磁微粒化学发光法检测人血清中NT-proBNP方法的建立

廖美琴

（桂林优利特医疗电子有限公司 广西桂林 541004）

1 前言

近年来，我国心力衰竭发病率不断升高，N-端脑利钠肽前体（NT-proBNP）是一种特异性标志物，能够检测心力衰竭患者的严重程度。NT-proBNP是一种蛋白酶裂解产物，具有较高特异性，能够被Thr71位点抗体识别。若患者体内的NT-proBNP浓度大于300 pg/mL，患者患有心衰的可能性较高。为研究检测NT-proBNP的方法，本文使用生物素化的NT-proBNP抗体和AP-标记的NT-proBNP抗体进行检测。

2 资料与方法

2.1 材料和仪器

仪器：雷杜化学发光测定仪Lumiray 1200。

试剂：生物素化的NT-proBNP抗体；AP-标记的NT-proBNP 抗体；磁珠（10 mg/mL）；NT-proBNP 抗原；ProClin300；海藻糖；吐温-20；罗氏 ProBNPⅡ试剂盒（对照）。

2.2 方法

2.2.1 制备抗体稀释液

抗体稀释液主要包括：3%牛血清白蛋白（BSA）、0.1%ProClin300、150 mmol/L NaCl、0.5%吐温-20、1%海藻糖、10 mmol/L三羟甲基氨基甲烷（Tris），调节pH稳定在8.0。

2.2.2 制备抗体溶液

制备磁珠偶联抗体溶液，将清洗后的磁珠稀释为2 mg/mL，吸取200 mL与5 mg生物素化的抗体放置于离心管中，混合20 min，加入封闭剂，在磁力架吸磁10 min，将上清液移除，使用抗体稀释液进行重复吸磁，定容至1 000 mL。

制备AP-标记的NT-proBNP抗体溶液，使用抗体稀释液将AP-标记的NT-proBNP抗体进行1000倍稀释处理。

2.2.3 配制校准品

配制校准品稀释液，使用3%BSA、150 mmol/L氯化钠、0.1%ProClin300、0.5%吐温-20、1%海藻糖、20 mmol/L Tris、10%甘油，调节pH稳定在7.4。使用校准品稀释液对抗原进行稀释，配制浓度为200、500、2 000、10 000 pg/mL的校准品。

2.2.4 反应流程

在反应管中分别添加样本试剂50 μL、生物素化的 NT-proBNP 抗体 50 μL、AP-标记的 NT-proBNP抗体50 μL，在37℃环境下孵育10 min，进行磁分离清洗；在闭光环境下添加发光底物3-（2-螺旋金刚烷）-4-甲氧基-4-（3-磷氧酰）-苯基-1，2-二氧环乙烷二钠盐（AMPPD）200 μL；读取总相对光子量。 绘制校准曲线，进行样本检测，依据待检样本测定的相对发光值，通过校准曲线计算浓度。

2.3 统计学方法

采用SPSS 21.0软件处理数据，使用t和χ2检验资料，P＜0.05表示差异有统计学意义。

3 结果

3.1 准确度回收率测试

准确度回收率为97.60%～105.68%，平均回收率为101.65%，详见表1。

表1 准确度回收率

3.2 准确度比对

收集血清样本100份，使用自制NT-proBNP试剂盒以及罗氏ProBNPⅡ试剂盒分别进行测定，得到回归方程为Y=0.9971X-8.2031，线性相关系数r2=0.998 9，即r=0.999 4，证明二者具有较高的相关性，成对样品的t检验结果详见表2。

从表2数据结果可知，配对样本的P值=0.389＞0.05，2组试剂测试结果差异无统计学意义。

表2 成对样本t检验

4 讨论

心率衰竭是全球性健康问题，目前尚不存在高效的治愈方法，这已成为医疗行业内面临的重要难题。有研究提出，我国患有心血管疾病的患者约为2.9亿人，其中，心衰患者约占15.5%[1]。在临床治疗中，早期诊断具有重要价值，可有效控制患者病情，避免患者病情加重。NT-proBNP是诊断心衰患者严重程度的重要指标，有研究提出，NT-proBNP浓度对早期心衰患者具有诊断价值[2]。NT-proBNP测定还可用于慢性心力衰竭的辅助诊断、预后及指导治疗，是诊断慢性心力衰竭快速、敏感、特异的客观指标[3]。脑利钠肽（BNP）等经过分泌后，进入外周血，通过血清检测能够得到检测结果[4，5]。在本研究中，自制试剂盒回收率为90.1%～105.9%，平均回收率为99.0%，与罗氏ProBNPⅡ试剂盒具有较高相关性。由此可见，使用磁微粒化学发光法进行NT-proBNP的检测，具有较高的灵敏度和准确度，能够满足临床检测的需要。综上所述，使用自制NT-proBNP试剂盒，可以检测NT-proBNP水平，指导心衰患者的临床诊断和治疗，为患者治疗提供可靠的数据支持。