探讨EBV-DNA定量检测在鼻咽癌放疗后复发转移患者中的临床意义

王海兰 谭洪文 杨志龙 李彩花 余双

[摘要]目的 探討EBV-DNA定量检测在鼻咽癌放疗后复发转移患者中的临床意义。方法 选取吉安市中心人民医院2019年1～11月就诊并经治疗后临床缓解的60例鼻咽癌患者作为研究对象，按照放疗后疗效分为持续缓解组38例、局部复发组13例、远处转移组9例。所有患者均采用EB病毒核酸扩增（PCR）荧光定量检测全血中EBV-DNA基因拷贝数，比较三组患者的EBV-DNA阳性检出率和EBV-DNA拷贝数，进一步比较复发或转移者二次治疗前后EBV-DNA拷贝数的变化情况。结果 局部复发组和远处转移组EBV-DNA阳性检出率及EBV-DNA拷贝数均高于持续缓解组，差异有统计学意义（P<0.05）;局部复发组和远处转移组EBV-DNA阳性检出率及EBV-DNA拷贝数比较，差异无统计学意义（P>0.05）;局部复发组和远处转移组治疗后EBV-DNA拷贝数均低于治疗前，差异有统计学意义（P<0.05）;局部复发组和远处转移组治疗前后EBV-DNA拷贝数比较，差异无统计学意义（P>0.05）。结论 不同放疗预后患者血浆EBV-DNA定量检测结果存在显著差异，血浆EBV-DNA定量检测能够作为监测鼻咽癌放疗后复发转移的可靠肿瘤标志物。

[关键词]鼻咽癌;放疗;复发;转移;EBV-DNA定量检测

[中图分类号] R739.63          [文献标识码] A          [文章编号] 1674-4721（2020）7（b）-0106-04

Exploration on the clinical significance of EBV-DNA quantitative detection in patients with recurrence and metastasis of nasopharyngeal carcinoma after radiotherapy

WANG Hai-lan1   TAN Hong-wen1   YANG Zhi-long2   LI Cai-hua1   YU Shuang3

1. Department of Oncology， Ji′an Central People′s Hospital， Jiangxi Province， Ji′an   343000， China; 2. Intensive Care Unit， Ji′an Hospital of Shanghai Oriental Hospital， Jiangxi Province， Ji′an   343000， China; 3. Department of Oncology， Yichun People′s Hospital， Jiangxi Province， Yichun   336000， China

[Abstract] Objective To explore the clinical significance of EBV-DNA quantitative detection in patients with recurrence and metastasis of nasopharyngeal carcinoma after radiotherapy. Methods A total of 60 patients with nasopharyngeal carcinoma treated in Ji′an Central People′s Hospital from January to November 2019 were selected as the research objects. According to the curative effect after radiotherapy， they were divided into three groups： continuous remission group （38 cases）， local recurrence group （13 cases） and distant metastasis group （9 cases）. EBV-DNA gene copies in whole blood were detected by PCR in all patients. The positive detection rate of EBV-DNA and the copy number of EBV-DNA were compared among the three groups， and the changes of EBV-DNA copies before and after the second treatment were further compared. Results The positive detection rate of EBV-DNA and the copy number of EBV-DNA in the local recurrence group and the distant metastasis group were higher than those in the continuous remission group， and the differences were statistically significant （P<0.05）; the positive detection rate of EBV-DNA and the copy number of EBV-DNA in the local recurrence group and the distant metastasis group were not significantly differents （P>0.05）; the copy number of EBV-DNA in the local recurrence group and the distant metastasis group after treatment were lower than those before treatment， the difference was statistically significant （P<0.05）. There were no significant differences in the number of EBV-DNA copies between local recurrence group and distant metastasis group before and after treatment （P>0.05）. Conclusion There are significant differences in the results of quantitative detection of plasma EBV-DNA in patients with different radiotherapy prognosis. Quantitative detection of plasma EBV-DNA can be used as a reliable tumor marker to monitor the recurrence and metastasis of nasopharyngeal carcinoma after radiotherapy.

[Key words] Nasopharyngeal carcinoma; Radiotherapy; Recurrence; Metastasis; Quantitative detection of EBV-DNA

[基金项目]江西省吉安市科学技术局项目（吉市科计字[2019]8号（19））

鼻咽癌是临床发病率较高的一种头颈部恶性肿瘤，其发病具有明显的地域特色，中国南方、东南亚和北非等国家和地区是该病的高发区域[1]。放疗是临床治疗鼻咽癌的主要手段，能有效控制患者病情进展，但复发率仍较高。调查研究显示，40%～50%的鼻咽癌完全缓解者放疗后仍会出现复发或转移的情况，导致治疗失败[2]。如何早期监测复发和转移是采取治疗干预、延长患者生存时间的关键。影像学检查是判断鼻咽癌复发或转移的常规手段，但检查费用较高，敏感性也略显不足[3]。近几年，越来越多的研究报道指出，采用EB病毒核酸扩增（PCR）荧光定量技术进行血浆EBV-DNA定量检测在鼻咽癌的诊断和病情评估中具有一定指导价值，可作为预测患者放疗预后的生化指标[4-5]。部分专家也指出，血浆EBV-DNA定量检测能够较临床或影像学检查早3.5～6.0个月发现肿瘤转移，敏感性和可靠性均较好[6]。本研究即对不同放疗预后患者EBV-DNA定量检测结果的差异进行比较分析，以期为及早发现肿瘤复发或转移、开展治疗干预提供指导，现报道如下。

1资料与方法

1.1一般资料

选取吉安市中心人民医院2019年1～11月就诊并经治疗后临床缓解的60例鼻咽癌患者作为研究对象。所有患者中，男47例，女13例，年龄25～64岁，平均（50.22±5.45）岁。放疗后按照治疗预后分为持续缓解组38例、局部复发组13例、远处转移组9例。其中，持续缓解组男30例，女8例，年龄25～61岁，平均（49.52±5.61）岁;局部复发组男10例，女3例，年龄26～63岁，平均（54.15±5.75）岁;远处转移组男7例，女2例，年龄26～64岁，平均（55.05±5.80）岁。三组患者的性别、年龄等一般资料比较，差异无统计学意义（P>0.05），具有可比性。所有患者均知情同意，本研究经吉安市中心人民医院医学伦理委员会审核批准。

1.2纳入及排除标准

纳入标准：经手术病理检查明确诊断为鼻咽癌低分化鳞癌或非角化性癌;临床分期为cT1-4N0-3M0;调强适形放疗前血浆EBV-DNA拷贝数较高，放疗后血浆EBV-DNA拷贝数为0 copies/ml;影像学检查证实临床缓解;签署知情同意书。排除标准：合并其他恶性肿瘤者;有免疫系统或血液系统疾病者;随访失访或因个人原因中途退出本研究者。

1.3方法

所有患者均抽取外周静脉血2 ml外送至广州金域第三方检测中心，采用EB病毒PCR荧光定量检测全血中EBV-DNA基因拷贝数，所用试剂盒购自中山大学达安基因股份有限公司，操作步骤按照试剂盒说明书进行。结果判定：增长曲线不呈S型或Ct值=30时，判断为EBV-DNA阴性，其余情况为阳性。

局部复发者经鼻咽镜检查结合病理活检证实，颈部淋巴结复发经包块穿刺活检证实，远处转移经影像学检查判定。复发或转移者视情况选择局部姑息放疗、姑息化疗或靶向治疗，并继续监测血浆EBV-DNA拷贝数。

1.4观察指标

比较三组患者的EBV-DNA阳性检出率和EBV-DNA拷贝数，进一步比较复发或转移者二次治疗前后EBV-DNA拷贝数变化情况。

1.5统计学方法

采用SPSS 22.0统计学软件进行数据分析，计量资料用均数±标准差（x±s）表示，组间比较采用t检验;计数资料采用率表示，组间比较采用χ2检验，以P<0.05为差异有统计学意义。

2结果

2.1三组EBV-DNA阳性检出率及EBV-DNA拷贝数的比较

局部复发组和远处转移组患者的EBV-DNA阳性检出率及EBV-DNA拷贝数均高于持续缓解组，差异有统计学意义（P<0.05）;局部复发组和远处转移组患者的EBV-DNA阳性检出率及EBV-DNA拷贝数比较，差异无统计学意义（P>0.05）（表1）。

2.2复发转移者二次治疗前后EBV-DNA拷贝数的比较

局部复发组和远处转移组患者治疗后的EBV-DNA拷贝数均低于治療前，差异有统计学意义（P<0.05）;局部复发组和远处转移组患者治疗前后的EBV-DNA拷贝数比较，差异无统计学意义（P>0.05）（表2）。

3讨论

鼻咽癌是我国发病率较高的一种恶性肿瘤，局部侵袭力和淋巴转移能力较强，由于其病理特征较为特殊，因此放疗十分敏感，临床上也多采取放疗进行治疗。但调查研究显示，鼻咽癌患者放疗临床缓解后容易出现局部复发和远处转移等不良情况，严重影响患者的预后效果[7]。有专家指出，若能早期发现局部复发或远处转移，并及时予以个体化二次治疗则能够进一步改善患者的预后[8]。因此，对鼻咽癌放疗后复发和转移的监测工作十分重要。

影像学方法是监测鼻咽癌放疗后复发和转移的传统手段，临床开展也较为广泛，但频繁的影像检查会给患者带来沉重的经济负担，同时在诊断复发转移方面敏感性也稍显不足，漏诊率难以令人满意。分析原因主要为：CT、MRI等影像手段属于局部显像技术，无法完全检测到所有可能发生转移的部位;CT、MRI等影像手段在放疗后肿瘤浸润与纤维化鉴别、发现较小的转移灶、残存肿瘤性质判断等方面存在一定局限性[9]。

EBV-DNA在初诊鼻咽癌患者中的重要性已得到国内外专家的一致认可，国外大量研究报道指出，血浆中EBV-DNA拷贝数与鼻咽癌TNM临床分期呈正相关，即随着鼻咽癌TNM临床分期的升高血浆EBV-DNA拷贝数水平越高[10-11]。因此，血浆中EBV-DNA拷贝数能够在分子水平上反映鼻咽癌患者的病情程度，在鼻咽癌预后评估中有较高的应用价值[12]。国内部分专家也指出，能够利用全血中EBV-DNA的阳性检出作为监控鼻咽癌放疗预后的肿瘤标志物，放疗后临床缓解者EBV-DNA阳性率与未缓解者存在极大差异[13-14]。陈佳等[15]的研究也认为，利用EBV-DNA阳性率和EBV-DNA拷贝数进行鼻咽癌患者放疗后临床缓解者发生局部复发和远处转移监测是可行的。

放射治疗是治疗鼻咽癌的常用方法之一，但放射治疗不仅会对癌细胞造成破坏，也会对机体的正常细胞产生较大的损伤，临床治疗副作用较大。鼻咽癌患者的放射治疗会造成鼻黏膜干燥、口腔黏膜干燥等症状，还会造成患者的鼻腔出血以及引起不同程度的疼痛，其并发症主要包括口干、干燥性的角膜炎、放射性脑病、张口困难、皮肤反应等。因此，临床需要做好必要的防护，以减少不良反应的发生。本研究的技术关键是定量检测经放疗治疗后临床缓解的鼻咽癌患者的EBV-DNA拷贝数，了解EBV-DNA拷贝数与鼻咽癌复发转移之间的相关性，从而预测患者的预后情况。本研究结果显示，局部复发组和远处转移组患者的EBV-DNA阳性检出率及EBV-DNA拷贝数均高于持续缓解组，组间比较差异有统计学意义（P<0.05）;局部复发组和远处转移组患者治疗后的EBV-DNA拷贝数均低于治疗前，组内比较差异有统计学意义（P<0.05）。提示复发转移者存在EBV-DNA阳性检出率及EBV-DNA拷贝数升高的情况，且随着二次治疗又逐渐下降，与上述研究报道相符。这也与国内相关研究中血浆EBV-DNA含量与肿瘤负荷有关的说法是一致的[16]，说明通过放疗、化疗等能够减少肿瘤负荷，从而减少肿瘤细胞释放入血的EBV-DNA，导致血浆中EBV-DNA拷贝数下降。由此可见，EBV-DNA定量检测可作为早期预测局部复发和远处转移的肿瘤标志物，能够为早期采取治疗干预、延长患者总生存时间和生活质量提供有利条件，也在一定程度上减轻了患者的经济压力，具有较高的临床应用价值。但需要注意的是，本研究中局部复发组和远处转移组患者的EBV-DNA阳性检出率及EBV-DNA拷贝数比较，差异无统计学意义（P>0.05）;局部复发组和远处转移组治疗后的EBV-DNA拷贝数比较，差异无统计学意义（P>0.05）。提示局部复发和远处转移者EBV-DNA定量检测结果未出现明显差异，这可能与本研究样本量较少，患者就诊和EBV-DNA检测时间存在波动，导致数据存在一定限制，还需要进一步扩大样本量进行研究确认。

综上所述，不同放疗预后患者血浆EBV-DNA定量檢测结果存在显著差异，血浆EBV-DNA定量检测能够作为监测鼻咽癌放疗后复发转移的可靠肿瘤标志物。

[参考文献]

[1]郑登云，管吉林.2017年度头颈部肿瘤研究进展[J].循证医学，2018，18（1）：24-25，28.

[2]朱晋冰，张洪，艾平.调强放疗下局部晚期鼻咽癌综合治疗进展[J].川北医学院学报，2019，34（3）：491-496.

[3]Sun XS，Liu SL，Luo MJ，et al.The Association Between the Development of Radiation Therapy，Image Technology，and Chemotherapy，and the Survival of Patients With Nasopharyngeal Carcinoma：A Cohort Study From 1990 to 2012[J].Int J Radiat Oncol Biol Phys，2019，105（3）：581-590.

[4]孙畅，路顺，郎锦义.EB病毒感染与鼻咽癌诊治的研究进展[J].肿瘤预防与治疗，2018，31（5）：352-357.

[5]周睿，朱婧，张涛.EB病毒DNA检测在鼻咽癌中的应用及研究进展[J].现代肿瘤医学，2019，27（21）：3902-3905.

[6]吴霞，刘勇军，李涛.鼻咽癌预后评估分子标志物的研究进展[J].中国肿瘤生物治疗杂志，2019，26（3）：346-350.

[7]张力.鼻咽癌的综合治疗进展[J].肿瘤防治研究，2019，46（8）：667-671.

[8]赵海鹰，李思维.复发鼻咽癌综合治疗及其进展[J].实用医学杂志，2018，34（5）：691-693，697.

[9]朱郧鹤，骆磊，孙鹏，等.两种影像学检查方式用于老年鼻咽癌放疗患者复发及纤维化鉴别诊断价值比较[J].中国妇幼健康研究，2016，27（S1）：11-12.

[10]Nicholls JM，Lee VH，Chan SK，et al.Negative plasma Epstein-Barr virus DNA nasopharyngeal carcinoma in an endemic region and its influence on liquid biopsy screening programmes[J].Br J Cancer，2019，121（8）：690-698.

[11]Mazurek AM，Wygoda A，Rutkowski T，et al.Prognostic significance of Epstein-Barr virus viral load in patients with T1-T2 nasopharyngeal cancer[J].J Med Virol，2019，10（13）159-164.

[12]罗欣，吴永忠，陈晓品.鼻咽癌EB病毒相关血清标志物与预后相关性研究进展[J].现代医药卫生，2019，35（4）：556-559.

[13]李金高，林少俊，陈晓钟.血浆EBV DNA检测在鼻咽癌诊疗中的研究新进展[J].中国肿瘤临床，2018，45（10）：487-491.

[14]郑传胜，白薇琦.EB病毒血清学检测在鼻咽癌临床诊治中的应用进展[J].现代实用医学，2018，30（1）：134-136.

[15]陈佳，向志碧.血浆EB病毒DNA监测鼻咽癌远期预后的研究进展[J].检验医学与临床，2018，15（4）：571-573.

[16]陈猛，郭文杰，宗丹，等.局部晚期鼻咽癌血浆EBV-DNA水平与肿瘤负荷及预后的关系[J].肿瘤学杂志，2015，21（3）：190-194.

（收稿日期：2020-01-22）