HPV E6/E7mRNA 在TCT 阴性、非16、18 型高危型HPV DNA 阳性人群的应用探讨

2020-11-02薛巧梅李林王林平

现代仪器与医疗 2020年4期

薛巧梅李林王林平

(青岛大学附属威海市立第二医院妇产科，山东威海 264200)

宫颈癌是女性最常见的恶性肿瘤，其发病率仅次于乳腺癌，位居第二[1]。世界卫生组织2018 年发布，全球宫颈癌发病率为13/10万，死亡率为7/10万，84%发生在经济欠发达地区，且新发宫颈癌病例有年轻化趋势[2]。宫颈高级别上皮内病变与宫颈浸润癌的发生密切相关，而筛查是早期发现宫颈高级别上皮内病变的主要手段。目前推荐的主要筛查方法为细胞学检查和HPV DNA 检测。但即使两者联合仍不能对TCT 阴性、非16、18 型高危型HPV DNA阳性患者的病情进行有效的评估。该研究目的在于通过E6/E7mRNA 检测，对液基薄层细胞学阴性、非16、18 型高危型HPV DNA 阳性患者进行分流，减少宫颈高级别上皮内病变的漏诊。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2019 年1 月至12 月于威海市妇幼保健院行TCT 及HPV DNA 检测，结果TCT 阴性、非16、18 型高危型HPV DNA 阳性的364 名患者为研究对象，患者年龄22～62 岁。

纳入标准：（1）取材前72h 无性生活、阴道冲洗及上药；（2）既往无宫颈病变、宫颈癌及盆腔放疗病史；（3）无生殖器炎症；（4）非妊娠期及哺乳期。

1.2 方法

1.2.1 宫颈脱落细胞学检查

用宫颈取样刷于宫颈鳞柱交界处向同一方向旋转5 周，刷取脱落细胞，将宫颈刷在保存液中充分冲洗后送实验室制片检查，采用TBS 报告系统诊断。

1.2.2 高危型HPV DNA 检测

采用酶促化学发光法检测样本中的HPV DNA。试剂盒采自杭州德同生物技术有限公司，具体流程严格按照试剂盒说明书进行，可检测14 种高危型HPV DNA，包括2种（HPV16、18型）和12种（HPV31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、66、68 型），检测结果＞1 为阳性。

1.2.3 HPV E6/E7mRNA 的检测

采用分支链DNA 信号扩增法检测样本中的HPV E6/E7mRNA。试剂盒采自郑州科迪亚生物技术有限公司，具体流程严格按照试剂盒说明书进行，可检测14 种高危型HPV E6/E7mRNA，包括HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、66、68 型，不区分具体型别，检测结果值≥1.0 为阳性。

1.2.4 组织病理学

阴道镜下可疑病变处取活检。病理结果分为炎症、LSIL、HSIL 及宫颈癌，以CINII+为研究终点。

1.2.5 统计学方法

采用SPSS21.0 对数据进行处理，计数资料以率n（%）表示，采用X2检验。P＜0.05 表示差异有统计学意义。

2 结果

E6/E7mRNA 阳性的病例中CINII+的检出率为13.48%，远高于E6E7mRNA 阴性病例中的比例2.99%，P＜0.05，差异有统计学意义。详见表1。

3 讨论

宫颈脱落细胞学检查和高危型HPV 检测是目前宫颈癌筛查的主要方法。细胞学检查包括TCT 和巴氏涂片法，前者筛查的阳性率明显高于后者，故目前基本取代了后者，但仍有较高的漏诊率。有研究显示因为细胞数量不足及细胞学医生诊断水平的影响，单独TCT 检查漏诊率达11.9%[3]。另有相关研究报道单独TCT 检测灵敏度为79.33%，特异性为71.59%[4]。而以L1 区为检测靶点的HR-HPV DNA 检测，灵敏度高、特异性低，但仅能反映患者目前是否感染HPV 病毒，无法反映病变的进展情况。故无法对TCT 阴性、非16、18 型高危型HPV DNA 阳性患者病情进展情况进行有效的评估。HPV E6/E7mRNA 检测是一种新的以E6/E7 为检测靶点的筛查方法。研究表明HPV E6/E7 基因与人类的DNA 结合后，转录生成E6E7mRNA，进一步翻译出E6、E7 癌蛋白，结合P53、Rb 抑癌蛋白后，细胞周期控制失常，发生癌变，故HPV E6/E7mRNA在一定程度上反应了癌基因的活性[5]。相关研究表明，单独行HPV E6/E7mRNA 检测与单独行高危型HPV DNA 相比，前者对于CINII 及以上病变的阳性预测值高于后者，且随着宫颈病变级别的升高E6/E7mRNA 的表达呈升高趋势[6]。张小松等[7]报道E6E7mRNA 阳性病例中CINII+的比例（14.3%）远高于E6E7mRNA 阴性病例中的比例（4.0%），E6E7mRNA 可用于高危型HPV 阳性病例的分流。

该研究通过对液基薄层细胞学阴性、非16、18 型高危型HPV DNA 阳性患者进行E6/E7mRNA检测，发现E6/E7mRNA 阳性的病例中CINII+的检出率为13.48%，远高于E6E7mRNA 阴性病例中的比例2.99%，P＜0.05，差异有统计学意义。E6/E7mRNA 阳性的病例中＞40 岁的CINII+的占比为67.74%。所以对于TCT 阴性、非16、18 型高危型HPV DNA 阳性、E6/E7mRNA 阳性的患者，尤其是年龄＞40 岁的患者，要引起重视，可以考虑缩短复查时间，必要时尽早转诊阴道镜，避免漏诊高级别宫颈上皮内病变。