饮料中霉菌和酵母计数检验结果不确定度的评定

摘 要：为了真实反应饮料中霉菌和酵母计数检验结果的精确度，评定霉菌和酵母计数的不确定度，探讨并建立了简单易行的饮料中霉菌和酵母计数检验的不确定度评定方法，确定了样品中霉菌和酵母计数检测的置信区间。

关键词：饮料;霉菌和酵母计数;不确定度

测量不确定度是与测量结果相关联的参数，正确评定测量不确定度对客观分析测量结果有重要意义[1-3]。随着实验室认可和资质认定工作的开展，很多实验室认识到了评定不确定度的重要性，并在日常实验室中开展了这项工作，但微生物检验中不确定度评定在实验室工作中的实际应用并不多。本文对饮料中霉菌和酵母计数检验结果进行不确定度评定。

1 材料与方法

1.1 材料

啤酒酵母ATCC 9763购于北京陆桥技术股份有限公司、孟加拉红琼脂培养基（批号170316）北京陆桥技术股份有限公司。

1.2 方法

GB 4789.15-2016《食品安全国家标准食品微生物学检验霉菌和酵母计数》[4]、JJF1059.1-2012《测量不确定度评定与表示》[5]。

1.3 样品制备

取啤酒酵母（ATCC 9763）新鲜培养物于灭菌生理盐水中制成0.5麦氏浓度的溶液，稀释1 000倍后制成约1×104 CFU/mL的菌悬液，取该菌悬液1 mL加入500 mL已灭菌饮料中充分混匀后制成原始检样。

制作10个小样：无菌操作分别吸取10 mL上述原始检样充分混匀后入10个无菌试管，作为小样。

1.4 霉菌和酵母总数测定

以无菌操作方法吸取1 mL样品，注入盛有9 mL无菌生理盐水的试管中，充分振摇，制成1∶10的稀释液;吸取1∶10的稀释液1 mL注入盛有9 mL无菌生理盐水的试管中，混匀制成1∶100稀释液;按同法制备梯度稀释液备用;用灭菌吸管取未稀释的水样和2～3个适宜稀释度的水样1 mL，分别注入灭菌平皿内，每个稀释度做2个平皿对照。然后将冷却至46 ℃左右的孟加拉红琼脂约20 mL注入平皿，并旋摇混匀，同时做培养基空白对照;待琼脂凝固后，置（28±1） ℃培养箱内培养5 d，进行菌落计数;选择菌落数在10～150平板计算平均数，以平均数乘以稀释倍数作为检测结果，每管均做2个平行。

2 不确定度来源分析

样品称样引入的不确定度，样品稀释过程引入的不确定度为A类评定;重复检测产生的不确定度为B类评定。检验结果的不确定度具体来源见图1。

3 不确定度的分量评定

3.1 样品称样引入的不确定度

3.2 样品稀释过程引入的不确定度

3.3 重复检测产生的不确定度

同一样品重复10次，将10次重复测量的结果列入表1中。

由于微生物测量结果分散性很大，其最大值与最小值之间可相差到1个数量级，因此不能直接利用测量数据做不确定度评估，而需要对数据做对数处理，结果见表1。

4 结论

本论文依据 GB 4789.15-2016 《食品安全国家标准食品微生物学检验霉菌和酵母计数》，利用孟加拉红琼脂对饮料中的酵母进行检测，对测定结果进行不确定度评定，给出不确定度。由于微生物检测中，测量结果的发散性较大，不属于正态分布，检测结果必需转换成对数，使其靠近正态分布，便于建立数学模型用于计算。在测定时，必须严格控制条件，由同一试验人员进行操作，测试结果取对数，评定不确定度。结果显示，饮料中霉菌和酵母菌计数的取值区间为1.330235±0.085812，该样品中霉菌和酵母的含量范围为18～26 CFU/mL。

参考文献

[1]中国合格评定认可国家委员会.CANS-GL05 2011 测量不确定度要求的实施指南[S].北京：中国标准出版社，2011.

[2]国际标准化组织.ISO/IE C17025： 2005测试和校准实验室能力的通用要求[S].2005.

[3]中国合格评定国家认可委员会.CNAS-CL07：2011测量不确定度的要求[S].北京：中国标准出版社，2011.

[4]国家质量监督检验检疫总局.GB 4789.15-2016食品安全国家标准 食品微生物学檢验 霉菌和酵母计数[S].北京：中国标准出版社，2016.

[5]国家质量监督检验检疫总局.JJF 1059-2012 测量不确定度评定与表示[S].北京：中国标准出版社，2012.

[6]国家质量监督检验检疫总局.JJG 196-2006 常用玻璃仪器检定规程[S].北京：中国标准出版社，2006.

基金项目：福建省产品质量检验研究院科技项目（编号：KY201822A）。

作者简介：傅德江（1986—），男，福建福州人，本科，工程师。研究方向：食品微生物。