四君子颗粒的制备及甘草苷含量测定

2020-08-27师晨迎冯亚莉翟广玉谢新年

生物化工 2020年4期

师晨迎，冯亚莉，翟广玉，谢新年

（郑州工业应用技术学院药学与化学工程学院，河南新郑 451100）

四君子汤最早出自宋代《太平惠民和剂局方》，该方由白术、茯苓、甘草、人参4种常用药材组成。该药方中，人参甘温抚养脾胃，元气大补为君药；白术苦温，燥湿健脾为臣药；茯苓甘淡，健脾祛湿为佐药；甘草性寒，健脾养胃为使药。四药相辅，共奏益气健脾之功，主治脾胃虚弱，说话轻微无力，四肢乏力，脉弱没劲，食欲不佳，偶伴寒证的患者[1]。临床主要用于治疗一些胃肠疾病，如消化性急性溃疡[2]、慢性胃炎和腹泻、急性肝损伤和慢性肝损伤以及小儿食欲不振等[3]。原方中，君药人参常由党参代替，若以党参为君药，则四君子汤的功效侧重于补中益气，生津养血[4]。

几千年来，中药的应用以汤剂为主，但汤剂的使用非常不便，需要长时间煎煮，服用剂量大，且大多数汤剂气味大、味道苦。中药颗粒剂很好地克服了汤剂的这些缺点，而且携带方便、起效快。本文研究了四君子颗粒的制备工艺，并对四君子颗粒的有效成分之一甘草苷进行了含量测定，具有重要的现实意义。

1 材料与方法

1.1 主要仪器与试剂

BK-1000B超声波清洗机，济南巴克超声波科技有限公司；HH-2数显恒温水浴锅，常州普天仪器制造有限公司金坛市晶波实验仪器厂；SHSL调温电热套，上海树立仪器仪表有限公司；RE-52旋转蒸发仪，上海亚荣生化仪器厂；ZF-6三用紫外线分析仪，上海嘉鹏科技公司；HPLC-1206高效液相色谱仪，安捷伦科技有限公司。

党参、白术（炒）、茯苓、甘草（炙）购于新郑市学院路店张仲景大药房，经药学与化学工程学院谢新年教授鉴定为合格药材；甘草酸铵对照品（货号G810490），购于上海麦克林生化科技有限公司；乙腈和甲醇为色谱纯，其他试剂和溶剂均为分析纯。

1.2 提取方法

1.2.1 水煎煮提取工艺

取党参12 g、白术9 g、茯苓9 g、甘草6 g，加15倍量蒸馏水浸泡1 h。大火煮沸后小火煎煮30 min，同法煎煮3次，合并滤液。抽滤、浓缩药液，然后加入3倍量的无水乙醇，慢加快搅，冷藏静置24 h后抽滤。滤液旋转蒸发至粘稠状，转移至小烧杯内，在水浴锅内浓缩。滤液浓缩至浸膏状态，冷却后收集干膏，在研钵内研成干膏粉备用。加入适当比例辅料(党参、茯苓、白术、甘草等），以水为润湿剂，迅速搅拌制颗粒，晾干[5]。

1.2.2 超声提取工艺

将药材用粉碎机打粉，加入15倍量蒸馏水，65 ℃下超声提取60 min。抽滤后收集滤液，加入滤液体积3倍的无水乙醇，冷藏静置24 h。再次抽滤，滤液使用旋转蒸发仪浓缩至黏稠状，转移至小烧杯内，然后使用恒温水浴锅，将滤液浓缩至干膏状态，进行收集。在研钵里研至成干膏粉。按比例加入辅料，用水作为润湿剂，快速搅拌使之成粒，干燥即得[6]。

1.3 TLC鉴别

按照2015版《中国药典》薄层色谱法实验制备单方甘草和全方供试品溶液，吸取单方甘草溶液、全方四君子颗粒供试品溶液各5 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲酸-乙酸乙酯-水-冰醋酸（2∶16∶1∶1）为展开剂，置于紫外光（365 nm）下检视。

1.4 甘草苷含量测定

1.4.1 色谱条件

以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；色谱柱：ZORBAXSB-C18（4.6 mm×250 mm，5 μm），流动相为乙腈- 0.05%磷酸水溶液-甲醇；检测波长为237 nm；柱温为正常室温；流量为1.0 mL/min；进样量为10 μL。

1.4.2 溶液的制备

对照品溶液：精密称取甘草苷对照品1.00 mg，取适量甲醇超声溶解，转移至1 mL棕色容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，超声混匀，得到浓度为1 mg/mL甘草苷对照品溶液。

供试品溶液：精密称取四君子颗粒1.00 mg，取适量甲醇超声溶解，转移至1 mL棕色容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，超声混匀，得到浓度为1 mg/mL的供试品溶液。

1.4.3 标准曲线的绘制

精密吸取甘草苷对照品溶液,依次稀释至浓度为0.01 mg/mL、0.02 mg/mL、0.04 mg/mL、0.06 mg/mL和0.08 mg/mL。分别准确吸取上述对照品溶液10 μL，按相同的色谱条件进行测定，以浓度和峰面积作为X、Y坐标绘制标准曲线。

2 结果与分析

2.1 两种工艺结果对比

如表1所示，对比水煎煮提取工艺和超声提取工艺两种方法制备的颗粒可以发现，超声提取工艺所制备颗粒的成型率和溶化率均优于水煎煮提取工艺所制备的颗粒。

表1 两种工艺制备的颗粒的成型率、溶化率比较

2.2 TLC鉴别结果

如图1所示，A为甘草单方供试品，B为四君子颗粒供试品。经过对比可以看出，四君子颗粒供试品在与甘草单方供试品相应的位置上，显示颜色相同的荧光斑点。

图1 TLC测定结果

2.3 含量测定

2.3.1 甘草苷标准曲线

甘草苷标准曲线的回归方程为Y=19 767X-16.087（R2=0.992 7），表明甘草苷在 0.01～0.08 mg/mL线性关系良好[7]。

2.3.2 样品中甘草苷含量测定

分别取水煎煮提取法和超声提取法制备的四君子颗粒供试品各5批，按照测定甘草苷标准品的相同条件进样并测定样品峰面积，代入线性回归方程计算样品对应的浓度，进而得到甘草苷的含量。由表2可知，水煎煮提取工艺中甘草苷的平均含量为0.1 348 mg/g，RSD为1.29%；超声提取工艺中甘草苷的平均含量为0.1 537 mg/g，RSD为1.24%。所以，超声提取工艺制备所得5个批次的四君子颗粒中甘草苷含量大于水提工艺制备所得5个批次的四君子颗粒。