溶血对27项西门子ADVIA 2400生化检验项目的影响及纠正

倪莉，叶悦荻，徐晓杰，葛海峰，陈允国，朱丽丹

（1.温州医科大学附属第二医院育英儿童医院 医学检验中心，浙江 温州 325027；2.温州医科大学附属第一医院 病理科，浙江 温州 325015）

标本溶血会影响实验结果准确性。近年来，有较多关于溶血对生化项目产生干扰的报道，但对于各项目干扰的机制、干扰的程度及纠正措施鲜有明确而系统的研究[1]。本研究采用美国临床实验室标准化委员会（clinical and laboratory standards institute，CLSI）制定的评价方案中的EP7-A2文件，利用西门子全自动生化分析仪ADVIA 2400设定的溶血指数对27项常规生化检测项目进行不同程度溶血干扰的研究和评估。

1 对象和方法

1.1 对象

1.1.1 标本：根据EP7-A2文件，随机收集温州医科大学附属第二医院育英儿童医院门诊当天的新鲜血液标本40份，无肉眼可见溶血、黄疸及脂浊。标本采用肝素抗凝管留取，以3 500 r/min离心8 min后，测定血浆27项生化检测项目及血清指数作为基础值，重复测定2次取平均值。

1.1.2 不同程度溶血标本制备：采用机械破坏法，得到不同溶血程度（+，++，+++，++++）的溶血标本，各10例。标本在3 500 r/min离心8 min后，再次测定27项生化项目及血清指数，重复测定2次取平均值。上述实验在2 h内完成。

1.2 方法

1.2.1 试剂：DBil、TBil、TP、TG、UA、Alb、ALP、ALT、BUN、ChE、TC、Cr、GGT、HDL、LDL、Ca、P、Mg、Na+、Cl-、AST、CK、K+、LDH、Glu和Fe试剂均购自西门子医学诊断有限公司；PA试剂购自温州伊利康生物技术有限公司。

1.2.2 仪器：西门子生化全自动分析仪ADVIA 2400，反应参数参照仪器配套的操作说明书设置。

1.2.3 溶血指数的设置和检测：溶血指数设置基于新鲜制备的溶血产物中的脱氧血红蛋白，测得的溶血指数用“H”表示。根据输入的Hb值对应定性的溶血程度。Hb测定值分别为＜55 mg/L、55～ 110 mg/L、111～234 mg/L、235～379 mg/L和 ＞379 mg/L时仪器对应的定性溶血程度分别为-、+、++、+++和++++。

1.3 统计学处理方法 数据采用SPSS17.0软件进行分析。以每份测试血清的△H为X轴，其对应的检测项目的干扰值为Y轴绘制溶血干扰曲线。用CLIA’88能力比对检验分析质量要求的可接受范围来判断干扰结果的可接受性，CLIA’88文件中没有提供的项目参考2018年国家卫生健康委员会临床检验室间质量评价要求的可接受范围。溶血前后检测结果的偏倚程度如果大于可接受范围时，提示溶血对该项目存在明显干扰[2]。

2 结果

2.1 不同溶血程度对生化常规检测项目的影响 对比溶血前后检测结果发现，溶血对DBil、TBil、PA、TP、TG、UA、Alb、ALP、ALT、BUN、ChE、TC、Cr、GGT、HDL、LDL、Ca、P、Mg、Na+和Cl-这21个生化项目，虽然存在一定程度上的干扰，但其最大偏倚均没有超过CLIA’88能力比对规定的总允许误差，因此不存在明显干扰。随着溶血程度升高，对Alb、TP、TC、Mg的检测结果正干扰加剧，但均没有超过CLIA’88规定的总允许误差（P＞0.05），见表1。

2.2 溶血指数与常规生化项目检测结果变化的关系 不同溶血程度对AST、CK、K+、LDH、Glu和Fe存在明显干扰，以△H为横坐标X，其对应的检测项目偏倚为纵坐标Y绘制拟合曲线发现，溶血指数和各项目检测结果的偏倚呈一定线性关系。AST、K+和LDH这3个项目在溶血程度为（+）时，检测结果的正偏倚分别超过CLIA’88规定的总允许误差20%， 0.5 mmol/L和20%；Glu在溶血程度为（+）时，检测结果的负偏倚已经超过CLIA’88规定的总允许误差10%；CK在溶血程度为（++）时，检测结果的正偏倚超过CLIA’88规定的总允许误差30%；Fe在溶血程度为（+++）时，检测结果的正偏倚超过CLIA’88规定的总允许误差20%（见图1）。

表1 不同溶血程度对生化常规检测项目的影响

图1 溶血指数与常规生化项目检测结果变化的关系

2.3 溶血对不同项目检测结果误差评估 17 899份标本中411份标本存在轻度溶血（+），20份标本呈中重度溶血，可见我院常见的溶血标本溶血程度为（+），占比95.36%。本研究结果显示AST、K+、LDH和Glu在溶血程度为+时已造成明显干扰。对这4个项目溶血程度为（+）时，以变化的溶血指数为X轴和产生的干扰值为Y轴进行回归分析，以轻度溶血（+）的溶血指数110计算AST、K+、LDH和Glu产生的干扰值，结果发现各项目在参考范围上下限产生的偏倚均超过了CLIA’88规定的总允许误差（见图2和表2）。

3 讨论

判定标本有无溶血，较严格的定义是检出Hb的浓度，对于血清Hb超过50 mg/L即认为标本溶血[3]，但一般的定义是血浆（血清）中检出Hb的浓度超过0.3 g/L称为溶血，这也刚好是视觉上检出轻度溶血的界限[4]。统计我院生化室10 d共17 899例标本，经ADVIA 2400血清溶血指数检测，其中411例为轻度溶血（+），20例为中重度溶血，说明轻度溶血的标本占比较大。肉眼复检测定血清溶血程度为（+）和（++）的溶血标本411例，其中有17例标本被经验丰富的技师肉眼判断为无溶血，表明肉眼判断标本溶血有一定的漏诊率。血清溶血指数能检测出微量的血红蛋白，提高对溶血标本的检出率[5]。

溶血对检验结果的干扰主要有以下几种类型：红细胞内外浓度存在梯度差；细胞内、外液成分发生化学反应，红细胞内含物作为干扰物参与血清成分的检测反应而引起的化学性干扰[6]；有色物质对吸光谱的干扰；综合作用的干扰。可能与溶血引起的稀释负干扰，和Hb增加吸光度产生的正干扰相互作用有关[7]。

随着全自动生化分析仪的使用，很多轻度溶血标本可以选择双波长测定法来消除溶血造成的有色物质的干扰，其主要原理是通过适当改变待测物质的测定波长，减少干扰物质对光的吸收，但该方法大多偏离了待测物质的最大吸收峰，会造成测定的灵敏度下降。另外有些研究通过设置对照管来消除溶血的干扰，如样本空白可消除溶血标本对吸光度的影响，但设置对照本身只能消除本底的干扰，对那些溶血所引起的化学反应等影响不起作用[8]。

LDH、AST、K+在红细胞内的含量分别是细胞外的180、38、22倍[9]，轻度溶血时便会导致血清测定值显著增高。红细胞中不含CK，但含有大量AK，溶血时释放出的AK与ADP发生反应产生ATP，ATP参与了CK的检测过程，造成其检测结果假性增高[10]。对此，许多试剂盒中加入AK抑制剂以减少溶血的干扰，但溶血仍可产生一定影响[11]。葡萄糖测定的己糖激酶法是临床上常用的参考方法，本研究显示，该法测定溶血标本时，结果偏低，这可能与大量的红细胞破坏，使释放出的有机磷酸酯等消耗了还原型辅酶，以及红细胞破裂带来的标本稀释有关[12]。封彩云等[13]报道血清中Hb＞1.5 g/L时，己糖激酶法测定血糖存在明显负干扰，且血糖浓度越高溶血标本对己糖激酶的负干扰程度越严重，与本试验研究结果一致，但本研究发现溶血程度为（+）时（Hb为55～110 mg/L）就已经存在明显负干扰，可能与不同试剂、不同仪器对己糖激酶法测定溶血标本的负干扰程度不同有关。人体中的铁大部分存在于Hb中，红细胞中铁是血清铁的数倍[14]，KOSEOGLU等[15]研究亦证实标本溶血会干扰血清铁的测定。

图2 溶血对不同项目检测结果的干扰

表2 溶血（+）在参考范围处对AST等项目的干扰分析

回归结果发现AST、LDH、Glu和K+在溶血程度为（+）时，对于参考范围上下限的结果已经存在明显干扰，因此，对于溶血程度（+）标本测定以上项目需对结果进行纠正后报告。黄燚等[16]通过雅培ARCHITECT c16000全自动生化分析仪检测血清指数亦证实了溶血对ALT、AST、LDH、TBil、DBil、Mg2+和K+存在明显干扰，但其未对产生明显干扰的具体血清指数进行研究，而本研究未发现溶血对ALT、TBil、DBil和Mg2+存在明显干扰，可能与不同试剂、不同仪器测定这些项目抗干扰能力不同有关。

综上所述，西门子ADVIA 2400全自动生化分析仪在标本溶血程度为（+）时不适用于AST、LDH、Glu和K+的测定；溶血程度为（++）时不适合CK测定；溶血程度为（+++）时不适合Fe测定。因此，一旦发现溶血标本检测以上项目，需重新采集标本复查，若无法重新采集血标本，需根据相应的溶血指数将检测结果校正后报告。溶血指数的应用不仅节省了人力与不同技师判断存在的人为差异，还降低了肉眼判断溶血的漏诊率。