节。近年来研究表明，一小段基因变异可引起无数表型，从而在一定环境下影响疾病的易感性。SNP主要是指在基因组水平上由单个核苷酸变异所引起的DNA序列多态性，其在人群中的发生频率大于1%，包括单碱基的转换、颠换，它是人类可遗传的变异中最常见的一种[7]。2007年，EASTON等[5]通过全基因组研究首次发现，位于LSP1基因的第10内含子rs3817198位点与乳癌的发生相关[8]。LSP1是在造血细胞系和内皮细胞中特异表达的一种与微丝结合的骨架蛋白。LSP1基因位于11号染色体，编码淋巴细胞、中性粒细胞、内皮细胞内的F肌动蛋白结合蛋白，同时调节中性粒细胞的运动、纤维蛋白原基质蛋白的黏附以及穿越内皮细胞层等[9]。国内对此基因的研究较少。本研究结果显示，乳癌组LSP1基因rs3817198位点的基因型分布与对照组比较差异有统计学意义，其基因型CC、TC可显著增加乳癌的患病风险。

本文研究结果显示，哺乳时间长、初潮年龄晚为乳癌的保护因素，可能与经产妇的乳房组织的增殖减弱、孕期激素水平的改变有关[10-11];而无生育史、月经初潮年龄早与乳癌的发病有关，其作用机制可能与机体长时间处于较高水平性激素的环境有关，这与多个流行病学研究结果一致[12-14]。本研究未发现绝经年龄与乳癌的发病危险有关。乳癌的发病受遗传、环境、生活方式等的影响，而这些因素在不同地区存在差异，这可能是导致国内外甚至不同地区的研究结果不完全相同的原因之一[2，15]。本文非条件Logistic回归分析显示，绝经状态、哺乳史、肿瘤家族史、LSP1基因rs3817198位点CC+TC基因型与乳癌发病相关，其中绝经、有哺乳史降低了乳癌的发病风险，而有肿瘤家族史、LSP1 CC+TC基因型为发生乳癌的危险因素。

本文LSP1基因rs3817198位点基因型与乳癌临床病理相关性研究结果显示，基因型TC+CC的PR阴性率显著高于TT基因型者，而兩组ER状态差异无统计学意义，可能与ER、PR等在乳癌原发肿瘤与复发肿瘤组织间表达存在差异有关，提示我们在进一步研究中需限定研究对象条件[16-17]。本文结果显示，LSP1 rs3817198位点基因多态性与PR阴性有关，而PR阴性的乳癌病人常预后不良[18-20]，提示LSP1基因rs3817198位点基因型TC+CC可能与预后不良有关;而LSP1 rs3817198位点基因多态性与乳癌分子分型无显著相关性，分析原因可能是不同突变基因对不同类型、不同阶段的乳癌的作用并不一致[21-23]。此外，本研究存在局限性，即选取的乳癌组样本数量相对较少，结果存在一定的偏倚，下一步研究需增加样本量，进一步明确基因突变与乳癌的组织学分级、分子分型、淋巴结转移、5年存活率等的相关性。

综上所述，绝经、有哺乳史降低了乳癌的患病风险，而有肿瘤家族史及LSP1基因rs3817198位点基因型TC+CC则增加了乳癌发生的风险，LSP1基因rs3817198位点基因多态性与PR阴性表达有关，LSP1基因rs3817198位点基因型TC+CC可能与预后不良有关。LSP1基因rs3817198位点多态性可能为乳癌发病的独立因素。

[参考文献]

[1] 吴春晓，郑莹，鲍萍萍，等. 2003—2012年上海市户籍女性乳腺癌发病特征分析[J]. 中华预防医学杂志， 2017，51（8）：692-697.

[2] CHEN W Q， ZHENG R S， BAADE P D， et al. Cancer statistics in China， 2015[J]. CA： A Cancer J Clin， 2016，66（2）：115-132.

[3] ZUO T T， ZHENG R S， ZENG H M， et al. Female breast cancer incidence and mortality in China， 2013[J]. Thorac Cancer， 2017，8（3）：214-218.

[4] 王乐，张玥，石菊芳，等. 中国女性乳腺癌疾病负担分析[J]. 中华流行病学杂志， 2016，37（7）：970-976.

[5] EASTON D F， POOLEY K A， DUNNING A M， et al. Genome-wide association study identifies novel breast cancer susceptibility loci[J]. Nature， 2007，447（7148）：1087-1093.

[6] KELLER B M， MCCARTHY A M， CHEN J B， et al. Asso-ciations between breast density and a panel of single nucleotide polymorphisms linked to breast cancer risk：a cohort study with digital mammography[J]. BMC Cancer， 2015，15：143.

[7] 王冬梅，祁玉娟. XRCC1基因多态性与胃癌易感性关系的研究进展[J]. 青海医药杂志， 2018，48（5）：76-80.

[8] TANG J Z， LI H， LUO J S， et al. The LSP1 rs3817198 T> C polymorphism contributes to increased breast cancer risk：a meta-analysis of twelve studies[J]. Oncotarget， 2016，7（39）：63960-63967.

[9] TAMIMI R M， LAGIOU P， CZENE K， et al. Birth weight，breast cancer susceptibility loci，and breast cancer risk[J]. Cancer Causes & Control， 2010，21（5）：689-696.

[10] PHIPPS A I， ICHIKAWA L， BOWLES E J A， et al. Defining menopausal status in epidemiologic studies： a comparison of multiple approaches and their effects on breast cancer rates[J]. Maturitas， 2010，67（1）：60-66.

[11] AWATEF M， OLFA G， IMED H， et al. Breastfeeding reduces breast cancer risk：a case-control study in Tunisia[J]. Cancer Causes & Control， 2010，21（3）：393-397.

[12] 吴菲，何丹丹，赵根明，等. 上海市女性乳腺癌危险因素分析与风险预测模型研究[J]. 中华肿瘤防治杂志， 2017，24（12）：795-801，807.

[13] 杨璟，马利军，王伏生. 乳腺筛查评级BI-RADS 4类女性乳腺癌影响因素分析[J]. 中华临床医师杂志（电子版）， 2017，11（3）：520-525.

[14] 陈颖，李红. 多普勒超声对乳腺癌的分型及相关危险因素[J]. 中国地方病防治杂志， 2017，32（2）：217-218.

[15] 张柏林，吴金其，郑荣寿，等. 女性乳腺癌发病危险因素的病例-对照研究[J]. 癌症进展， 2017，15（4）：395-398.

[16] AURILIO G， DISALVATORE D， PRUNERI G， et al. A meta-analysis of oestrogen receptor，progesterone receptor and human epidermal growth factor receptor 2 discordance between primary breast cancer and metastases[J]. European Journal of Cancer， 2014，50（2）：277-289.

[17] 杨宇峰，庾建中，林思园，等. 乳腺癌原发肿瘤和复发肿瘤间ER、PR和HER-2表达不一致及其对患者生存的影响[J]. 临床与实验病理学杂志， 2019，35（3）：268-273.

[18] 郭扬. 三阴性乳腺癌原发灶与转移淋巴结间ER、PR、Her-2表达差异的研究[D]. 沈阳：中国医科大学， 2018.

[19] 刘英，毛艳，曹伟红，等. PR在Luminal B HER2（-）腋窝淋巴结阴性乳腺癌中的预后价值[J]. 中华内分泌外科杂志， 2017，11（2）：101-106.

[20] 向国敏，刘晓珍，牛昀. 雄激素受体和表皮生长因子受体在ER阴性PR阴性乳腺癌中的表达意义研究进展[J]. 中华病理学杂志， 2018，47（3）：226-229.

[21] 朱聪慧，任丽. 乳腺转移性癌的体细胞突变基因相关研究[J]. 海军医学杂志， 2019，40（5）：408-412.

[22] 李恒宇，盛湲. 遗传性乳腺癌基因检测的10个热点[J]. 外科理论与实践， 2019，24（5）：406-411.

[23] 刘新兰，张海霞，刘尧邦，等. C1236T、G2677T/A和C3435T基因多态性与乳腺癌分子分型的关系及意义[J]. 天津医药， 2016，44（4）：389-393.

（本文编辑 黄建鄉）