血凝和血凝抑制试验

2020-10-15陈美艳罗福斌

云南农业 2020年9期

陈美艳，罗福斌，任芬

（1.新平县动物疫病预防控制中心，云南新平 653400；2.新平县畜牧站，云南新平 653400）

血凝、血凝抑制试验是目前兽医实验室用于禽疫苗免疫抗体水平监测技术，也可用已知标准阳性血清（抗体）监测是否有该病毒（抗原）的存在。实验室用血凝、血凝抑制试验检测鸡血清中禽流感和新城疫抗体，其血凝反应（HA）可以理解为，禽流感病毒和新城疫病毒或其血凝素能和鸡红细胞发生凝集反应致使红细胞不能自然沉降。血凝抑制反应（HI）理解为，当禽流感和新城疫工作抗原和血清样品中抗体反应后，则红细胞就不能再与工作抗原发生反应，这时红细胞就呈现出自然沉降现象，当血清样品抗体不足以和工作抗原反应时，工作抗原就和红细胞发生凝集反应。

1 材料与方法

1.1 供试材料和试剂

96孔U型微量反应板、移液枪及配套滴头，禽流感病毒H9亚型血凝抑制试验抗原、禽流感病毒H9亚型阳性血清、阴性血清、体积分数为1%鸡红细胞悬液、灭菌生理盐水和加样槽。

1.2 试验方法

为避免出现红细胞自凝现象，一般选用至少3只健康公鸡分别采血，并清洗红细胞后配制成体积分数为10%红细胞悬液，最后配制成体积分数为1%红细胞悬液。若1%鸡红细胞悬液用量大于100 mL时也可直接配制。一般按照等比例混匀体积分数为1%鸡红细胞悬液，如在试验过程中遇到特殊情况，无法满足等量比例混合时也可适当调整比例。整个试验过程只能使用同1份鸡红细胞悬液，并保持混匀以确保红细胞均匀；如有红细胞破裂或者被污染情况，试验无效。

1.2.2 血凝（HA）试验，即抗原效价

按照中华人民共和国国家标准进行血凝试验，根据熟练程度选择平行测定抗原血凝效价，一般选择3个平行测定，U型微量反应孔反应体系为0.075 mL混合液。使用抗原：禽流感病毒H9亚型血凝抑制试验抗原，批号：2018006，生产日期：20181228，有效期至20201227，生产厂家：哈尔滨维科生物技术有限公司。

1.2.3 4HAU抗原标定试验

选用4单位抗原、2单位抗原、1单位抗原，1/2单位抗原、1/4单位抗原和1组生理盐水对照进行标定。U型微量反应孔反应体系为0.05 mL混合液。

1.2.4 血凝抑制试验（HI）

按照中华人民共和国国家标准进行血凝抑制试验，U型微量反应孔反应体系为0.075 mL混合液。使用阳性血清名称：禽流感病毒H9亚型阳性血清，批号：2018002，生产日期：20180906，有效期至20200907。生产厂家：哈尔滨维科生物技术有限公司。

2 结果与分析

2.1 抗原血凝（HA）试验

室温23 ℃下静置40 min观察结果。图1、图2为禽流感病毒H9亚型血凝抑制试验抗原血凝试验结果。

以完全血凝（将反应板倾斜时红细胞不滑落）的抗原最高稀释倍数为一个血凝单位（HAU）为判定标准，该试验对照孔上层清亮，红细胞完全沉降，故将上述抗原血凝的终点滴度判定为1∶512，则4HAU工作抗原的稀释倍数为1∶128。同时也配制稀释倍数为1∶64 的工作抗原。

全内脏反位(Situs Inversus Viscerum)又称“镜面人”或“镜像人”，是指人的心脏、肝脏、脾脏、胆囊、肾脏、胃、肠等器官的解剖位置与正常人完全相反。此种病例极其罕见，最近本院脊柱外科收治1例“镜面人”合并腰椎间盘突出症病例，采用经Quadrant通道系统椎间孔腰椎椎间融合术(Mis-TLIF)治疗，现将诊治过程报道如下。