豫南地区布鲁氏杆菌的流行病学调查

2020-10-20陶长城

养殖与饲料 2020年10期

陶长城

河南省信阳市动物卫生监督所，河南信阳464000

近年来，河南省很多地区布鲁氏杆菌病感染率呈现逐年增加的趋势，2016年达4 000 多例。为了防控布鲁氏杆菌病传播，2017年河南省动物强制免疫实施“两进两退”，把布鲁氏杆菌作为牛、羊必免的疫病之一开始免疫接种。为了摸清布鲁氏杆菌病在信阳地区的感染情况和危害程度，制定科学的防控措施提供技术支持，2016-2017年间，笔者在信阳七县三区范围内对牛、羊和猪开展布鲁氏杆菌病的流行病学调查和采样后进行实验室检测。

1 材料与方法

1.1 流行病学调查

2016-2017年，对信阳市七县三区的年存栏50头以上的养牛场94 个、年存栏100 头以上的羊场63 个、5 个规模养猪场进行布鲁氏杆菌病的流行病学调查，20 个牛场采集血样，每个牛场随机抽取5份血样，还抽取3 个牛组织样（来自有流产发生的2个牛场）；30 个羊场采集血样，每个羊场随机抽取10 份血样，在有流产发生的羊场采集18 例组织样；猪场采样5 个场，每个场随机抽取血样20 份。

1.2 实验室检测

1）病原学检测：采集流产胎儿或胎盘21 例，直接涂片镜检。其中牛3 例，羊18 例，牛的其中1 例采集地是浉河区，另2 例来自息县，羊的18 例分布在各个县区。

2）血清学检测：初检使用国标（GB/T18646-2002）虎红平板凝集试验，复检使用国标（GB/T18646-2002）试管凝集试验。

①材料与准备：抗原、标准阴性血清、标准阳性血清都是购自青岛动物流调所，60 cm×60 cm 的干净玻板3 块（玻板上划成4 cm×4 cm 的方格），吸管（1 滴0.03 mL），牙签，一次性手套、口罩等防护用具。

②操作方法：在干净的玻板方格中加注阴性血清、阳性血清、受检血清，再在血清旁加1 滴抗原，用牙签混匀。

③判断：在阴性对照、阳性对照成立的情况下，对被检血清进行判定，受检血清4 min 内出现肉眼可见凝集现象判为阳性，无凝集现象成均匀粉红色者判为阴性。

3）虎红平板凝集试验。虎红平板凝集试验阳性的受检血清样品带回实验室进一步做布病的试管凝集试验。

①材料与准备：0.5%石碳酸、10%盐溶液稀释液，抗原、标准阴性血清、标准阳性血清都是购自青岛动物流调所，凝集试管、试管架，吸管，恒温培养箱，一次性手套、口罩等防护用具。

②以羊、猪为例稀释受检血清：第1 试管加入1.15 mL 的稀释液，第2～4 试管各加入0.5 mL 稀释液，然后用1 mL 吸管吸取被检血清0.1 mL 加入第1 试管内混匀（混匀方法：将试管内混合液吸入吸管，再沿试管壁徐徐吹入试管中，如此吸入吹出3～4次充分混匀），用该吸管吸入0.25 mL 混合液弃去。再从第1 个试管内吸取0.5 mL 混合液加入第2 个试管，用该吸管如前法混合均匀，再从第2 试管内吸取0.5 mL 混合液加入第3 个试管，如此倍比稀释至第4 试管，弃去0.5 mL 混合液，稀释完毕后从第1～4 试管血清稀释度依次为1∶12.5、1∶25、1∶50、1∶100。牛的血清稀释法与上述基本一致，只是第1管加1.2 mL 稀释液和0.05 mL 被检血清。将0.5 mL 20 倍稀释的抗原加入已稀释好的血清管中并振摇均匀，羊和猪的血清稀比例释依次是1∶25、1∶50、1∶100、1∶200，牛的血清稀释比例依次是1∶50、1∶100、1∶200、1∶400。阴性对照、阳性对照稀释和加抗原的方法与被检血清相同，抗原对照：20 倍稀释抗原液0.5 mL，再加0.5 mL 稀释液观察抗原是否有自凝现象。放置在37～40 ℃恒温培养箱中24 h 取出检查并记录结果。

③判定：参照比浊管判定凝集度，比浊管的制备见表1。

表1 比浊管的制备

牛的1∶100 血清稀释，猪、羊的1∶50 血清稀释出现++凝集时受检血清判为阳性；牛的1∶50血清稀释，猪、羊的1∶25 血清稀释出现++凝集时受检血清判为可疑，可疑的家畜经3～4 周后重检如果仍为可疑，牛、羊判为阳性，猪重检可疑，可根据临床症状和同场内有没有大量阳性病例判定，如没有则可判为阴性。

2 结果与分析

采集20 个养牛场100 份血清样品，只有8 份阳性样品，阳性率8%，阳性场有2 个，阳性率10%。根据流行病学调查和检测结果表明信阳地区养牛场有布鲁氏杆菌感染：采集20 个养牛场100 份血样，只有8 份阳性，阳性率8%，阳性场有2 个，阳性率10%。养羊场病原学没有发现阳性，血清学检测30 个场，阳性场数21 个，阳性率70%，样品阳性数126，样品阳性率42%。养猪场病原学没有发现阳性，血清学5 个场100 份样，只有1 个阳性，阳性率1%。血清学检测阳性是疫苗免疫的结果。