阴地蕨提取物对大鼠运动机能干预及抗氧化性研究

2020-08-27周云宋金金胡斌陈安东王则慧

生物化工 2020年4期

周云，宋金金，胡斌，陈安东，王则慧

（安康学院，陕西安康 725000）

阴地蕨是阴地蕨科植物阴地蕨的全草，具有清热解毒、止咳、止血、清肝明目的药效[1]。根据目前的研究表明，阴地蕨中含有总黄酮、皂苷、酚类、糖、多糖、有机酸、鞣质、蛋白质和强心苷等化学成分[2]。其中总黄酮是指黄酮类化合物，是一种天然产物，广泛分布于各种中草药内[3]。阴地蕨中的黄酮类物质主要是阴地蕨素。前期研究表明阴地蕨素对清除氧自由基、减小细胞损伤程度具有一定作用，即通过抑制脂质过氧化反应[4]，进而提高机体抗氧化能力。本实验对小鼠进行力竭运动的高强度训练后，测定其力竭运动时间，通过不同组数据比较来讨论阴地蕨是否能提高小鼠机体运动能力，并通过对肝组织进行SOD（超氧化物歧化酶）活力测定，讨论阴地蕨是否可以提高机体抗氧化能力。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 药品与试剂

阴地蕨提取物，西安澳瑞特生物科技有限公司；SOD测定试剂盒，南京建成生物工程研究所；乙醚（分析纯，天津市化学试剂六厂）；蒸馏水（分析级，华南高科水处理西安有限公司）；98%冰醋酸（分析纯，天津市恒兴化学试剂制造有限公司）；98%乙醇（分析纯，天津市化学试剂六厂）。

1.1.2 动物

24只雄性大鼠，体重140～200 g，由西安交通大学医学部提供。分笼饲养，动物饲养室内温度（24±6）℃，相对湿度45%～75%。

1.1.3 仪器

电动跑台，中国杭州段氏制作；TGL-16G台式高带冷冻离心机，上海安亭科学仪器厂；721B型分光光度计，上海第三分析仪器厂；751B型紫外分光光度计，上海第三分析仪器厂；DK-98-1A恒温浴锅，天津泰斯特有限公司；BCD-203A容声冰箱，中国科龙电器股份有限公司；Bonso-TCS-2000A电子称，武汉自动化仪表厂。

1.2 方法

1.2.1 模型制备与分组

对小鼠进行7 d的静养，使小鼠适应实验室环境，再按表1的方法进行为期7周的电动跑台力竭运动训练，记录运动组和运动加药组老鼠在运动跑台上的状态、行为和最大运动时间，并用木棍、噪音、小型电机在其头部、四肢躯干等部位进行刺激，以避免小鼠没有到达力竭状态。通过观察，运动加药组小鼠相比较于运动组小鼠，体型较大，更易反抗和攻击。此外，设置安静组小鼠置于饲养箱中静养。

表1 实验运动小鼠运动方案

1.2.2 给药

对运动加药组采用喉管注射的方式，搭载剂量为100 mg/kg的阴地蕨提取物，体积为2 mL。对安静组及运动组注射同样体积的生理盐水作为实验对照。

1.2.3 待测样品制备

对小鼠进行完7周的电动跑台力竭运动训练后，用乙醚对小鼠进行中度麻醉，并对小鼠进行解剖，摘除24只小鼠的肝组织。器官样品取出后立即置于低温生理盐水进行清洁，冲洗多次，用滤纸吸取组织表面残留生理盐水，将肝组织于-40 ℃冰箱冷冻保存[6]。剪取肝组织样本，并对其进行碎化处理，按1∶9生理盐水进行配比。生理盐水配比分3次倒入小烧杯中，第1次将小烧杯中组织倒入研磨皿并用生理盐水清洗；第2次用生理盐水冲洗烧杯内壁；第3次用生理盐水去除研磨棒上的残留组织，进行研磨，待组织研磨成匀浆状态后，倒入离心管中在低温4 000 r/min下离心，时间15～20 min。取上清液进行测定或放置于-40 ℃冰箱冷冻保存[7]。

1.2.4 测试方法

采用黄嘌呤氧化分光光度法测定SOD活性[8]。

1.2.5 统计学分析

试验数据经SPSS19.0分析后,以正态分布和方差齐性检验（±s）表示；采用单因素方差分析并进行两两比较，P＜0.05为具有差异显著性。

2 结果与分析

2.1 阴地蕨提取物对小鼠力竭运动时间的影响

运动组力竭运动时间为12.875±3.47 min，运动加药组力竭运动时间为15.536±2.61 min，这说明阴地蕨提取物能起到一定的抗疲劳能力。

2.2 阴地蕨提取物对小鼠肝脏内SOD活力的影响

表2为小鼠的SOD酶活力数据：与安静对照相比，运动加药组和运动组SOD酶的活性有所降低，运动加药组的活力相对安静组有显著性差异（P＜0.05），运动组的活力相对于安静组有极显著差异（P＜0.01）；与运动组相比，运动加药组SOD的含量有所增加。SOD是一类含金属辅助因子的酶，对于机体最主要的作用就是清除所产生的超氧阴离子，氧自由基会对体内细胞造成不同程度的损伤。研究表明，SOD可以促使氧自由基形成双氧水，这就在一定程度上减缓甚至消除了机体细胞的损伤。氧自由基要在机体进行氧化反应，SOD的作用就是抵抗这类氧化反应，使机体达到平衡。在此次实验中，通过7周的高强度力竭运动实验，运动组小鼠的SOD活性降低，而运动加药组的SOD活力明显高于运动组，这是因为运动加药组小鼠在阴地蕨提取物的抗氧化作用下，有效地清除了氧自由基，抑制了体内的氧化反应，使得自由基数量减少，过氧化氢由于缺少合成来源也逐步减少，这就减轻了双氧水对SOD活力的影响[9]。与安静组相比，运动加药组的SOD活力略小于安静组，这是因为阴地蕨提取物只是起到抗氧化的作用，可以减轻运动等外界因素带来的损失，但不能使SOD活力比安静组还高。