患病河蟹病原菌的分离、鉴定及药敏试验

○李 艳

2020年，我县石集乡部分塘口出现了河蟹死亡的现象，发病池塘的河蟹吃食量明显减少，肠道无食，肝胰腺颜色呈灰白色，鳃发黑。笔者通过对病蟹肝胰腺的细菌分离及鉴定探讨引起河蟹死亡的原因。

1 方法

病原菌的分离：用灭菌棉签蘸取患病河蟹肝胰腺，均匀涂于普通营养琼脂培养基上，28℃恒温培养18-24小时后，观察菌落形态，并挑取可疑单个菌落划线接种在营养琼脂平板，28℃恒温培养18-24小时。

生理生化特征：采用肠杆菌和其它非苛养革兰氏阴性杆菌鉴定试剂盒（比色法）系统测定各分离菌株生理生化特性，同时做氧化酶反应构成第21个试验。根据判读表判读各反应结果，参照生化谱检索手册，得到鉴定结果。

药敏试验：挑取单菌落于5mL生理盐水中制成0.5麦氏单位的菌悬液（A管），从中吸取0.1mL，加入到10mL无菌生理盐水中混匀（B管）。利用微量移液器吸取B液，加入药敏板所有的微孔中，每孔0.1mL，分别测定细菌分离株对恩诺沙星、硫酸新霉素、甲砜霉素、氟苯尼考、红霉素、盐酸环丙沙星、盐酸土霉素、强力霉素共8种常见药物的敏感程度。盖好试剂板，置于35℃培养箱培养18-24小时，经肉眼观察证实无细菌生长试管中的最低药物浓度，即为药物的最小抑菌浓度。

2 结果

2.1 病原菌生理生化鉴定

从病蟹肝胰腺分离到的细菌在营养琼脂平板上为光滑、湿润、微凸、无色或淡黄色菌落。

对分离得到的2株细菌进行生理生化检测，结果判定分别为嗜水气单胞菌和荧光/恶臭假单胞菌。具体生理生化特性见表1。

表1 鉴定试剂条检测结果

2.2 病原菌的药敏试验结果

2株细菌对8种抗菌药物的最小抑菌浓度如表2所示。硫酸新霉素、红霉素为耐药，对甲砜霉素中敏，其它5种抗菌药物均敏感，荧光/恶臭假单胞菌对甲砜霉素、红霉素耐药，对氟苯尼考中敏，对其余5种药物敏感。

3 讨论与分析

表2 2株细菌对8种抗菌药物的最小抑菌浓度（MIC）对照表（单位：mg/L）：

参照2013年抗菌药物敏感性试验执行标准，嗜水气单胞菌对

试验分离到的2个细菌分离株，根据其培养后的菌体形态特征、生化特性分析结果，分别确定为致病性嗜水气单胞菌和荧光/恶臭假单胞菌。药敏试验结果表明，嗜水气单胞菌细菌对恩诺沙星、氟苯尼考、盐酸环丙沙星、盐酸土霉素、强力霉素的敏感率均较高，荧光/恶臭假单胞菌对恩诺沙星、硫酸新霉素、盐酸环丙沙星、盐酸土霉素、强力霉素敏感率较高。

（通联：223900，江苏省泗洪县石集乡人民政府手机:13951458857）