张氏仁宝生肌膏中血竭、儿茶的薄层鉴别研究

马春芳，张金东，马 莉，张宝玉，户晓静，单于德

(宁夏张氏回医正骨医院，宁夏 银川 750001)

“仁宝张氏”“生肌膏”是宁夏张氏回医正骨家传秘方，并在此基础上，历经四代人的不断总结和完善研制而成的传统回药膏剂，是由血竭、儿茶、赤石脂、乳香等几味药组成，具有行气活血、化瘀止痛、祛腐生肌、收湿敛疮之功效。为提高药品的质量控制要求，采用薄层色谱法鉴别张氏仁宝生肌膏中的血竭、儿茶，以期为其他制剂中血竭、儿茶的鉴别提供依据。

1 仪器与试药

XS205电子天平(梅特勒-托利多公司)；HH-SY21-Ni4电热恒温水浴锅(北京长安科学仪器厂)；硅胶G薄层板[青岛海洋化工厂生产，规格100 mm×100 mm，厚度0.20～0.25 mm，批号：20170212；烟台化工工业研究所生产，规格100 mm×100 mm，厚度(0.20±0.03)mm，批号：20171101]；预制硅胶H板薄层板[青岛海洋化工厂生产，规格100 mm×100 mm，厚度0.20 mm～0.25 mm，批号：20170212；烟台化工工业研究所生产，规格为100 mm×100 mm，厚度(0.20±0.03)mm，批号：20171101]；血竭对照药材(中国食品药品检定研究院，批号：960-9607)；儿茶素对照品(中国食品药品检定研究院，批号：120927-201714)；张氏仁宝生肌膏(宁夏张氏回医正骨医院提供，批号 20171201、20171202、20171203)；所用药材购自宁夏明德中药饮片有限公司；所用试剂为分析纯。

2 方法与结果

2.1 血竭的定性鉴别

2.1.1 供试品溶液制备 取本品30 g，加乙醇40 mL，置水浴上搅拌溶化，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加水10 mL溶解，用乙醚20 mL振摇提取，分取乙醚层，蒸干，残渣加乙醇1 mL使溶解，取上清液作为供试品溶液。

2.1.2 对照品溶液制备 另取血竭对照药材0.01 g，加乙醇1 mL使溶解，作为对照药材溶液。

2.1.3 阴性对照溶液制备 缺血竭的模拟处方阴性样品由本院制剂室配制，按供试品溶液的制备方法制成阴性对照溶液。

2.2 薄层定性鉴别

照薄层色谱法[1]试验，吸取“2.1.1”项下各溶液5 mL，点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇(19∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，置日光下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

2.3 结果

供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性对照品溶液在与对照药材色谱相应的位置上，无相同颜色的斑点，见图1。

2.4 方法学考察

2.4.1 专属性考察 取供试品3批，按“2.1.1”项下方法制备，吸取张氏仁宝生肌软膏供试品溶液、血竭阴性对照溶液和血竭对照药材溶液各5 μL，按“2.2”项下薄层色谱条件试验，结果阴性对照无干扰，见图1。

1.张氏仁宝生肌膏，批号20171201；2.张氏仁宝生肌膏，批号20171202；3.张氏仁宝生肌膏，批号20171203；4.血竭对照药材；5：张氏仁宝生肌膏血竭阴性样品

2.4.2 耐用性 不同薄层板的比较：取青岛海洋化工厂生产的预制硅胶G板与烟台化工工业研究所生产的预制硅胶G板，分别按上述方法试验，结果2种预制板无明显差别，见图2。

1.张氏仁宝生肌膏，批号20171201；2.张氏仁宝生肌膏，批号20171202；3.张氏仁宝生肌膏，批号20171203；4.血竭对照药材；5.张氏仁宝生肌膏血竭阴性样品

不同温度比较：取点样后的薄层板，分别在6℃和28℃中展开，置日光下检视，斑点清晰。结果表明在6～28℃范围内试验，对鉴别无明显影响，见图3。

1.张氏仁宝生肌膏，批号20171201；2.张氏仁宝生肌膏，批号20171202；3.张氏仁宝生肌膏，批号20171203；4.血竭对照药材

不同湿度比较：取点样后的薄层板，分别在用硫酸调节相对湿度32%和88%的层析缸中展开，置日光下检视，斑点清晰。结果表明在相对湿度32%～88%之间试验，对鉴别无明显影响，见图4。

1.张氏仁宝生肌膏，批号20171201；2.张氏仁宝生肌膏，批号20171202；3.张氏仁宝生肌膏，批号20171203；4.血竭对照药材

经上述方法学验证试验，结果表明血竭的薄层色谱鉴别方法在方法学验证要求的变动因素下对鉴别无明显影响，且重现性良好，操作简便，斑点清晰，分离效果好，阴性对照无干扰，证明此方法具有专属性及可行性，适用于本品中血竭的鉴别。

2.5 儿茶的定性鉴别

2.5.1 溶液的制备 供试品溶液的制备：取本品10 g，加甲醇50 mL超声30 min，放冷，滤过，蒸干，残渣加甲醇2 mL使溶解，取上清液，作为供试品溶液。对照品溶液的制备：另取儿茶素对照品，加甲醇制成每1 mL含0.4 mg的溶液，作为对照品溶液。阴性对照溶液的制备：缺儿茶的模拟处方阴性样品由本院制剂室配制，按供试品溶液的制备方法制成阴性对照溶液。

2.5.2 薄层定性鉴别 按照薄层色谱法[1]试验，吸取供试品溶液、对照品溶液各2μL，分别点于同一硅胶H板上，以甲苯-醋酸乙酯-甲酸(6∶5∶0.8)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2%三氯化铁乙醇溶液，于日光下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

2.5.3 结果 供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性对照品溶液在与对照品色谱相应的位置上，无相同颜色的斑点，见图5。

2.5.4 方法学验证 专属性考察。取供试品3批，按“2.1”项方法制备各溶液，吸取供试品溶液、儿茶对照品溶液和儿茶阴性对照溶液各2 μL，按“2.2”项下的薄层色谱条件试验，结果阴性对照无干扰，见图5。

1.张氏仁宝生肌膏，批号20171201；2.张氏仁宝生肌膏，批号20171202；3.张氏仁宝生肌膏，批号20171203；4.儿茶素对照品；5.张氏仁宝生肌膏儿茶阴性样品

耐用性考察。不同薄层板的比较：取青岛海洋化工厂生产的预制硅胶G板与烟台化工工业研究所生产的预制硅胶H板，分别按“2.2”项下的薄层色谱条件试验，结果2种预制板无明显差别，见图6。

1.张氏仁宝生肌膏，批号20171201；2.张氏仁宝生肌膏，批号20171202；3.张氏仁宝生肌膏，批号20171203；4.儿茶素对照品

不同温度的比较：取点样后的薄层板，分别在6 ℃和28 ℃中展开，置日光灯下检视，斑点清晰。结果表明在6～28 ℃范围内试验，对鉴别无明显影响，见图7。

1.张氏仁宝生肌膏，批号20171201；2.张氏仁宝生肌膏，批号20171202；3.张氏仁宝生肌膏，批号20171203；4.儿茶素对照品

不同湿度的比较：取点样后的薄层板，分别在用硫酸调节相对湿度32%和88%的层析缸中展开，置日光灯下检视，斑点清晰。结果表明在相对湿度32～88%之间试验，对鉴别无明显影响，见图8。

1.张氏仁宝生肌膏，批号20171201；2.张氏仁宝生肌膏，批号20171202；3.张氏仁宝生肌膏，批号20171203；4.儿茶素对照品

上述薄层色谱鉴别方法学试验结果表明，本制剂儿茶的薄层色谱鉴别方法在方法学验证要求的变动因素下对鉴别无明显影响，且重现性良好，斑点清晰，分离效果好，阴性对照无干扰，证明此方法具有专属性及可行性，适用于本品中儿茶的鉴别。

3 讨论

3.1 血竭

张氏仁宝生肌膏处方中以血竭、儿茶为君药，《回回药方》云：“‘檐木阿黑云’为阿拉伯语‘血竭’的音译名，回药用其散瘀定痛，止血生肌[2]。本实验采用乙醇溶解去除植物油基质，再用水和乙醚萃取，弃去水相中水溶性成分，乙醚提取血竭有效成分[3]，提取率较好，所得溶液重现性好，可使其展开后显色更为明显。参照《中国药典》[4]血竭项下以三氯甲烷-甲醇(19∶1)为展开剂，采用上行展开，结果表明展开情况好，各斑点分离良好，且主斑点Rf值适中。

3.2 儿茶

儿茶有清热收湿、生肌作用，为生肌敛疮之佳品[2]。其主要成分为儿茶素，属于黄烷醇类化合物，在甲醇中溶解，故本实验应用甲醇超声提取样品中的有效成分，发现其提取效果良好。本实验参考文献资料[5]中儿茶薄层鉴别的展开剂，以甲苯-醋酸乙酯-甲酸(6∶5∶0.8)为展开剂，采用上行展开方式，结果表明展开情况良好，各斑点分离良好，且主斑点Rf值适中。

4 结论

张氏仁宝生肌膏含有药味较多，成分较复杂，且因基质为植物油，制剂较为黏稠、流动性差、不易称取，提取较困难，在本实验中，通过有效的前处理，除去干扰杂质，使薄层色谱分离效果好，并且设置阴性对照，用3批样品实验确证，该方法专属性强，血竭、儿茶中有效成分斑点清晰，易于判断、重现性好，能反映该制剂的质量，可用于该制剂的质量控制。