西藏班戈县牦牛、羊布病抗体血清学检测

扎西次仁，苏中华，格桑卓玛，扎西旺杰，罗润波，索朗斯珠*

（1.西藏那曲市班戈县农牧科学技术服务站，西藏 班戈 852501；2.西藏自治区动物疫病预防控制中心西藏自治区畜牧总站，西藏 拉萨 850000；3.西藏农牧学院，西藏 林芝 860000）

布病又称为布氏杆菌病或布鲁菌病，是由布鲁菌引起的人兽共患传染病。公畜患病后可引起睾丸炎、附睾炎等，母畜患病后多发生流产、早产、不孕。布鲁菌是布鲁菌属成员，有9个生物种、21个生物型，为需氧菌[1]。患病动物可长期带菌。该病历史悠久，世界性分布，给畜牧业和人类健康带来严重危害[2-3]。我国分布也较为广泛[4-8]。

西藏班戈县为纯牧业县，畜牧业的发展与百姓的生活息息相关，为保障畜牧业的健康发展和牧民健康，2019年笔者对班戈县10个乡镇的牦牛和羊进行了布病抗体的血清学检测。

1 材料和方法

1.1 血清

2019年4月至6月从西藏班戈县10个乡镇共采集牦牛血清460头份，羊血清454头份。

1.2 仪器

离心机（金坛市盛蓝仪器制造有限公司，型号：TGL-12B）、移液器（eppendorf，100μL、10μL、300μL排枪）、纯水仪（杭州东邦科技有限公司，型号：DB-S）、恒温培养箱（上海博迅实业有限公司医疗设备厂，型号：BSC-250）、酶标仪（雷杜公司，型号：RT-2100C）。

1.3 材料

虎红平板凝集试验抗原（中国兽医药品监察所，批号：20180920），布氏杆菌病阴性血清（中国兽医药品监察所，批号：201801），布氏杆菌病阳性血清（中国兽医药品监察所，批号：201802），牛布病抗体酶联免疫分析试剂盒（上海泸鼎生物科技有限公司，产品批号：19-0827-D15），羊布病抗体酶联免疫分析试剂盒（上海泸鼎生物科技有限公司，产品批号：19-0827-D15）。

1.4 试验方法

1.4.1 虎红平板凝集试验 虎红平板凝集试验参考中华人民共和国出入境检验检疫行业标准《布氏杆菌检疫技术规范》（SNT1088-2010）。严格按照标准要求进行操作。

结果判定：当阴性血清对照不出现凝集（-），阳性血清对照出现凝集（+）时，则试验成立，可以进行结果判定，否则试验应重做。在4 min内出现肉眼可见凝集现象(出现凝块或颗粒物)者判为阳性（+），不出现凝集者判为阴性（-）。出现阳性反应的样品，用ELISA试剂盒进行复检。

1.4.2 酶联免疫吸附试验 酶联免疫吸附试验严格按照说明书进行操作检测，牛、羊布病抗体酶联免疫分析试剂盒操作方法和判定标准相同。

试验有效性：阳性对照孔平均值≥1.00；阴性对照平均值≤0.20。

临界值（CUT OFF）计算：临界值=阴性对照孔平均值+0.15。

阴性判定：样品OD值＜临界值（CUT OFF）者为布病抗体(Brucellosis Ab)阴性。

阳性判定：样品OD值≥临界值（CUT OFF）者为布病抗体(Brucellosis Ab)阳性。

2 结果

虎红平板凝集试验结果显示，阴、阳性对照孔成立，试验有效。牦牛血清虎红平板凝集试验结果显示，检测总血清数460头份，阳性血清数7头份，总体阳性率1.52%。羊血清虎红平板凝集试验结果显示，检测总血清数454头份，阳性血清数13头份，总体阳性率2.86%。具体试验结果见表1、表2。

针对牦牛、羊血清抗体虎红平板凝集试验阳性样品分别进行ELISA抗体检测，结果显示，阴阳性对照孔均成立，试验有效；复检血清样品中均未检测出布病抗体，阳性率均为0。具体试验结果见表3、表4。

3 讨论

虎红平板凝集试验和ELISA检测结果显示，班戈县牦牛、羊血清中未检测到布氏杆菌抗体。结合流行病学调查资料，初步判定班戈县牦牛和羊群中无布氏杆菌病的流行。

表1 班戈县牦牛血清布病抗体虎红平板凝集试验检测结果

表2 班戈县羊血清布病抗体虎红平板凝集试验检测结果

表3 班戈县牦牛血清布病抗体ELISA复检结果

表4 班戈县羊血清布病抗体ELISA复检结果

张可荣[9]等人应用虎红平板凝集试验对2011年采自西藏的557头份牦牛血清进行了检测，结果显示阳性率为5.9%。王一飞[10]等人应用酶联免疫吸附试验(ELISA)法对2016年在西藏采集的572头份牦牛血清进行抗体检测，结果显示总体阳性率17.66%。而本次班戈县检测结果显示抗体检出率为0，这有可能是本次检测量不够大，可以加大样品检测量以确诊是否有布病的流行。也可能是因为班戈县基本无牛、羊引入，当地无布病的流行。

本次实验引用虎红平板凝集和ELISA两种方法对牦牛和羊血清进行了布病抗体的检测，虎红平板检测结果阳性样品用ELISA法进行复检，复检结果显示无阳性样品。这表明虎红平板凝集试验存在一定的假阳性情况，该办法适合用于大批量样品的初步筛查检测。而ELISA检测结果更加可信，适合用于布病的确诊试验，或者用于虎红平板凝集试验阳性样品复检使用[11]。

本次实验结果显示班戈县常见家畜，牦牛和羊中无布病的流行，但是班戈县地处交通要道，是牛、羊跨地区运输的必经之地，存在感染的风险，因此还需要定期对家畜进行布病的筛查工作。特别是有引进牛、羊的养殖场或者合作社一定要做好监测工作，切不可大意，布病监测结果为阴性的畜群方可合群饲养。