血清及肺泡灌洗液γ 干扰素、血栓素和可溶性B7-H3 在难治性肺炎支原体肺炎中的鉴别诊断价值分析

梁利红

难治性肺炎支原体肺炎（Refractory Mycoplasma Pneumoniae Pneumonia，RMPP）是病情严重且抗感染治疗仍无法有效控制的支原体肺炎，与普通支原体肺炎（Mycoplasma Pneumoniae Pneumonia，MPP）比较，病情更为严重，治疗效果欠佳，具有一定病死率，预后较差［1］。目前支原体培养仍为MPP诊断及检测的金标准，但其阳性率较低，寻找简单、快速、有效的临床诊断指标对于早期控制疾病、提高治疗效果及预后具有重要临床意义。现有研究认为，肺炎支原体（Mycoplasma Pneumoniae，MP）感染后机体炎症反应及其引起的气道黏膜高分泌是导致RMPP及重症MPP的重要影响因素［2-3］。本研究选用RMPP病儿及MPP病儿作为研究对象，以血清及肺泡灌洗液作为研究样本，以γ干扰素（Interferon-γ，IFN-γ）、血栓素（Thromboxane，TXB2）、可溶性B7-H3（Soluble B7-H3，sB7-H3）等炎症介质指标作为研究指标，比较各组病人不同体液中各炎性因子的表达，并分析其诊断价值，旨在为RMPP的早期诊断提供参考。现报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料选择2017 年2 月至2019 年3 月郑州大学附属儿童医院住院治疗的80 例RMPP 病儿作为研究对象，纳入RMPP组；另择同期于郑州大学附属儿童医院治疗的80例普通MPP病儿及50例查体健康的儿童分别纳入MPP组及对照组。

诊断标准：MPP 组病儿及RMPP 组病儿诊断均符合《实用儿科学》中肺炎支原体肺炎诊断标准［4］，经呼吸道病原体检测、痰培养等检查显示MP抗体阳性；RMPP 病儿为应用大环内酯抗生素7 d以上仍无临床体征及影像学改善者。纳入标准：符合MPP 或RMPP 诊断标准；临床资料完整；病儿近亲属或监护人签署知情同意书。排除标准：合并其他病原体混合感染者；合并哮喘、结核等肺部疾病者。本研究符合《世界医学协会赫尔辛基宣言》相关要求。

1.2 方法临床资料收集：收集病儿临床表现、影像学表现及支气管镜检查情况，其中临床表现主要包括咳嗽、肺啰音、呼吸音等肺部表现、肺外受累（消化系统、心血管系统、肝脏、肾脏、皮肤、神经系统）；影像学表现主要为胸腔积液、肺不张等影像学表现；支气管镜检查情况主要包括黏膜糜烂、黏膜脱落、黏液栓形成等。

标本收集：①血清收集：所有病儿入院后采集外周静脉血，对照组受试者查体当天采集外周静脉血，促凝后以3 000 r/min的速度离心10 min，收集上清液保存备用。②肺泡灌洗液收集：术前征求病儿近亲属知情同意，给予2.0%利多卡因雾化局部表面麻醉，肌肉注射阿托品，入室后经鼻腔滴入呋嘛滴剂，采用咪达唑仑镇静，根据病儿选择对应的纤维支气管镜，适量丁卡因胶浆涂抹镜管，插入病变管腔内，观察病灶后进行支气管肺泡灌洗，灌洗液选用37 ℃0.9%氯化钠溶液，体质量＜20 kg 的病儿，灌洗量为1 mL/kg；体质量≥20 kg 的病儿，灌洗量为20 mL，灌洗结束后以13.3～20.0 kPa 负压抽吸灌洗液，灌洗液分装在1.5 mL离心管内，以3 000 r/min离心10 min，收集上清液保存备用。

指标测定：分别测定血清及肺泡灌洗液内IFN-γ、TXB2 和sB7-H3 水平，各指标的测定均采用酶联免疫吸附法，IFN-γ、sB7-H3等指标测定试剂盒由北京晶美生物工程有限公司提供，TXB2 指标测定试剂盒由上海羽朵生物科技有限公司提供，实验操作均严格按照试剂盒说明书进行。

1.3 统计学方法采用SPSS 19.0进行数据处理与统计学分析，计数资料以例（%）表示，组间比较行χ2检验；计量资料以±s 表示，两组间比较行独立样本t检验，三组间比较采用单因素设计的方差分析的方法，三组之间两两比较采用LSD-t检验的方法；两组分类数据的比较采用χ2检验的方法；血清及肺泡灌洗液指标与临床症状的相关性采用Spearman相关性分析，绘制ROC 曲线评价各指标诊断RMPP的价值，检验水准α＝0.05。

2 结果

2.1 一般资料比较三组病儿性别组成、年龄比较未见明显差异，RMPP组病儿发热天数显著高于MPP组（P＜0.05）。见表1。

表1 RMPP、MPP病儿各80例及健康儿童50例一般资料比较

2.2 临床症状表现分析RMPP组病儿肺部呼吸音减低、肺实变、胸腔积液、黏膜糜烂、黏液栓形成等发生率显著高于MPP组（P＜0.05）。见表2。

2.3 各组病儿血清学指标及肺泡灌洗液指标比较RMPP 组、MPP 组病儿血清 IFN-γ、TXB2 和 sB7-H3水平显著高于对照组（P＜0.05），RMPP组血清各指标水平高于MPP 组（P＜0.05）；RMPP 组病儿肺泡灌洗液中 IFN-γ、TXB2 和 sB7-H3 水平均显著高于MPP组（P＜0.05）。详见表3。

2.4 入组病人血清、肺泡灌洗液指标与临床特征的相关性分析血清IFN-γ、sB7-H3 水平与病儿胸腔积液、肺实变发生相关（P＜0.05）；血清TXB2 及肺泡灌洗液IFN-γ、TXB2、sB7-H3 水平与肺部呼吸音减低、肺实变、胸腔积液、黏液栓形成等症状相关（P＜0.05）。见表4。

2.5 血清、肺泡灌洗液指标对RMPP的诊断价值分析ROC曲线分析示，肺泡灌洗液TXB2诊断RMPP的曲线下面积最大，诊断截点值为68.59 pg/mL，诊断灵敏度及特异度分别为85.0%、78.7%。详见表5。

3 讨论

现有研究证实，MP 感染后机体细胞因子水平及免疫功能状态对MP 感染病人疾病发生、发展及预后密切相关［5-6］。本研究对 RMPP 病儿及 MPP 病儿临床症状进行比较，结果显示，RMPP组病儿肺部呼吸音减低、肺实变、胸腔积液、黏膜糜烂、黏液栓形成等发生率高于MPP 组，与前人报道的RMPP 临床症候基本类似［7-8］。目前MPP 如何发展为RMPP的具体机制尚未完全阐释清楚，以往认为可能与MP 耐药性、病毒载量、混合感染、气道黏液高分泌等因素相关，而细胞因子水平也在其中发挥重要作用［9-10］。本研究中 IFN-γ 是 Th1 细胞分泌的主要细胞因子，既往被诸多研究证实在感染性疾病中均存在显著性升高［11-12］。B7-H3是新近发现为共刺激分子B7 家族成员，也是T 细胞的辅助性刺激因子，研究证实其可促进IFN-γ、肿瘤坏死因子、白细胞介素-6的释放，调节机体的炎症反应［13］。TXB2 属于前列腺素家族成员，是花生四烯酸的代谢产物，可与G蛋白受体及TXA2发生反应，在慢性阻塞性肺疾病、哮喘、肺动脉高压等多种肺部疾病的发展过程中发挥重要作用［14］。本研究结果显示，与MPP 病儿比较，RMPP 病儿存在血清及肺泡灌洗液中IFN-γ、TXB2和sB7-H3水平显著升高，且其部分指标与病儿的临床症候呈正相关，提示血清及肺泡灌洗液IFN-γ、TXB2和sB7-H3水平可一定程度反映MPP病儿的病情。既往翟佳羽等［15］研究证实，与普通MPP 比较，RMPP病儿病情更重，血清IFN-γ等细胞因子水平更高，是RMPP发生的独立危险因素；张新星等［16］也证实RMPP组病儿血清sB7-H3水平较MPP更高，本研究在前人研究结果上进一步证实了RMPP病儿存在更为明显的炎性因子亢进状态。

表2 RMPP、MPP病儿各80例临床表现比较/例（%）

表3 RMPP、MPP病儿各80例及健康儿童50例血清指标及肺泡灌洗液指标比较/（pg/mL，±s）

表3 RMPP、MPP病儿各80例及健康儿童50例血清指标及肺泡灌洗液指标比较/（pg/mL，±s）

注：RMPP为难治性肺炎支原体肺炎，MPP为支原体肺炎，IFN-γ为γ干扰素，TXB2为血栓素，sB7-H3为可溶性B7-H3；-为无数值

组别对照组MPP 组RMPP 组F（t）值P 值例数50 80 80血清IFN-γ 104.12±31.02 624.85±158.96 895.63±212.96 355.648 0.000 TXB2 35.85±12.45 195.17±79.63 289.28±89.56 179.126 0.000 sB7-H3 44.15±15.74 312.48±105.71 466.71±127.45 264.223 0.000肺泡灌洗液IFN-γ-45.78±10.27 89.46±34.12（10.964）0.000 TXB2-54.17±17.48 88.45±32.78（8.253）0.000 sB7-H3-107.48±34.71 142.51±44.78（5.530）0.000

表4 难治性肺炎支原体肺炎80例血清学、肺泡灌洗液指标与临床特征的相关性分析（r/P值）

表5 难治性肺炎支原体肺炎80例血清、肺泡灌洗液指标对RMPP的诊断价值分析

本研究结果显示，肺泡灌洗液TXB2诊断RMPP的曲线下面积最大，肺泡灌洗液sB7-H3及IFN-γ次之，而血清 IFN-γ、TXB2 和 sB7-H3 诊断曲线下面积均不足0.7，提示与血清学指标比较，肺泡灌洗液具有更高的诊断效能。分析其原因，血清学炎性因子指标可受多种因素影响，感染、代谢异常等因素均可造成血清指标的波动，不确定因素较多；而肺泡灌洗液是肺部病灶冲洗收集的液体，其水平可直接反应病灶部位的炎症状态，诊断价值更高［17］。本研究结果中肺泡灌洗液TXB2诊断截点值为68.59 pg/mL，诊断灵敏度及特异度分别为85.0%、78.7%，具有较高的诊断价值。既往研究证实，TXB2 水平与气道黏膜栓形成相关，病原体进入呼吸道后可刺激吞噬细胞释放TXB2，其水平升高刺激机体C反应蛋白合成增多，而TBX2同时作为一种血管收缩剂，其可引起血小板聚集及气道平滑肌收缩，增加气道高反应性，同时促使血管渗透性增高，增加气道分泌物，加重气道炎症反应，最终导致气道黏膜栓的形成［18-19］。而有研究报道，大量气道黏膜栓是导致难治或重症MPP发生的重要危险因素［20］，因此，推测TBX2对机体炎症及气道高反应的控制是其具有较高诊断效能的可能机制。

综上，与MPP比较，RMPP病儿存在血清及肺泡灌洗液 IFN-γ、TXB2 和 sB7-H3 的明显升高，可用于疾病诊断，各指标中，肺泡灌洗液TXB2 诊断RMPP的诊断效能最高，可作为RMPP 早期诊断的参考指标。