乳腺癌改良根治术后Ki67表达与腋窝淋巴结转移的相关性及预后价值研究

张桂普，徐志毅

（常州市第四人民医院，常州 213000）

乳腺癌是女性常见的恶性肿瘤，且随着人们生活方式改变，导致疾病发生率呈上升趋势，居女性恶性肿瘤首位［1］。但是，由于乳腺并非人体生命活动重要的器官，原位乳腺癌并不会致命［2］。乳腺癌改良根治术是乳腺癌患者中常用的治疗方法，通过手术能切除病灶组织，延长患者寿命，但是患者术后由于缺乏有效的预后评估指导，导致患者远期预后较差［3，4］。Ki67属于核增殖标志基因，已经证实在肺癌、胃癌等恶性肿瘤中呈高表达，且除了在G0期的整个细胞周期中的表达，能在有丝分裂后期迅速降解，且患者阳性率越高，预后越差［5，6］。但是，Ki67在乳腺癌根治术后中的表达及与腋窝淋巴结转移的相关性及预后研究较少。因此，本文采用随机对照方法进行研究，探讨乳腺癌改良根治术后Ki67表达与腋窝淋巴结转移的相关性及对患者预后的价值，报道如下。

1 资料与方法

1.1 临床资料选择2014年3月～2018年3月进行改良根治术乳腺癌患者92例作为对象，设为观察组，年龄（30～77）岁，平均（49.50±5.83）岁；肿瘤直径（1～4.5）cm，平均（2.10±0.57）cm；TNM分期：Ⅰ期10例，Ⅱ期10例，ⅢA期72例。病理学类型：浸润性导管癌60例，浸润性小叶癌13例，粘液癌9例，导管内癌伴微浸润10例；腋窝淋巴结是否转移：转移57例，未转移35例。选择同期入院手术治疗的乳腺良性疾病患者58例，设为对照组，年龄（18～65）岁，平均（42.12±6.8）岁。疾病类型：纤维囊性乳腺病21例，乳腺纤维腺瘤25例，浆细胞性乳腺炎4例，乳腺分叶状肿瘤8例。两组临床资料差异均无统计学意义（P>0.05）。

1.2 纳入、排除标准纳入标准：（1）符合乳腺癌、乳腺良性疾病诊断标准［6］；（2）乳腺癌患者均拟行改良根治术治疗，且患者均能耐受；（3）均能严格执行医嘱完成有关检查、诊断。排除标准：（1）合并妊娠期、哺乳期或伴有明显精神异常者；（2）观察组患者手术前给予放化疗、免疫治疗者；（3）合并自身免疫系统疾病、凝血功能异常或伴有其他恶性肿瘤者。

1.3 方法（1）仪器与试剂。①仪器。Benchmark XT全自动免疫组化仪（罗氏Ventana公司）；②试剂。Ventana公司的EZ prep（脱蜡清洗缓冲液）、LCS（封盖清洗缓冲液）、2XSSC（柠檬酸钠清洗缓冲液）、Reaction Buffer（清洗缓冲液）、CCI（细胞前处理清洗缓冲液）、ultraView Universal DAB（DAB染色液）、Hematoxylin（苏木素染色液）、Bluing Reagent（返蓝染色液）、KI67抗体（北京迈新科技有限公司）（克隆号 MIB-1）。（2）标本的采集。观察组手术过程中搜集乳腺癌病灶标本及癌旁（距离病灶组织>3cm）标本，对照组手术过程中单纯收集切除的病灶标本，浸泡在浓度为10.0%福尔马林中，备用。（3）检测方法。取两组病灶组织，放入全自动脱水机，过夜脱水12小时以上，取出后用石蜡包埋成块，切成4um厚的切片，置于72℃烤片机烤片2小时。编辑仪器程序并保存：Deparaffinization（脱蜡）→Cell Conditioning（Standard）（细胞前处理）→ Ab Incubation Temperatures（37°c，32min）（抗体孵育）→Counterstain（Hematoxylin 8 min）（苏木素染色）→Post Counterstain（Bluing Reagent 8 min）（返蓝染色）。其他操作参数仪器出厂前已经给予了预设置。接着打印项目标签并贴在已切好的组织切片上，置于烤片机直至蜡溶解。具体操作程序如下：1）将实验所需试剂及辅助试剂放在仪器托盘上，并将其置于仪器上。2）将玻片置于仪器卡槽内。3）开始运行程序。4）完成后取下玻片，洗涤，干燥，封片。（4）判断方法。采用半定量积分法判断结果：阳性细胞数≤5.0% 0分，6%～25.0% 1分，25%～50% 2分，50%～75% 3分，≥75%4分、阳性强度（阴性0分，淡黄色1分，黄色2分，棕黄色3分）完成免疫组化染色评分，两种积分相乘：0分为阴性（-），1～4分弱阳性（+），5～8分为阳性（++），9～12分为强阳性（+++）。阳性率为各实验组弱阳性，阳性，强阳性病例数/该组总病例数。（5）Ki67表达影响因素。查阅观察组患者病历资料，统计患者年龄、肿瘤大小、病理类型、淋巴结转移、TNM分期、预后情况，记录不同病理下Ki67蛋白表达阳性率并进行单因素分析。（6）Ki67表达与腋窝淋巴结相关性。采用SPSSPearson 相关性分析软件对乳腺癌术后Ki67表达与腋窝淋巴结转移、预后进行相关性分析。

1.4 统计分析采用SPSS 18.0软件处理，计数资料行χ2检验，采用n（%）表示，计量资料行t检验，采用mean±SD表示，采用SPSS Pearson 相关性分析软件分析Ki67表达蛋白表达与腋窝淋巴结转移、预后的相关性，P<0.05差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组Ki67蛋白阳性表达率比较观察组癌旁组织与对照组Ki67蛋白阳性表达率比较差异无统计学意义（P>0.05）；观察组病灶组织Ki67蛋白阳性表达率，均高于癌旁组织（P<0.05），免疫组化结果表明：Ki67蛋白在乳腺癌中呈高表达，且主要定位于细胞核中，但是在癌旁组织、对照组表达较低或不表达，见表1和图1。

表1 两组Ki67蛋白阳性表达率比较［n（%）］

2.2 乳腺癌改良根治术后不同病理下Ki67蛋白阳性率比较乳腺癌改良根治术后不同病理下Ki67蛋白阳性率与年龄、病理学类型无统计学意义（P>0.05）；乳腺癌改良根治术后不同病理下Ki67蛋白阳性率与肿瘤大小、肿瘤分期、腋窝淋巴结转移与预后存在统计学意义（P<0.05），见表2。

图1 不同组织Ki67蛋白免疫组化结果（×200）

表2 乳腺癌改良根治术后不同病理下Ki67蛋白阳性率比较

2.3 乳腺癌术后Ki67蛋白表达阳性率与腋窝淋巴结转移、预后相关性分析SPSSPearson 相关性分析结果表明：乳腺癌术后Ki67蛋白阳性率与腋窝淋巴结转移呈正相关性（P<0.05）；乳腺癌术后Ki67蛋白阳性率与预后呈负相关性（P<0.05），见表3。

表3 乳腺癌术后Ki67蛋白阳性率与腋窝淋巴结转移、预后相关性分析

3 讨论

乳腺癌是女性常见的恶性肿瘤，且临床上多以改良根治术治疗为主，通过手术能切除病灶组织，延缓病情发展［7，8］。但是，部分患者术后由于缺乏理想的预后指标，导致患者远期效果较差，术后腋窝淋巴结转移率较高，难以达到预期的治疗效果［9］。Ki67是一种存在于增殖细胞中的核抗原，其表达水平与染色质、细胞有丝分裂存在紧密的联系［10］。临床研究表明［5，11］：Ki67基因与细胞的周期存在紧密的联系，在G1晚期/S早期表达水平相对较低，但是在S期后半期Ki67基因表达想回迅速升高，且细胞分裂完毕后Ki67基因则又会下降。因此，加强Ki67蛋白测定能了解肿瘤的增殖活性。本研究中，观察组病灶组织Ki67蛋白阳性率，均高于癌旁组织，免疫组化结果表明：Ki67蛋白在乳腺癌中呈高表达，且主要定位于胞质中，但是在癌旁组织、对照组表达较低或不表达，说明Ki67蛋白在乳腺癌改良根治术后呈高表达，能直接参与疾病的发生、发展。国外学者研究表明［12］：虽然Ki67抗原的免疫组织化学检测已用于评估癌症增殖多年，但是否适用于乳腺癌的临床管理中常规标志物还存在争议。目前Ki67评估主要用于评估预后并指导关于辅助治疗选择的决定，以及预测ER +/ HER2-乳腺癌中新辅助治疗的反应。本研究中，乳腺癌改良根治术后不同病理下Ki67蛋白阳性率与肿瘤大小、肿瘤分期、腋窝淋巴结转移与预后存在统计学意义。提示Ki67可以用于评估乳腺癌改良根治术后的疗效，进而可以更好的指导临床。Ki67蛋白在乳腺癌改良根治术后表达受到的影响因素较多，可能直接参与乳腺癌的发生、发展。临床研究表明［13，14］：增殖细胞中Ki67蛋白表达与细胞周期存在紧密的联系，但是在G0中并不表达，能作用肿瘤增殖活性可靠的指标，能反应细胞的增殖速率。Ki67蛋白表达阳性率越高，腋窝淋巴结转移率越高，患者治疗预后越差。本研究中，SPSSPearson 相关性分析结果表明：乳腺癌术后Ki67表达蛋白阳性率与腋窝淋巴结转移呈正相关性；乳腺癌术后Ki67表达蛋白阳性率与预后呈负相关性。因此，乳腺癌改良根治术后应增加Ki67蛋白阳性率检测，可以根据其表达水平评估患者预后，对于Ki67蛋白阳性率较高者则应考虑进行放化疗，进一步巩固手术效果，促进患者早期恢复。

可见，乳腺癌改良根治术后Ki67蛋白阳性率呈高表达，且与腋窝淋巴结转移成正相关性，能评估患者预后，值得推广应用。