西双版纳勐海县育龄人群血常规及地中海贫血现状分析

赵婷婷，胡艳丽，胡 滔，黄 羽，张 杰

（1） 昆明理工大学医学院；2） 昆明医科大学直属单位党委，云南昆明 650500；3） 云南省第三人民医院检验科，云南昆明 650011；4） 西双版纳勐海县妇幼保健院检验科，云南勐海 666200；5） 昆明理工大学附属云南省第一人民医院医学遗传科，云南省出生缺陷与遗传病研究重点实验室，云南昆明 650032）

地中海贫血（简称“地贫”） 是由珠蛋白基因缺失或突变导致肽链合成障碍而引起的单基因遗传病，全世界地贫基因携带者约3.5 亿人[1]。按照受累珠蛋白基因类型把地贫分为α-地贫、β-地贫、δ-地贫等几种类型。地贫主要分布在地中海沿岸地区、非洲、印度次大陆、东南亚、中东和中国南方。地贫在我国广东[2]、广西[3]、贵州[4]、云南[5]、海南[6]较为高发。少数民族如傣族[7]、壮族[8]、黎族[9]是地贫高发的民族。云南省是我国民族种类最多的省份，也是地贫高发区域，云南省傣族人群的地贫携带率高达40%以上[10]。

西双版纳勐海县位于云南省西南部，与缅甸接壤，是云南省地贫筛查阳性率较高的州市之一[11]。西双版纳勐海县境内居住着傣族、哈尼族、拉祜族、布朗族、汉族、彝族、回族、佤族、白族、苗族、壮族、景颇族等25 个民族，其中傣、哈尼、拉祜、布朗是当地的四大主体民族。对该地区进行地贫流行情况，地贫突变的临床血液学特征的研究，了解该地区育龄人群地贫的分布与特征，能对今后在该地区开展地贫防控项目奠定一定的基础。

1 资料与方法

1.1 研究对象

2014 年1 月至2019 年9 月期间在云南省西双版纳勐海县妇幼保健院参与地贫防控项目的育龄人群共3 198 例为研究对象。受检者为有生育计划的婚检夫妇或早孕期孕妇，来自于勐海县下辖的六个镇。受检者的年龄在20～60 岁，统计人群的籍贯及民族信息。受检者均签署知情同意书。

1.2 方法

1.2.1 血常规检测与外周血DNA 提取 采用EDTA 抗凝剂真空采血管抽取患者外周血血样3 mL，用Sysmex XE-5000 全自动血液细胞分析仪（日本Sysmex 公司） 进行血常规检测，主要观察的参数分别为红细胞血红蛋白量（hemoglobin，HGB）、平均红细胞血红蛋白量（meancorpuscular hemoglobin，MCH）、平均红细胞体积（mean corpuscular volume，MCV）。正常参考值范围：HGB：110～150 g/L，MCV：82～95 fl，MCH：27～31 pg，以MCV ＜80 fl 或MCH ＜27 pg 为筛查阳性标准（MCV 或MCH 单阳即为筛查阳性）。地贫的血液学表型阳性的检测对象，使用外周血DNA 提取试剂盒进行全血基因组DNA 提取。

1.2.2 地贫基因检测 采用非缺失型α-地贫基因检测试剂盒检测中国人群中常见的三种非缺失型α-地贫突变位点:αCSα、αQSα、αWSα。采用α-地贫基因检测试剂盒（Gap-PCR 法） 检测α-地贫常见的4 种缺失类型：东南亚缺失型（--SEA）、右侧缺失型（-α3.7）、左侧缺失型（-α4.2） 和泰国缺失型（--THAI）。采用β-地贫基因检测试剂盒检测17 种较为常见的β-地贫基因突变位点[12]。

1.3 统计学处理

利用GraphPad Prism 7.0 软件进行数据分析，不同计数资料用%表示，计数数据水平均值和标准差，采用方差分析。P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 民族与籍贯信息

研究对象为接受检测的育龄人群，总数为3 198 例，籍贯为西双版纳3 196 例，包括傣族1 723 例、汉族627 例、哈尼族357 例、布朗族229 例、拉祜族178 例、彝族29 例、回族16 例、白族11 例、佤族10 例、苗族7 例、壮族6 例、布依族1 例、土家族1 例、蒙古族1 例。外籍2 例，包括老挝老龙族1 例和缅甸缅族1 例。

2.2 地中海贫血的基因检测结果

在3 198 例受检者中，血常规筛查阳性744例，占比23.26%（744/3 198）。筛查阳性病例行基因诊断，共确诊148 例为地贫基因携带者，地贫确诊阳性率为4.63%（148/3 198）。其中阳性检出率最高的民族是傣族（7.66%，132/1 723），其次是汉族（1.59%，10/627）、拉祜族（1.69%，3/178）、哈尼族（0.56%，2/357）、布朗族（0.44%，1/129），见表1。共检出共有12 种地贫突变类型，地贫基因突变类型及构成比见表2。其中，α-地贫的基因携带者93 例，--SEA（57.39%，66/115）最为常见，其次为-α3.7（29.57%，34/115）。β-地贫的基因携带者43 例，最常见的类型为CD26（G＞A） （40.00%，22/55），CD17 （A＞T）（30.91%，17/55），CD41-42 （-TTCT） （20.00%，11/55），α-地贫合并β-地贫12 例。对于α-地贫的血常规特征而言，--SEA较-α3.7型，其HGB 相对较低；--SEA较-α3.7型、-α4.2和αCSα型，其MCH 均相对较低，见表3。对于β-地贫而言，CD17 （A＞T） 较CD26 （G＞A），其MCV 及MCH 相对较低；CD41-42 （-TTCT） 较CD26（G＞A），其MCH 相对较低，见表4，差异有统计学意义（P＜0.05）。

3 讨论

地中海贫血是我国南方各省份影响最大发病率最高的遗传病之一，α-和β-地贫是最常见，同时也是危害性最大的两种类型。α-地贫分为由α-珠蛋白基因缺失引起的缺失型α-地贫和由α-珠蛋白基因点突变（αT） 引起的非缺失型α-地贫两种类型，其中主要以缺失型α-地贫为主。α-珠蛋白基因位于16 号染色体上，其功能基因上有两个高度同源的α-珠蛋白基因α2 和α1。β-地贫主要是由于β-珠蛋白基因发生了点突变造成的，其他少数是由基因缺失引起。血常规检测地贫会出现小细胞低色素贫血改变，血红蛋白电泳检测地贫会有Hb A2 数值异常。传统的方法使用血红蛋白电泳和血常规作为地贫筛查的标准，血常规以MCV ＜80 fl 或MCH ＜27 pg 为筛查阳性标准，血红蛋白电泳仪器费用较高，难以在基层普及。本研究主要探讨使用血常规筛查地贫的适用性和准确性，为基层医疗单位对地贫疾病妊娠提供实验室依据。

西双版纳勐海县是少数民族聚居地区，该地区有25 个民族。笔者的结果显示，地贫在傣族、汉族、哈尼族、拉祜族、布朗族这5 个民族中检出。地贫以傣族最为常见，推测其原因，一是傣族是当地的主要民族，人口相对较多，二是傣族人群中地贫携带率较高[13]。哈尼族、拉祜族、布朗族也有地贫携带者，其人数较少，可能因为参与筛查的人数较少，扩大人数后才能得出更为准确的携带率情况。少数民族群众地贫防控意识不够，今后需要进一步宣教。

本次调查研究使用的传统血常规筛查方法，α-地贫的基因突变类型以--SEA最为常见，β-地贫的突变类型以CD26 （G ＞A） 最为常见，该结果与云南省早前使用传统方法的研究相类似[14]。然而，贺静等[10]人使用新的二代测序进行筛查的结果却显示西双版纳地区常见的地贫类型为-α3.7，β-地贫常见的突变类型是CD26 （G＞A）。-α3.7型为静止型α-地贫类型，只涉及一个α-珠蛋白的缺失，血液学检测不一定出现明显的小细胞低色素改变，单纯采用血常规进行分析会导致出现漏诊的情况；--SEA缺失型α-地贫涉及两个α-珠蛋白的缺失，血常规分析能检测出小细胞低色素贫血改变。选择不同的筛查方法会得出不同的α-地贫构成比的结果，提示地贫会有漏诊的可能。-α3.7携带者自身没有明显临床症状，但是若合并--SEA（-α3.7/--SEA） 则为中间型的双重杂合突变地贫，患者可能出现轻度到重度不同程度的贫血，因此对-α3.7型等静止型地贫不能仅仅进行血常规分析。建议在地贫高发地区，基层医院在对检测结果存疑的情况下，应该选择更为准确的方法如二代测序进行验证。

表1 各民族不同地贫类型的阳性检出率（n）Tab.1 Positive detection rate of different types of thalassaemia in ethnic groups （n）

表2 地贫基因突变类型例数及构成比Tab.2 Number and composition ratio of mutation types of thalassaemia genes

表3 α-地贫基因突变类型的血液学参数比较（±s）Tab.3 Comparison of hematological parameters of α-thalassemia gene mutation types （±s）

表3 α-地贫基因突变类型的血液学参数比较（±s）Tab.3 Comparison of hematological parameters of α-thalassemia gene mutation types （±s）

与--SEA 比较，*P＜0.05。

表4 β-地贫基因突变类型的血液学参数比较（±s）Tab.4 Comparison of hematological parameters of β-thalassemia gene mutation types （±s）

表4 β-地贫基因突变类型的血液学参数比较（±s）Tab.4 Comparison of hematological parameters of β-thalassemia gene mutation types （±s）

与同组CD26(G＞A)比较，*P＜0.05。

从各种地贫突变类型的血液学特征上分析，α-地贫携带者中，--SEA型的贫血症状较为明显，-α4.2型贫血症状较轻，多为无症状的携带者。β-地贫贫血症状最为明显的是CD17 （A＞T），CD17（A ＞T） 突变为终止密码子，导致蛋白功能丢失，对血红蛋白影响较大。β-地贫贫血症状最轻的是CD26 （G ＞A），杂合突变多为无症状的携带者。α-地贫合并β-地贫可以重新获得珠蛋白表达的平衡，一般不会导致贫血症状的加重；夫妻双方若一方α-地贫，另一份为β-地贫，理论上胎儿不会出现中重度地贫，可以不建议行胎儿产前诊断。从本研究的12 例α-地贫合并β-地贫病例来看，无一出现中重度贫血的症状，也部分支持上述观点。

目前临床主要通过血常规和血红蛋白电泳对患者进行地贫筛查，没有血红蛋白电泳数据支持，且传统的这两种方法都存在一定的漏检率，故勐海县育龄人群地贫实际的携带率应比本研究的地贫阳性检出率（4.63%） 要高。本研究在西双版纳勐海县育龄人群进行地贫流行病学的调查研究，对降低本地区中重度地贫患儿出生有一定的指导意义，也有助于进一步完善该地区实验室的地贫筛查指标，为地贫临床遗传咨询提供可靠的理论依据。