子宫内膜癌癌组织叉头框蛋白C1表达的水平及意义*

廖常英 凌 玲 王作龙 赵凤容

（重庆市江北区中医院，1 妇产科，2 检验科，重庆 402000）

子宫内膜癌是女性常见生殖系统恶性肿瘤之一，占女性全身恶性肿瘤7%[1]，近年来发病率呈不断上升趋势，且出现发病年龄年轻化，严重危害女性健康和生命安全[2-3]。叉头框蛋白C1（forkhead box protein C1，FOXC1）属于叉头框（FOX）转录因子家族。FOX 家族共有19 个亚族，参与许多重要的生物学功能，包括细胞周期调控、上皮细胞分化等[4]。FOX 家族基因通过转录因子活性控制其他基因表达，在肿瘤形成、分化、转移和血管形成中也占据重要地位[5]。沉默鼻咽癌细胞系5-8F FOXC1 基因后，5-8F 细胞凋亡率明显增高，且可影响细胞周期分布[6]。FOXC1 在乳腺癌和子宫内膜癌中均作为主要的调节因子[7]，但关注FOXC1表达水平与子宫内膜癌间的关系的研究仍较少。基于此，本研究回顾性分析子宫内膜癌、非典型子宫内膜增生和子宫肌瘤患者临床资料，以探究子宫内膜癌癌组织FOXC1 表达的水平及意义。

1 材料和方法

1.1 一般资料

回顾性分析2015年1月至2018年3月间收治的100 例子宫内膜癌患者、20 例非典型子宫内膜增生和20 例子宫肌瘤患者临床资料。纳入标准：所有患者均经病理检查确诊，子宫肌瘤患者均经病理检查证实子宫内膜正常；癌症患者术前未经放化疗或激素治疗者；年龄＞18 岁者；经本院伦理委员会审核通过。排除标准：合并其他恶性肿瘤者；临床资料不完整者。100 例子宫内膜癌患者年龄47～68 岁、平均（57.19±6.26）岁，病理分型：子宫内膜样腺癌80 例、低分化腺癌10 例、腺鳞癌5 例、浆液性腺癌5 例，分化程度：低分化26 例、中分化38 例、高分化36 例，病理分期（依据国际妇产科联盟子宫内膜癌分期[8]）：Ⅰ期78 例、Ⅱ期10 例、Ⅲ期12 例。20 例非典型子宫内膜增生患者年龄51～73 岁、平均（57.91±7.09）岁。20 例子宫肌瘤患者年龄44～70 岁、平均（56.95±7.43）岁。子宫内膜癌、非典型子宫内膜增生及子宫肌瘤患者年龄对比差异无统计学意义（P＞0.05）。

1.2 研究方法

采用免疫组织化学方法检测子宫内膜癌组织FOXC1 水平。所有肿瘤组织标本均经10%甲醛固定、石蜡包埋，5 μm 连续切片；切片常规脱蜡，将切片置入修复液中微波炉高火5 min、中低火15 min，室温冷却30 min 行抗原修复，3% H2O2去离子水常温孵育10 min；使用正常山羊封闭血清、室温孵育20 min；按照说明书稀释一抗（兔抗人FOXC1 多克隆抗体来自上海泽叶生物科技有限公司），一抗50 μL 室温孵育2 h；免疫组织化学检测系统试剂1 室温孵育20 min，免疫组织化学检测系统试剂2 室温孵育20 min（兔超敏2 步法免疫组织化检测试剂来自上海奇康生物科技有限公司）；二氨基联苯胺（DAB）显色5～10 min，苏木精复染、乙醇脱水、二甲苯透明、树胶固封。

1.3 评估方法

阳性结果判断标准[9]：FOXC1 以细胞质内出现棕黄色颗粒判为阳性，随机计数10 个高倍视野的1 000 个瘤细胞，按每高倍镜视野阳性细胞百分比计为0 分（＜5%）、1 分（5%～25%）、2 分（26%～50%）、3 分（51%～75%）、4 分（＞76%），按染色强度计1 分（淡黄色）、2 分（黄色）、3 分（棕黄色）。阳性强度=阳性细胞百分比评分×染色强度评分，＞4 分为阳性，≤4 分为阴性。

1.4 观察指标

比较子宫内膜癌不同病理组织FOXC1 的表达情况，并分析其与子宫内膜癌患者病理类型、分化程度、病理分期、受累肌层、宫颈受累、附件受累和盆腔淋巴结转移等临床病理特征间的关系。

1.5 统计学处理

采用SPSS19.0 统计软件进行数据分析，FOXC1 阳性表达等计数数据以[n（%）]表示，行χ2检验或Fisher 精确概率检验，P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 不同病理组织FOXC1 表达水平的比较

不同疾病子宫内膜FOXC1 阳性率对比差异有统计学意义（P＜0.01）；其中子宫内膜癌癌组织FOXC1 阳性率为89.00%，高于癌旁组织的32.00%、非典型子宫内膜增生的60.00%及正常子宫内膜的20.00%（P＜0.01），子宫内膜癌癌旁组织FOXC1 阳性率（32.00%）低于非典型子宫内膜增生（60.00%），与正常子宫内膜阳性率对比差异无统计学意义（P＞0.05）；非典型子宫内膜增生FOXC1 阳性率（60.00%）高于正常子宫内膜20.00%（P＜0.01）。

2.2 FOXC1 在子宫内膜癌中的表达水平与临床病理特征的关系

子宫内膜癌患者不同病理类型、宫颈是否受累、附件是否受累患者FOXC1阳性率差异无统计学意义（P＞0.05），但分化程度低、病理分期高、受累肌层多以及盆腔淋巴结转移患者FOXC1阳性率显著升高，差异均有统计学意义（P＜0.05）（表1）。

3 讨论

本研究结果显示，不同疾病子宫内膜FOXCI阳性率对比，差异有统计学意义。其中FOXCI 在子宫内膜癌癌组织的阳性率最高，在本组数据中可高达89.00%；非典型子宫内膜增生患者FOXC1 阳性率为60.00%；而子宫内膜癌旁组织和正常子宫内膜FOXCI 阳性率对比，差异无统计学意义，这与多数研究中表明FOXCI 在癌组织中表达水平更高的结论相一致[10]。人叉头框基因家族由50 个成员组成，命名为FOXA1～FOXS1，其中FOXC 是FOX 家族中较重要的亚族，FOXC1 和FOXC2 均是近年来肿瘤相关病机研究较多的成员[11-12]。目前国内有文献显示，FOXC1 能够抑制上皮型钙黏附素表达，或与恶性间质化表型肿瘤的相关蛋白协同表达，促进肿瘤上皮细胞向间质细胞的转变，成为肿瘤获得侵袭转移能力的根源[13-14]。陈柏林等[15]研究也指出，FOXC1 可能通过改变纤维连接蛋白、波形蛋白的表达调节鼻咽癌的侵袭和转移能力。

表1 FOXC1 在子宫内膜癌中的表达水平与临床病理特征的关系[n（%）]Tab 1 The relationship between the expression level of FOXC1 in endometrial cancer and clinicopathological characteristics[n (%)]

本研究结果还显示，子宫内膜癌患者不同病理类型、宫颈是否受累、附件是否受累患者FOXC1阳性比例无差异，但分化程度低、病理分期高、受累肌层多以及盆腔淋巴结转移患者FOXC1 阳性比例显著升高。提示FOXC1 高表达与子宫内膜癌发生相关，且随着子宫内膜癌患者病情进展均可表达出更高水平的FOXC1。结合以往研究分析认为：miR-495 通过直接抑制FOXC1 表达来减少细胞生长，诱导细胞凋亡并抑制子宫内膜癌的转移；而FOXC1 过表达则可逆转miR-495 在子宫内膜癌细胞中介导的细胞反应[16-17]。FOXC1 过度表达可消除miR-495 对子宫内膜癌细胞生长和迁移的抑制以及细胞凋亡的促进作用[18]，提示FOXCI 蛋白表达水平的确影响子宫内膜癌的发展、迁移，但本研究更关注的是FOXCI 在不同类型子宫内膜疾病中表达情况，以及其是否可作为评估子宫内膜癌病情严重程度的指标。非典型子宫内膜增生是子宫内膜癌的前期病变，术前诊断往往依靠诊刮或宫腔镜下活检[19]。本组数据显示，子宫内膜癌癌组织FOXCI阳性率高于非典型子宫内膜增生，FOXCI 高表达或也与非典型子宫内膜增生癌变有关。且基于miR-495 与FOXC1 的相关关系，miR-495 可作为子宫内膜癌基因治疗的靶点之一，也可将FOXC1 阳性作为子宫内膜癌病情的评估指标之一[20-21]。但本研究受限于随访时间，未能记录子宫内膜癌患者的治疗效果及预后状况。因此后续学者可从这些角度进行更多研究，以更多地发现FOXC1 在子宫内膜癌中的作用。

综上所述，子宫内膜癌癌组织中FOXC1 阳性率较良性子宫病变组织明显增高，且随着子宫内膜癌患者分化程度越低，病理分期越高，受累肌层越多以及出现盆腔淋巴结转移时其FOXC1 阳性率更高，由此提示FOXC1 的表达与子宫内膜癌的发生和进展有着密不可分的关系。