蜂蜜中酚酸类化合物大孔树脂提取研究
2020-11-06杜晓静梁浩铜仁职业技术学院药学院贵州铜仁554300
杜晓静 梁浩(铜仁职业技术学院 药学院，贵州 铜仁 554300)
0 引言
蜂蜜是一种天然的甜物质，由蜜蜂采集植物的花蜜、蜜露或分泌物，并与自身分泌物相混合，经充分酿造而成[1-2]，其营养价值丰富深受消费者的青睐。酚类化合物(主要是酚酸、黄酮及其衍生物等)是蜂蜜中重要的生物活性成分。研究发现，酚酸类化合物可以作为蜂蜜的花源和地理来源的鉴别指标[3-6]，为蜂蜜质量控制提供可靠的依据。
树脂提取法是目前蜂蜜中酚类化合物提取最常用的一种方法，其主要原理是被测样品中的分析物被大孔树脂吸附而干扰组分流出，然后将目标物质用洗脱液洗出来[7-8]。XAD 型树脂是提取蜂蜜中酚类物质最常用的柱材。本文以蜂蜜中的酚酸类物质为检测指标，通过研究几种不同大孔树脂对蜂蜜中酚酸类化合物的提取，从而得到一种对蜂蜜中酚酸类化合物吸附能力较好的吸附剂。
1 材料与方法
1.1 试剂与仪器
浓盐酸(分析纯；成都金山化学试剂有限公司)。甲醇(色谱纯；美国天地有限公司)。
对羟基苯甲酸(纯度：99.5%；阿拉丁)。
XAD-2 树脂(北京北实纵横科技发展有限公司)。
LS-46D、LS-308、DM-130、AB-8 树脂(西安蓝晓科技有限公司)。
旋转蒸发仪(上海亚荣生化仪器厂)。
电子分析天平(CPA225D；北京赛多利斯天平有限公司)。
Agilent 1100 高效液相色谱仪 美国Agilent 公司。
枣花蜜样品 购于铜仁市思南县。
1.2 样品溶液的制备
称取5 份蜂蜜样品各5 g，用蒸馏水溶解，固液比为1:5(W/V)，采用浓盐酸将pH 值调节至2.0；分别将蜂蜜水样品转入填装不同吸附树脂的玻璃层析柱中，依次用酸性水溶液(I00mL)、蒸馏水(150mL)洗脱，待蜂蜜样品中的极性化合物被除去后，再用甲醇(150mL)洗脱溶液至无色。洗脱液在45℃下旋转蒸干，残留物转至2mL 容量瓶，用甲醇溶解并定容。采用0.45μm 微孔滤膜过滤，待测。
1.3 色谱条件
色谱柱：Zorbax SB-C18(5μm, 250mm×4.6mm)；甲醇浓度为：0～10min，5%～15%；10～20min，15%；20～25min，15%～17%；25～30min，17%～30%；30～50min，30%～40%；50～60min，40%～55%；60～70min，55%～70%。流动相：1.0% 乙酸和甲醇水溶液；流速：1.0mL·min-1；检测电压：0.9V；柱温：30℃。进样量：10μL。
2 结果与分析
2.1 不同吸附树脂对蜂蜜中酚酸类化合物的吸附
选用XAD-2、DM-130、LS-46D、AB-8 和LS-308 这5 种大孔树脂作为吸附剂，研究不同大孔树脂对蜂蜜中酚酸类物质的吸附。由图1 可知，5 种不同树脂谱图的出峰信息量差异很小，其中DM-130 大孔树脂的峰面积较小，因此，DM-130 大孔树脂可以优先排除。
2.2 蜂蜜样品中酚酸的加标回收率实验
将一定浓度的酚酸对照品溶液加入pH 为2.0 的蜂蜜样品水溶液中，所得溶液通过已装好的剩余四种树脂的玻璃层析柱中。其它处理步骤同“1.2”。通过计算酚酸的加标回收率(见表1)可知，树脂XAD-2 得到的酚酸的回收率相对较高。因此，最终选择大孔树脂XAD-2 作为最优的吸附剂。
图1 不同树脂对蜂蜜中酚酸类化合物吸附后获得的色谱图
表1 利用XAD-2和AB-8获得的样品中酚酸的加标回收率
3 结语
本论文通过研究5 种不同吸附树脂对蜂蜜中酚酸类化合物的吸附性能，发现大孔树脂XAD-2 对蜂蜜中的酚酸类化合物的吸附能性较好，加标回收率试验显示该树脂的回收率也相对较高，因此，大孔树脂XAD-2 是一种对蜂蜜中酚酸类化合物吸附性能优良的吸附剂，。
