诺丽酒降血脂功能研究

李晓娟 -

(株洲千金药业股份有限公司，湖南 株洲 412007)

诺丽(MorindacitrifoliaLinn)是一种生长于热带、亚热带沿海地区的茜草科药用植物[1]，其叶、茎、根、花、果实均能入药[2]，含有多酚、黄酮、多糖、环烯醚萜、生物碱、矿物质和维生素等营养活性成分[3-5]，具有清除自由基、抗氧化、抗衰老、抗肿瘤、抗炎症等功效[6]，能显著调理高血脂、高血压、糖尿病等疾病[7]，促进高脂肪和高胆固醇饮食中的心脏保护作用[8]。

目前，高血脂病具有胆固醇过高、甘油三脂过高等临床表现[9-11]，他汀类等化学药物可降低人体血清胆固醇，但伴有明显的副反应[12]。因此，开辟新的生物降脂途径是当前医药研究者迫切需要解决的热点难题[8]。诺丽酒是对纯诺丽果果汁进行自然发酵[13]而得，而有关诺丽酒及诺丽降血脂功能的相关报道较少[14]。研究拟通过动物试验对诺丽酒的降血脂功能进行评价，为诺丽在高血脂症患者饮食辅助治疗中的应用提供依据，对控制高血脂症的发病率和促进诺丽果资源精深加工具有重要意义。

1 材料与方法

1.1 材料与仪器

1.1.1 材料与试剂

C57/6小鼠：80只，4周龄，体重(11.81±0.36) g，上海斯莱克试验动物有限责任公司，江南大学实验动物中心饲喂；

诺丽酒：具体理化指标见表1，株洲千金药业股份有限公司；

表1 诺丽酒的理化指标

盐酸、葡萄糖、次甲基蓝、五水硫酸铜、四合水酒石酸钾钠、氢氧化钠、福林酚试剂、碳酸钠、DNS显色剂、没食子酸：分析纯，阿拉丁试剂有限公司；

RPMI 1640细胞培养基、高密度脂蛋白(HDL-C)试剂盒、低密度脂蛋白(LDL-C)试剂盒、甘油三酯(TG)试剂盒、胆固醇(TC)试剂盒：南京建成生物工程研究所。

1.1.2 主要仪器设备

全波长酶标仪：BioTek Epoch型，美国Biotek公司；

气相色谱仪：7890B型，安捷伦公司；

糖度仪：DZS706型，日本爱拓科学仪器有限公司；

流式细胞仪：FACSCalibur型，美国BD公司；

pH计：PAL-1型，上海仪电科学仪器股份有限公司；

离心机：5804R型，德国Eppendorf公司；

电子天平：AL204型，梅特勒—托利多仪器有限公司；

细胞培养箱：BBD6220型，美国Thermo Fisher 公司；

高通量快速实时荧光定量PCR仪：7900型，美国ABI公司。

1.2 方法

1.2.1 试验动物分组 80只C57/6小鼠随机按每10只为一组进行分组。① 正常组(低脂对照组，LFD)，饲喂低脂日粮(10%能量来源于脂肪)；② 低脂+低/中/高剂量诺丽酒组(LFD+LN/MN/HN)，饲喂低脂日粮和添加低/中/高剂量诺丽酒的饮用水；③ 高脂组(HFD)，饲喂高脂日粮(45%能量来源于脂肪)；④ 高脂+低/中/高剂量诺丽酒组(HFD+LN/MN/HN)，饲喂高脂日粮和添加低/中/高剂量诺丽酒的饮用水。其中低剂量诺丽酒组(10 mL/kg·体重)、中剂量诺丽酒组(20 mL/kg·体重)、高剂量诺丽酒组(40 mL/kg·体重)。低脂日粮与高脂日粮为AIN93小鼠日粮加以改进，详细配方见表2，所有试验组饮用水均调至与原产品酒基相同的9%乙醇含量，试验周期为90 d，所有动物自由进食、饮水并记录采食量和饮水量。第84天每组小鼠进行试验动物代谢系统(CLAMS)监测，处死采样。

表2 低脂日粮和高脂日粮配方

1.2.2 指标测定

(1) 酒精度：参照GB/T 15038—2006中的气相色谱法。

(2) 总糖：参照GB/T 15038—2006中的斐林试剂滴定法。

(3) 总酸及挥发酸含量：参照GB/T 15038—2006中的指示剂法。

(4) pH值：pH计法。

(5) 可溶固形物含量：折光仪法。

(6) 杂醇油含量：参照GB/T 5009.48—2003中的气相色谱法。

(7) 黄酮：紫外分光光度法[15]。

(8) 总酚：福林酚法[16]。

(9) 降血脂功能：采用全自动生化分析仪测定血清中的总胆固醇(TC)、甘油三脂(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)含量和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)。

(10) 呼吸交换率(RER)：CPET测定系统。

1.2.3 小鼠体质量及脏器指数 末次用药后禁食12 h，称量体重后颈部脱臼处死、解剖，快速去除脾脏、胸腺并称重。按式(1)、(2)分别计算脏器指数和脂重指数。

(1)

式中：

c1——脏器指数，%；

m1——脏器质量，g；

m2——体质量，g。

(2)

式中：

c2——脂重指数，%；

m3——脂肪质量，g；

m4——体重，g。

1.2.4 数据处理 采用SPSS Statistics 23软件进行数据处理，结果以平均值±标准差表示。

2 结果与分析

2.1 饲喂剂量对小鼠体重、采食量、饮水量的影响

由图1和表3可知，3个剂量诺丽酒饲喂正常日粮小鼠，除高剂量组饮水量显著提高外，各组的体重、体增重和采食量均无显著性差异(P>0.05)。高脂日粮饲喂小鼠5～13周，其体重均显著高于正常(低脂)日粮小鼠(P<0.05)，表明试验成功建立了肥胖动物模型。添加低、中、高剂量诺丽酒可有效减低肥胖小鼠体重或体增重，其中高剂量组效果最为显著，体重由30.09 g降至25.92 g，体增量由12.96 g降至9.02 g，分别下降了13.96%，30.40%，即从饲喂的第3～15周均可显著降低肥胖小鼠体重(P<0.05)。此外，与HFD组相比，HFD+MN组和HFD+HN组饮水量分别升至4.79，4.76 g/d，饮水量显著提高(P<0.05)，采食量则无显著性差异。

*表示与LFD组相比差异显著(P<0.05)，#表示与HFD组相比差异显著(P<0.05)

表3 诺丽酒对小鼠终体重、体增重、采食量、饮水量的影响†

2.2 饲喂剂量对小鼠睾脂率、肾脂率、体脂率的影响

由表4可知，中、高剂量诺丽酒饲喂正常日粮小鼠可显著降低睾脂率或肾脂率(P<0.05)，但对体脂率无显著性影响(P>0.05)。3个剂量诺丽酒饲喂肥胖小鼠睾脂率由3.64%降至2.13%，肾脂率由1.59%降至0.74%，体脂率由21.75%降至12.52%，可显著降低睾脂率、肾脂率或体脂率(P<0.05)，其中以高剂量组降脂效果最为显著，其腹部脂肪沉积可降低至正常水平，说明诺丽酒能有效修复高脂物质对肾脏细胞所造成的损伤，使其恢复至正常水平，并随着诺丽酒浓度的增加，腹部脂肪逐渐降低。

表4 诺丽酒对小鼠脂肪比率的影响†

2.3 饲喂剂量对小鼠血脂的影响

由表5可知，3个剂量诺丽酒饲喂正常小鼠的血脂生化指标均无显著性差异(P>0.05)。肥胖小鼠饲喂中、高剂量诺丽酒，其甘油三酯、胆固醇、低密度脂蛋白含量分别下降了28.90%，13.97%，60.34%，说明诺丽酒可显著降低血浆中甘油三酯、胆固醇或低密度脂蛋白水平(P<0.05)；高剂量诺丽酒饲喂小鼠的高密度脂蛋白含量由120.46 mmol/L升至133.03 mmol/L，显著提高了10.43%(P<0.05)。诺丽中的多酚、黄酮等活性成分能有效防止自由基损害，抗氧化剂是脂质过氧化物酶的重要抑制剂[17]，应对高胆固醇引起的氧化应激反应，抑制脂质的吸收和分泌；且诺丽酒中富含黄酮和多酚等物质会抑制脂质的生物合成，降低脂肪酶活力，减少脂质吸收[18-20]，能有效抑制高脂肪或高胆固醇的吸收，保护组织细胞[21]。综上表明，诺丽酒对肥胖小鼠具有显著降血脂、降血清甘油三酯和降血清总胆固醇的功能。

表5 血脂生化指标†

2.4 饲养剂量对小鼠呼吸交换率、能量消耗和自主活动的影响

呼吸交换率(RER)是一定时间内机体呼出CO2和吸入O2的比值。加大运动量，呼出更多CO2，RER值增大，其作为运动强度的一个指标[22]。休息时，RER为0.7～1.0，RER值接近1.0，表明机体以糖代谢为主要供能方式，RER值接近0.7，则以脂代谢为主要供能方式[23]。 由图2可知，与HFD组相比，HFD+HN组的RER值降低，更接近0.7，表明诺丽酒可在一定程度上促进小鼠对脂肪的消耗。此外，HFD+HN组产热量和活动量显著提高(P<0.05)，表明诺丽酒主要是通过提高脂肪利用、增加产热和活动量实现其降脂减肥功能的。

*表示与LFD组相比差异显著(P<0.05)，#表示与HFD组相比差异显著(P<0.05)

3 结论

以中、低、高剂量的诺丽酒灌胃小鼠90 d。结果表明，诺丽酒对正常日粮小鼠体重、体增重和采食量无显著性影响(P>0.05)；中、高剂量诺丽酒组可有效降低肥胖小鼠体重或体增量，睾脂率、肾脂率或体脂率的下降均显著高于空白对照组与酒基对照组，且血浆中甘油三酯、胆固醇或低密度脂蛋白含量也显著低于空白对照组与酒基对照组，但血浆中高密度脂蛋白高于对照组，说明中、高剂量的诺丽酒可使肥胖小鼠具有显著降血脂、降血清甘油三酯和降血清总胆固醇的功能。此外，诺丽酒可在一定程度上促进小鼠对脂肪的消耗，提高小鼠的产热量和活动量，实现其降脂减肥功能。但诺丽酒降血脂的药理机制未完全清晰，后续可针对诺丽酒中的生物活性成分和生理功能展开更深入的研究。