比色法测定岗梅根总皂苷含量

刘群娣

广东江门中医药职业学院，广东 江门 529000

岗梅为冬青科植物梅叶冬青Ilexasprella(Hook.et Arn.)Champ.ex Benth.的干燥根。全年均可采挖，主产于广东、广西[1]。本品性味苦寒，有清热解毒、生津活血的功效，主治热病、燥渴、热泻、咳血、喉痛等症[2]。据广东韶关地区药检所[3]113抗菌试验表明，岗梅根对乙型溶血性链球菌有轻度抑制作用，对离体豚鼠心脏注射本品，发现冠脉流量和心收缩力有所增加。在临床上也有岗梅根用于防治各类感染的报道[4]。据麦海燕等[5]对岗梅制剂的体外抗菌试验表明，其对上呼吸道感染常见致病菌有较好的抑菌作用。岗梅是常用的凉茶原料，常与其他清热凉血的药材配伍制成合剂使用，如著名的成药王老吉、六合茶均以岗梅作为主要成分。

岗梅根中含有三萜皂苷(其中包括对-香豆酰三萜类[6]、齐敦果酸和熊果酸[7])、内酯、生物碱、氨基酸、赪酮甾醇、赪酮甾醇3-O-β-D葡萄糖苷、丁香脂素、丁香脂素-O-β-D葡萄糖苷和19-去氢乌索酸等[8]，其中皂苷类物质可能为本品药理作用的基础。而对于岗梅总皂苷的测定方法和结果，目前仅见冯达星等[9]以大孔树脂富集纯化岗梅根总皂苷。文中采取比色法作为测定方法，对岗梅根药材的总皂苷进行含量测定。

1 仪器和材料

TU-1810紫外分光光度计，北京普析通用仪器有限责任公司生产；电子恒温水浴锅，汕头市医用设备厂生产；OFY-500药材粉碎机，温岭市大德中药机械有限公司生产；AG285电子分析天平，Mettler toledo公司生产。人参皂苷Re，购自中国药品生物制品检定所，批号为110754-200320。试剂均为分析纯。

岗梅根为广州的零售药店收集，产地见表1。

表1 药材编号及产地

将岗梅根用中药粉碎机打碎至粉末状，于阴凉处封装保存，供含量测定用。

2 方法

2.1 对照品溶液的制备 精密称取人参皂苷Re 对照品5.2 mg，置25 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，制得对照品溶液，浓度为0.2080 mg/mL。

2.2 供试品溶液的制备 精密称取岗梅根粉末约1g，用滤纸包裹，置于索氏提取器中，用20 mL甲醇冷浸过夜。将甲醇浸泡液引流入圆底烧瓶中并补加50 mL新鲜甲醇，回流4 h。合并提取器和圆底烧瓶中的甲醇液，转移至蒸发皿，水浴蒸干。残渣用15 mL蒸馏水分3次溶解并转移至分液漏斗。用水饱和正丁醇萃取4次，每次30 mL。合并4次正丁醇萃取液，转移至蒸发皿，水浴蒸干。残渣用甲醇溶解并定容至50 mL，制得供试品溶液。

2.3 测定方法 精密量取0.3 mL供试品溶液，置于60 ℃水浴加热并吹干溶剂。加入0.2 mL的5%香草醛-冰醋酸溶液(新鲜配制)和0.8 mL高氯酸，盖塞摇匀，置于60 ℃水浴加热15 min。取出试管并立即用冰水浴冷却，加入5 mL冰醋酸稀释，摇匀。自冰水浴冷却算起30 min后上机测量吸光度，以545 nm作为检测波长。每次测量并行空白，自“吹干溶剂”后平行操作。

2.4 吸收光谱的测定 取一定量的对照品溶液及按照2.2的方法制备的供试品溶液，按照2.3节的方法显色，于400～700 nm进行光谱扫描。结果对照品溶液与供试品溶液均在545 nm波长处有最大吸收，故确定测定波长为545 nm。

2.5 方法学验证

2.5.1 标准曲线的制备 按照最佳吸光度区间设计样品浓度区间，取6个浓度点制作标准曲线。准确吸取对照品溶液0.3 mL、0.4 mL、0.5 mL、0.6 mL、0.7 mL、0.8 mL，按2.3节的方法显色，在545 nm下测量吸光度，以吸光度为横坐标、皂苷加入质量为纵坐标作图，并计算回归方程。其结果如图2所示。

图1 对照品溶液与供试品溶液的扫描图谱(400～700 nm)

图2 岗梅根总皂苷含量测定标准曲线

计算得回归方程为y=4.0177x-0.0023，相关系数r= 0.9996。结果表明本方法的测定范围0.0624 ～0.1664 mg，相当于0.3～0.8 mL对照品溶液的皂苷质量，在此测定范围内，本方法具有良好的线性。

2.5.2 加样回收试验 按2.2节的方法制备某浓度的供试品溶液(X液)，并向一定量的X液中加入不同浓度的对照品溶液(R液)制成混合液，按2.3节的方法显色，在545 nm下测量吸光度，以其差值为横坐标、加入R液的皂苷质量为纵坐标作图，并与标准曲线相比较。其结果如表2和图3所示。

表2 标准加入法的回收率测定结果

图3 标准加入法测定结果与标准曲线的比较

由表2计算得对照品的平均回收率为100.42%，回收率的RSD为1.83%，标准加入法所得曲线的相关系数r为0.9991。说明对组分复杂、有杂质存在的样品使用本方法进行吸光度测定，仍具有良好的线性。

2.5.3 精密度试验 取编号D的岗梅根粉末，精密称取6份，每份约1 g，按2.2节的方法制备，每份取样0.3 mL，按2.3节的方法显色，在545 nm下测量吸光度。测量结果如表3所示。

表3 同一批次6份供试品的重复性试验结果

按表3结果计算，该批次6份样品的皂苷含量平均值为2.34%，RSD为0.76%。说明用此法测定岗梅根总皂苷的含量精密度高，完全能满足样品分析的要求。

3 结果

药材的测定 准确吸取供试品溶液0.3 mL，按2.3节的方法显色，在545 nm下测量吸光度，测定总皂苷的含量。结果见表4。

表4 5批药材的样品测定结果(总皂苷的百分含量) (n=2)

4 讨论与结论

4.1 香草醛-高氯酸是常用的皂苷显色反应体系。以此作为比色法的基础，以人参皂苷Re、黄芪甲苷等稳定的标准物质作为对照品，在同类分析研究中均已建立起成熟、稳定的紫外测定方法，该法在百合[10]、酸枣仁[11]、甘草[12]、屏边三七[13]等药材的总皂苷含量测定中均得到深入的研究与应用。

4.2 实验探索了加热时间、加热温度、检测波长和检测时间等4个对显色测定影响较大的因素。最后选定显色反应条件和检测条件为60℃加热15 min、在545 nm下测定吸光度，放置30 min后测定，即如2.3节所述方法，在此法下方法学验证的稳定性、重复性最好。

岗梅有明确的药理活性，在广东地区作为凉茶的主要原料已使用了几百年。然而，岗梅并未收载到《中国药典》(2015 年版)等国家药品质量标准中，现行的质量标准为地方标准《广东省中药材质量标准》(第一册)(2004 年版)，此标准仅有性状、鉴别、检查项，并无含量测定内容[3]111。比色法测定岗梅根总皂苷含量，结果良好，方法学验证数据符合要求，可作为岗梅有效部位含量测定的补充。通过进一步研究，将此法扩展到岗梅根的相关制剂的总皂苷的测定中，为岗梅根及相关制剂的质量控制提供更多有价值的方法与成果。