IL-23在念珠菌性阴道炎发病中的作用分析

孙昌洁 高爱莉 代歆悦 王焕丽

临床RVVC患者最常见的致病菌有白念珠菌,RVVC的主要发病机制是宿主的防御和毒力因素［1］。研究发现,RVVC的发病因素有Nrf2信号通路参与。亮氨酸拉链转录因子家族的成员之一是Nrf2,在与上游抗氧化顺式转录调控元件(ARE)相结合后从而诱导抗氧化酶的基因转录及F游的Ⅱ相解毒酶。通过多机制,Nrf2信号通路可启动机体的适应性免疫和固有免疫,以对念珠菌抑制,防止其感染。

1 资料与方法

1.1 一般资料 2016年12月～2018年12月来本所门诊就诊的105例性活跃期妇女VVC患者作为观察组,选取同期60例体检健康者作为对照组。对其年龄、婚育状况等一般资料进行登记,年龄均为18～50岁。观察组患者均行妇科检查,根据病史及症状严重程度、阴道分泌物涂片真菌镜检及真菌培养,参照文献SW对其临床症状体征进行评分。按单纯型和复杂型(复发性、重度、非白色念珠菌所致)VVC进行观察；微生物学检测结果为真菌涂片阳性患者63.81%(67/105),真菌培养阳性率80.00%(84/105)。排除标准：患有细菌性阴道炎、滴虫性阴道炎、性传播疾病、糖尿病、高血压、恶性肿瘤及自身免疫性疾病等影响抗氧化因子水平检测及免疫指标的一些疾病。

1.2 方法

1.2.1 收集、检测阴道分泌物样品 对两组阴道分泌物进行提取,对其所用的样品都用棉拭子搜集两份,并对其进行相应的有关检测。对其中一份棉拭子的滴虫细菌及念珠菌等微生物进行检查。备1 ml无菌磷酸盐缓冲液(PBS)的离心管,将另一份棉拭子放入其中,并在-80℃的环境中储存备用［2］。

微生物学检测：取载波片,将阴道分泌物置于其上,加入1～2滴的10%的KOH,在高倍镜下选取10个及以上视野并对其检查,看是否存在芽生砲子或菌丝。在沙氏培养基上对分泌物进行接种,温度：35℃,对其进行培养,观察 24～48 h,鉴定并行菌株。对于沙氏培养基中生长直径＞1 mm的菌落挑选出来并对其进行革兰染色,利用显微镜对其进行观察,分析是霉菌或者酵母菌。如果其为酵母菌,对于纯培养基所生长的菌落用无菌接种环对其轻轻挑取,并将其接种到念珠菌显色培养基上,温箱温度为37℃,持续培养48 h。绿色或翠绿色为白色念珠菌菌落颜色；热带念珠菌为蓝色；光滑念珠菌为紫色；克柔假丝念珠菌粉红色；其他念珠菌为白色。

Nrf2信号通路下游抗氧化因子主要包括过氧化氢酶(CAT)、SOD、脂质过氧化物丙二醛(MDA)以及GSH-Px等。检测时可采用ELISA法。

1.2.2 采集、检测静脉血 对两组受试者静脉血各抽取 3 ml,留取血清,保存 -80℃环境下备用。釆用ELISA法检测氧化应激标记物AGE、AOPPS；釆用ELISA法检测炎症细胞因子IL-17、IL-23水平［3］。

1.3 观察指标 比较两组Nrf2信号通路下游抗氧化因子表达水平,观察组不同程度VVC患者的阴道分泌物中IL-23水平以及氧化应激标记物AOPPS、AGE水平。

1.4 统计学方法 采用SPSS23.0统计学软件处理数据。计量资料以均数±标准差(±s)表示,采用t检验；计数资料以率(%)表示,采用χ2检验。P＜0.05表示差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组Nrf2信号通路下游抗氧化因子表达水平比较 所有VVC患者中,其中轻中度VVC患者51例,重度VVC患者21例,RVVC患者33例。治疗前,观察组患者Nrf2信号通路下游抗氧化因子GSH-Px、SOD、IL-17水平均高于对照组,差异具有统计学意义(P＜0.05)。见表 1。

表1 两组Nrf2信号通路下游抗氧化因子表达水平比较 (±s)

表1 两组Nrf2信号通路下游抗氧化因子表达水平比较 (±s)

注 ：两组比较,P＜0.05

组别 例数 抗氧化酶GSH-Px(U/ml)SOD(U/ml)IL-17(ng/L)对照组 60 0.52±0.18 0.55±0.221.03±0.28观察组 轻中度VVC 51 0.71±0.22 0.66±0.271.26±0.33重度VVC 21 1.17±0.16 1.26±0.272.36±0.24 RVVC 33 1.12±0.27 0.67±0.351.36±0.08

2.2 观察组不同程度VVC患者阴道分泌物中IL-23水平比较 轻中度VVC、重度VVC、RVVC患者阴道分泌物中IL-23水平分别为(1.25±0.29)、(1.12±0.33)、(0.91±0.31)pg/ml,三类患者比较差异具有统计学意义(P＜0.05)。

2.3 观察组不同程度VVC患者氧化应激标记物AOPPS、AGE水平比较 观察组不同程度VVC患者AOPPS、AGE水平比较,差异具有统计学意义(P＜0.05)。见表2。

表2 观察组不同程度VVC患者氧化应激标记物AOPPS、AGE 水平比较 (±s)

表2 观察组不同程度VVC患者氧化应激标记物AOPPS、AGE 水平比较 (±s)

注：不同程度VVC患者比较,P＜0.05

类型 例数 AOPPS(μmol/L) AGE(μg/ml)轻中度VVC患者 51 24.33±2.16 3.14±0.54重度VVC患者 21 31.67±5.84 2.66±2.51 RVVC患者 33 25.22±6.91 3.52±1.74

3 讨论

临床中常见的皮肤疾病中VVC是的一种由念珠菌感染引起的黏膜疾病,难愈、顽固、易复发是该病的主要特征,妇女群体中75%的人曾患此病,当中约8%最后转化为了RVVC。该病给妇女身心、工作和生活等带来诸多影响［4］。目前尚未明确VVC的具体发病原因,但大量的试验和数据说明VVC的发病过程炎症和氧化应激参与了反应。根据国内外研究结果以及前期研究结果可以推测在VVC发生发展中Nr12通路有较好的调节作用［5］。本研究通过对VVC患者中GSH-Px等抗氧化酶表达水平、IL-17等表达水平及氧化应激指标AOPPS和AGE水平的系统性分析,梳理炎症因子与Nr12通路直接的联系和相互作用,并阐明在外阴阴道念珠菌病发病中宿主Nr12通路对其的调控机制,对于有效防治VVC提供了新的方案和理论研究依据。

氧化应激与炎症参与了VVC的发生发展,Thl7和IL-17在念珠菌性阴道炎的发病过程中具有保护性免疫作用,而Nrf2通路是最重要的抗氧化通路,该通路不但可以启动内源性和外源性应激监测途径,且Nrf2尚可诱导IL-17表达,已有研究证实NH2诱导IL-17D在介导肿瘤及病毒监测方面具有重要作用,而1L-17在多种病原微生物尤其是细胞外病原体和真菌所致的感染性疾病中起着重要的抗感染作用,且IL-17对外阴阴道念珠菌病具有免疫保护作用。IL-23是新近发现的一种异二聚体新型蛋白质分子,由IL-23p19和IL-12p40两个亚单位通过二硫键组成的细胞因子,系IL-12家族成员,它主要由活化的树突状细胞和巨噬细胞分泌,IL-12R 1和IL-23R为其受体IL-23在天然免疫中和获得性免疫中都发挥着重要的生物学功能。在天然免疫方面,IL-23可以激活机体未致敏T淋巴细胞,特异性的诱导INF-γ和IL-17的分泌,同时,树突状细胞和巨噬细胞产生的IL-23反过来还会作用于树突状细胞,促进IL-12和γ-INF的产生,尽而发挥对机体的保护功能,以抵御病原微生物的感染。在获得性免疫方面,IL-23可以发动另外一条T细胞发育途径,对记忆性T细胞的反应良好,在这一过程中扮演着非常重要的角色,促使T细胞亚单位分泌致炎性因子IL-17,再次激活巨噬细胞,在自身免疫反应中有着重要作用。这些研究的发现,说明IL-23是连接机体天然免疫系统和获得性免疫系统之间的一条重要的纽带,具有十分复杂的生物学功能,在抗感染免疫、抗肿瘤免疫及自身免疫性疾病方面有着非常重要的作用。

由于阴道感染,破坏了抗氧化物和氧化因子之间的平衡,氧化应激促进了阴道炎的发生发展。AGE和AOPPS是通过大分子的转化而形成的化合物,是氧化应激的新型标志物,也是较好的炎症介质,能更好地显示急性氧化应激过程,在多种疾病中可作为氧化应激和炎症标志物的蛋白质。

综上所述,Nrf2通路既可以保护宿主免受氧化应激反应所致的损伤及感染引发的炎症,又增强了宿主免疫对念珠菌的清除能力,以降低RVVC的发生。