电针“三阴交-悬钟”对类痛经模型大鼠子宫内皮素（ET）、一氧化氮（NO）的影响

辛思源 郭建恩 徐大钊 林凤 李春华

摘 要：通过观察电针对类痛经模型大鼠的镇痛效应及子宫内皮素（ET）、一氧化氮（NO）的影响，探讨针刺缓解胞宫疼痛的作用机制及“三阴交-悬钟”的特异性。得出结论：电针“三阴交-悬钟”能够调节子宫ET及其ET/NO的比值，以此缓解子宫平滑肌痉挛的状态，来缓解胞宫疼痛，且针刺“三阴交-悬钟”治疗痛经具有特异性。

关键词：电针;三阴交-悬钟;痛经;扭体反应;内皮素;一氧化氮

临床上常用相对穴“三阴交-悬钟”来治疗痛经。当前，运用电针调节类痛经大鼠ET、NO的相关研究较少，因而，本实验采用电针模型大鼠相对穴“三阴交-悬钟”、三阴交穴、悬钟穴以及非穴，观察子宫ET与NO的水平，用以初步探究电针相对穴“三阴交-悬钟”缓解胞宫疼痛的内在机制，初步探讨相对穴“三阴交-悬钟”的特异性。

一、实验材料

（一）实验动物与分组方法

本动物实验选用48只清洁级健康雌性SD大鼠，鼠龄为3个月，体重为（240±20）g，性成熟且未交配。饲养期给予普通清洁级饲料和自由饮水，室温为（20±1）℃，湿度为（45±5）%，日光灯照射。采用完全随机法将大鼠分为8组，即对照组、模型组、三阴交组、悬钟组、“三阴交-悬钟”组、非穴组，每组8只。

（二）主要仪器与实验试剂

G6805-Ⅱ型电针治疗仪;一次性针灸针;苯甲酸雌二醇注射液;缩宫素注射液;内皮素（ET）ELISA试剂盒;一氧化氮（NO）试剂盒。

（三）模型制备

选择动情间期的大鼠来制备实验性类痛经模型。模型组、各电针组：连续10d皮下注射苯甲酸雌二醇，第1天和第10天每只大鼠皮下给药0.5mg，余下日为0.2mg，待第10天注射苯甲酸雌二醇1h后给予腹腔注射缩宫素0.2mL/只。对照组：每日每只大鼠皮下注射同等剂量的生理盐水，待第10天皮下注射生理盐水1h后给予腹腔注射生理盐水02mL/只。

（四）实验取穴及针刺方法

实验取穴：根据大鼠的生理特点以及形态和解剖位置，引用《实验针灸学》穴位定位标准，选取“相对穴”三阴交-悬钟穴。三阴交穴位于大鼠后肢内踝尖上10mm;悬钟穴位于大鼠后肢外踝尖上10mm，腓骨前缘;非穴选取与三阴交、悬钟穴处于同一水平，旁开对照点选各穴左侧旁开3mm处。每组皆为双侧取穴。

电针方法：三阴交、悬钟和非穴均为直刺3mm左右，相对穴“三阴交-悬钟穴”为透刺，透刺方向为三阴交透悬钟，并在穴位的近心端旁开约2～3mm处再刺一针，刺入皮肤即可，两针之间置一棉球，防止短路，并用胶布加以固定。两针分别连电针仪正极、负极，刺激频率为2/15Hz，强度为1mA，20min。在实验开始开始后的第1、3、5、7d进行实验干预，共4次。对照组与模型组以同样的方法和时间固定，不给予电针处理。

（五）大鼠扭体反应评定

扭体反应是目前公认的评价指标，扭体行为可分为0至3四个等级。0级表现为正常的姿势（前爪平放盒底/正常探查行为）;1级表现为身体斜向一边;2级表现为后肢伸展和后爪背屈，躯体伸展并伴频繁地盆骨侧向旋转;3级表现为腹部肌肉收缩和后肢后伸。本实验记录20min内扭体评分及扭体反应潜伏期。扭体评分：总分=0级×0分+1级×1分+2级×2分+3级×3分，扭体潜伏期：注射缩宫素后直至出现扭体反应的时间段。

（六）实验取材及检测方法

待扭体反应评分结束，即刻摘取大鼠的子宫，并将其置于生理盐水中煮沸5min后称重，而后放于玻璃匀浆管，加入1N的HCL1mI，再用匀浆机匀浆，充分匀浆后室温放置100min，再加入1N的NaO110.8ml，使之中和到一定的PH值;3500rpm离心15min后，取上清液，置于-70℃保存以备用。模型大鼠子宫ET的含量需用ELISA的方法来测定，NO的含量需用化学发光法来测定。

（七）统计学方法

应用SPSS21.0统计软件进行分析，实验数据用均数±标准差（x±s）来表示。各组间差异采用单因素方差分析，并以LSD对每两组间的差异加以分析，以P<0.05表示差异具有统计学意义。

二、结果

（一）电针对扭体的影响

与对照组相比，模型组大鼠的扭体评分值明显增高，扭体潜伏期时长明显缩短（P<0.01），证实模型大鼠已制备成功。与对照组相比，各电针组大鼠的扭体评分均明显增高（P<0.01），扭体潜伏期时长（除“三阴交-悬钟”组）明显缩短（P<0.01）。与模型组相比，相对穴“三阴交-悬钟”组扭体评分明显减少（P<0.01），“三阴交-悬钟”组，三阴交穴组的扭体潜伏期时长明显延长（P<0.05，P<0.01）。

各电针组之间比较，相对穴“三阴交-悬钟”组扭体潜伏期较三阴交组、悬钟组、非三阴交-悬钟组均明显延长（P<0.01）;相对穴“三阴交-悬钟”组的扭体评分较三阴交组、悬钟组、非三阴交-悬钟组均明显降低（P<0.05，P<0.01）。详见表1。

（二）电针对子宫ET和NO的含量、以及ET/NO比值的影响

与对照组相比，模型组大鼠子宫ET的含量，以及ET/NO的比值明显升高，而NO的含量则明显降低（P<0.01），各电针组ET含量（除“三阴交-悬钟”组）明显升高，NO含量、ET/NO比值（除“三阴交-悬钟”组）明显降低（P<0.01）。与模型组比较，“三阴交-悬钟”组子宫ET含量明显降低，NO含量明显升高，ET/NO比值明显降低（P<0.01）。

各电针组之间比较，“三阴交-悬钟”组子宫ET含量、ET/NO比值较三阴交组、悬钟組、非三阴交-悬钟组均明显降低（P<0.01），“三阴交-悬钟”组NO含量较三阴交组、悬钟组、非三阴交-悬钟组均明显升高（P<0.01）。详见表2。

三、讨论

文献研究显示，痛经是针灸治疗妇产科疾病中应用最多的病种[1]，且“三阴交-悬钟”的联合应用对于痛经具有较好的治疗效果。本研究中模型组大鼠子宫ET的含量、ET/NO比值较对照组明显升高，NO含量明显降低，提示ET对子宫动脉的收缩作用较为敏感，大鼠痛经状态下，ET增加，使二者比值失衡。有研究发现，ET/NO比值可以作为瘀血证严重程度的指标之一[2]。本实验中，模型组大鼠ET/NO的比值明显升高，这说明二者之间比重失衡，从而导使子宫内组织缺血缺氧，发生或加重痛经。

与模型组比较，三阴交-悬钟组子宫ET含量均明显降低，NO含量均明显升高，ET/NO比值均明显降低，提示：电针“三阴交-悬钟”可通过调节子宫ET、NO含量及ET/NO比值，使子宮平滑肌的痉挛状态得以缓解，进而使胞宫疼痛得以缓解。各电针组间相比较，相对穴“三阴交-悬钟”组子宫ET含量、ET/NO比值较三阴交组、悬钟组、非三阴交-悬钟组均明显降低，提示电针“三阴交-悬钟”可能通过调节子宫ET、NO的含量来调节ET/NO的平衡，其作用较单纯电针“三阴交”“悬钟”非穴更显著。进一步提示“三阴交-悬钟”在调节子宫的平滑肌及其舒缩物质方面的有一定的特异性，这或许与相对穴“三阴交-悬钟”的内在的协同增效作用有关。

本实验研究初步证实：电针相对穴“三阴交-悬钟”可调节血管舒缩物质且其作用有一定的特异性，从而进一步证实疼痛调控效应的存在，初步证实“三阴交-悬钟”对胞宫疼痛的特异性调控作用，后期将继续对“三阴交-悬钟”调节胞宫疼痛的作用机制进行深入探讨。

参考文献：

[1]杜元灏，李晶，孙冬纬，等.中国现代针灸病谱的研究.中国针灸，2017，27（5）：373-378.

[2]余运贤，梁晖，黄健，等.急性脑梗塞血瘀证与一氧化氮、内皮素相关性研究[J].中国中西医结合杂志，2017，20（7）：501-503.

基金项目：2018年4月河北省高等学校科学技术研究项目：基于三阴交-悬钟对疼痛的调控作用探讨相对穴与经穴效应的相关性（No.NQ2018082）

作者简介：辛思源（1986—），女，汉族，河北承德人，硕士，讲师，主治医师，研究方向：经穴主治规律研究。

*通讯作者：李春华（1982—），女，汉族，河北保定人，博士，副主任医师，研究方向：穴位效应特异性研究。