紧密连接蛋白Claudin6在乳腺癌中的表达及临床意义

李雪松 王立平 谭佳音

【摘 要】目的：研究紧密连接蛋白Claudin6在乳腺癌中的表达及临床意义。方法：收集2018年8月到2019年7月齐齐哈尔医学院病理诊断中心标本，其中乳腺癌组织78例和对应的癌旁正常组织44例，采用免疫组化法检测乳腺癌组织中Claudin6的表达情况。结果：乳腺癌中Claudin6阳性表达率低于癌旁正常组织，Claudin6在乳腺癌中的表达（66.67%）与癌旁正常组织的表达（88.64%）比较差异无统计学意义（P>0.05）。结论：为后续研究Claudin6在乳腺癌的发生、侵袭和转移中的作用奠定基础，也为临床治疗提供依据。

【关键词】乳腺癌，Claudin6，免疫组化法

【中图分类号】R737.9 【文献标识码】B    【文章编号】1002-8714（2020）07-0047-01

乳腺癌是影响我国女性健康的最常见的恶性肿瘤之一，乳腺癌的发病率居于我国女性癌症发病率第一位[1]。紧密连接蛋白Claudins是紧密连接复合物的主要构成成分，参与维持紧密连接的选择性渗透和细胞极化[2]。有研究显示，Claudins蛋白可能在多种肿瘤的发生，浸润及转移中发挥重要作用[3]。到目前为止，已有 27种 Claudins 蛋白家族成员在人体内被发现，其序列的一致性为12.5%～69. 7%，大部分相对分子质量为20000～27000，目前已有 21 种被鉴定在人类身体中存在[4]。Claudin6是Claudins蛋白家族的 27 个成员之一。本实验通过免疫组化的方法分析Claudin6在乳腺癌组织中的表达为后续研究Claudin6 在乳腺癌发生发展及转移过程中可能起到的作用奠定基础。

1 材料与方法

1.1材料来源：收集2018年8月到2019年7月齐齐哈尔医学院病理诊断中心标本，其中乳腺癌组织78例和对应的癌旁正常组织44例患者术前均未经任何抗癌治疗。乳腺癌组织标本均为女性，患者年龄最大78岁，最小22 岁，平均年龄为47.8 岁。乳腺癌标本及癌旁正常组织用10%中性缓冲福尔马林液常温固定后脱水包埋，制成蜡块。

1.2主要仪器和试剂：光学显微镜，电热恒温培养箱，Claudin6羊抗人多克隆抗体，SP免疫组化试剂盒。

1.3免疫组织化学染色 采用免疫组织化学SP法对78 例乳腺癌组织和 44例癌旁正常组织的Claudin6进行了检测。固定包埋乳腺癌组织标本，以 2-3?m 厚切片，脱蜡水化;抗原修复;滴加 3% H2O2，室温孵育 15min，PBS冲洗，5min×3 次;滴加即用型正常山羊血清，室温孵育 30min，滴加 0.01M PBS 稀释的一抗（1：100 PBS 稀释羊抗人 Claudin6 多克隆抗体），4°C冰箱过夜。PBS 冲洗，5 min×3 次;滴加生物素标记的二抗，室温孵育 20 min。PBS 冲洗，5 min×3 次;滴加链霉素亲生物素-过氧化物酶溶液，室温孵育 20 min，PBS 冲洗，5 min×3 次;滴加新鲜配制的 DAB 显色剂，显微镜下观察显色;自来水冲洗，苏木精复染，酒精脱水，二甲苯透明，中性树胶封片。以PBS 代替一抗做阴性对照。

1.4免疫组化结果判定 Claudin6表达在细胞胞膜或者胞浆中， 呈棕黄色或者棕褐色均匀或者有颗粒状染色。观察阳性细胞的数量与分布， 在20×10倍显微镜下任意选取5个视野， 计算出平均每个视野中阳性细胞百分率， 阳性细胞数<5%为阴性， 阳性细胞数≥5%为阳性。

1.5 统计学分析 所有数据资料应用SPSS22.0统计软件进行数据统计处理， P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

78例乳腺癌组织中52例Claudin6表达阳性，阳性率为66.67%（52∕78）。44例癌旁正常组织中39例Claudin6阳性表达，阳性率为88.64%（39∕44）。Claudin6 在乳腺癌组织中的表达低于癌旁正常组织，棕褐色颗粒定位于乳腺癌细胞及癌旁正常细胞的细胞膜或者细胞浆中，但两者比较差异无显著性（P>0.05）。

3 讨论

Claudin6 在乳腺癌组织中的表达课题组在前期研究工作中克隆和鉴定了与乳腺癌表型抑制相关的Claudin6 基因，同时发现在鼠和人的乳腺癌细胞中此基因表达很低，推测Claudin6可能靶向作用于TJs，或许在抑制乳腺癌表型中能够起到一定的作用。最新研究显示，TJs 与某些人类肿瘤细胞的侵袭和转移有关。目前认为，Claudins 家族不同成员在不同肿瘤中表达各不相同，所代表的生物学意义也有所不同[5]。为了探讨Claudin6 在乳腺癌发生发展及转移过程中的作用，本实验采用免疫组化技术对78例乳腺癌标本和44例癌旁正常组织进行Claudin6表达的检测。结果显示，Claudin6主要表达于乳腺组织的胞膜和胞浆中，而在乳腺癌组织中Claudin6 多表达于胞浆。本实验结果显示，Claudin6在乳腺癌的表达（阳性率66.67%）低于癌旁正常组织（阳性率88.64%），但差異无显著性（P>0.05）。这也为后续研究Claudin6在乳腺癌的发生、侵袭和转移中的作用奠定基础，同时也为临床治疗提供参考依据。

参考文献

[1] 骆丽，马国荣，刘凤阁，等. 紧密连接蛋白-1、3、4在乳腺癌患者中的表达及其临床意义[J]疑难病杂志，2017.16（6）.610-613

[2] 邢晓辉，李力仙，郭天林.等.Claudin蛋白在紧密连接中的作用机制及与疾病的关系[J/OL].中华临床医师杂志·电子版，2013.7（23）：10839-10841

[3] 刘丽丽，赵霞.Claudin蛋白在卵巢癌中的研究进展[J].四川解剖学杂志，2014，22（ 1） ：

22-25.

[4] 于凤娇，达林泰Claudins 蛋白与恶性肿瘤转移相关性的研究进展[J] 医学综述，2017 .7（23）.

1316-1319

[5] 刘亚芳，李久霞，张广超.等.紧密连接蛋白CLDN6在卵巢癌、肝癌以及脑膜瘤组织中的表达及意义[J] 吉林大学学报（医学版）2010.7（4）.698-702