试验用山羊血型及临床应用

王振芳，王 亚，马建青，郑丽红，王 帅，张晶梅

(1.冀中能源邢台矿业集团总医院，河北 邢台 054000；2.邢台市第三医院，河北 邢台 054000)

近年来，临床科研人员利用试验山羊模拟骨外科高新术式越来越多。然而，在模拟试验过程中，有的山羊出现失血，甚至个别山羊出现大出血现象，直接影响临床新技术研究的成败。此时及时准确给山羊进行血液补给尤为重要。若要给试验山羊输血，寻找试验山羊的匹配血型是首要问题。有学者对试验山羊的血型进行了初步探讨[1-2]，为了不断提高临床医疗水平，实现精准医疗。了解掌握试验用山羊的血型及其临床意义很有必要。因此，笔者对试验用山羊的红细胞进行了ABO、Rh、MN三个血型系统的血型研究分析。现报告如下。

1 材料与方法

1.1 试验动物 试验用山羊为本院骨科研究所中心饲养及邢台县当地山羊，共计102只。母羊63只，公羊39只，山羊年龄为1～2岁，体重为24～46 kg，平均体重为35 kg。

1.2 主要试剂与仪器 抗-D、抗-C、抗-c、抗-E、抗-e。抗-M、抗-N标准血清(批号：20183102、20183203、20185605)，购自上海血液生物医疗有限责任公司；A型血红细胞、B型红细胞、O型红细胞(批号：20180607、20181025)；微柱凝胶血型卡(批号：20180610)、TD-3A型血型血清学离心机、FYQ免疫微柱孵育器，均购自长春博德生物技术有限责任公司。2005-2型血库专用离心机(BaSo贝索)。

1.3 方法

1.3.1 血样采集及处理 首先将山羊卧倒，使山羊头抬起与身体成90°，采血者右手固定山羊颈部，在颈静脉1/3处颈静脉沟内消毒，直径约4 cm×4 cm， 左手拇指按压山羊颈静脉使其充盈，右手持采血针沿颈静脉纵向45°角刺入血管中。采集3 mL EDTA抗凝全血，3 400 r/min离心10 min，分离血浆待检。

1.3.2 ABO血型检测 选用微柱凝胶卡方法：将微柱凝胶卡的6支凝胶微管做好标记，撕开封口膜，将待检山羊0.8%红细胞悬液分别加入第1～3微管中，每管50 μL；再将被检山羊血清分别加入第4～6 微管中，每管50 μL；然后将已知A型、B型及O型标准红细胞(0.8%浓度)分别加入第4～6微管中，每管50 μL。即刻使用专业离心机3 400 r/min离心5 min，取出,肉眼观察结果。

1.3.3 Rh血型、MN血型检测 选用经典试管法：准备100 mm×13 mm试管若干支，做好标记。每管加1滴抗血清于试管底部，再加1滴3%～5%被检山羊红细胞悬液于试管底部，混匀。以转速1 000 r/min离心1 min,或转速3 400 r/min离心15 s。然后取出试管轻轻摇动，使试管内容物重新悬浮。借助显微镜观察结果。

2 结果

2.1 山羊ABO血型 试验山羊结果显示，既无ABO血型系统的A抗原、也无ABO血型系统的B抗原，存在类似人类O型血型特征(见表1)。

表1 山羊ABO血型检测结果Table 1 Results of ABO blood group examination in goats

2.2 山羊Rh(D、E、e、C、c)及MN血型 采用试管法对102只试验山羊血型标本进行Rh血型系统的D、E、C、c、e抗原检测，同时用同样方法将试验山羊血标本进行M、N血型抗原检测。通过试验发现，D抗原、C抗原、c抗原、e抗原、N抗原阳性数均为0，即阴性率为100%。结果显示，102只试验山羊中发现6只山羊红细胞上含有E抗原，3只山羊红细胞上含有M抗原(见表2)。

表2 山羊Rh(D、E、e、C、c)及MN血型结果Table 2 The results of RH (D,E,e,C,c) and MN blood group of goats

3 讨论

目前尚无市售山羊的血型抗原抗体检测专用试剂，笔者选用微柱凝胶卡氏法对试验山羊ABO血型进行了检测分析；采用经典的试管法对试验山羊Rh及MN血型进行研究。微柱凝胶卡新技术近年来已在血型血清免疫学方面作为常规技术应用[3]，其原理是采用微试管凝胶凝集技术，将凝胶及抗人球蛋白血清抗体或其他抗体装入微柱中离心，将发生凝集反应的红细胞阻滞于凝胶之内，而未凝集的单个红细胞则穿过凝胶间隙运动至管柱底，从而区分有无凝集反应。同传统方法相比，该方法主要优点为血清学操作标准化[4]，重复性好，容易掌握，无需经验，减少标记，降低了错误发生率。此外，该方法的结果易判断[5]，凝集在上层为阳性，停留在下层为阴性。此方法结果稳定，可保存、可拍照、可存入计算机，并易复检。此方法检测试验动物山羊ABO血型试验标准、结果可靠。

试验山羊的Rh及MN血型系统的血型采用经典的试管法检测。传统的经典试管法是血型血清学检测的金标准，该方法准确且成本低，可用于疑难/特殊血型鉴定。尤其对一些弱血型抗原抗体更易发现。就人类的血型而言，ABO血型系统的抗原比Rh及MN血型系统血型抗原强得多。比如：ABO血型系统内的A型红细胞表面上A抗原位点有80～100 万个；B型红细胞表面抗原位点有75万个；而Rh血型系统内的“-D-”(属于C、c、E、e缺失型)的D抗原位点有20万个，正常的D抗原位点1～3万个，弱D抗原位点只有700～4 000个。MN血型系统的抗-M、抗-N血型抗体为天然抗体，是一种冷抗体，在检测血型时，室温20 ℃左右可出现弱凝集，要注意观察血型结果，这种冷抗体在4 ℃凝集较强。试验动物山羊血液中的红细胞抗原及血清中的血清抗体不像人类那么高，且红细胞上的特异性抗原较少。故试验人员在检测试验动物山羊血型之前，一定要根据试验动物山羊的血清学特点，筛选出适合山羊血清学检测的敏感方法。

由表1可知试验山羊ABO血型均为类人O型，即试验山羊的红细胞加入单克隆抗-A、抗-B血清后均出现阴性反应，山羊的血清分别加入A、B、O三型标准红细胞后，凝集强度为2+～4+。通过以上正反定型综合分析，符合ABO血型系统的O型。因此，将试验山羊ABO血型最终定为类人O型。但从试验山羊ABO血型鉴定中的对照管中发现了新的问题，即试验山羊血清与人类标准O型红细胞反应时出现凝集现象。笔者推测，这一凝集现象的出现，可能是试验山羊血清中存在着一种抗人类红细胞的抗体，再者也可能是鉴定山羊血型所用的标准红细胞是由人类红细胞筛选制备。因人类的红细胞和山羊的红细胞在膜电位和凝集的最适溶液离子强度等方面存在差异，故两者的红细胞不完全匹配所致。因此有必要对试验山羊的红细胞膜上的抗原位点的多寡及血清中的特异性抗体进行研究，为试验山羊的血型深入研究提供科学基础。

本试验通过经典试管法对102只试验山羊进行了稀有血型调查。山羊稀有抗原检测主要由：D、E、e、C、c、M、N七种稀有血型抗原。人类Rh血型抗原的强度仅次于ABO血型的A、B抗原。Rh血型阴性者有50%～75%，通过输血治疗或妊娠可使红细胞上的D抗原免疫而产生抗-D。Rh血型抗原中，抗原的强度依次为D>E>C>c>e[6-7]，均显示剂量效应，即在遗传方式上，同质结合子比异质结合子强。MN血型系统在遗传学、输血学及亲子鉴定等方面有其重要作用。掌握各地区山羊MN血型的分布及特征情况具有一定的临床意义。据王振芳报道[8]，河北省邢台地区汉族人MN血型分布为M型最多，平均为50.50%；其次为MN型，平均为26.91%；N型最少，平均为22.59%。试验山羊的稀有血型尚无报道。此次试验发现了6只E血型试验山羊；3只M血型试验山羊。由此笔者推测试验山羊可能存在有类人类血型系统的血型，为今后掌握应用试验山羊的其他血型系统的研究提供了思路。

本试验采用不同方法，对试验山羊血型进行了系统研究，既发现了ABO血型系统的O型山羊，又检测到Rh血型系统的E抗原，还印证了MN血型系统的M抗原的存在。总之，了解掌握山羊的血型有其重要意义，特别有助于山羊在新术式试验过程中提高试验效果，延长山羊的生命；也有助于山羊创伤输血救治；同时也促进了动物学、动物免疫学、动物遗传学、动物输血学等动物多学科的发展。