液相色谱串联质谱法检测食品中的黄曲霉毒素分析

□ 谷 叶 黄和飞 昆明和合医学检验所有限公司

AFT，即由黄曲霉与寄生曲霉等真菌代谢后形成的一种毒害性真菌霉素。AFT及其衍生物有20余种，其中B1、B2、G1与G2在自然界内广泛分布，其基本结构均由一个呋喃环与一个香豆素组成，前者是毒素的基础结构，后者和AFT的致癌性密切相关，且对前者的毒性有加强作用[1]。因为AFT对机体健康造成的危害较大，故而多个国家政府机关与有关组织陆续拟定了食品内AFT的检测分离方法，和其他检测方法相比，LC-MS/MS法分离能力强、灵敏度高，能实现对多种化合物的定性定量分析，本文主要用其检测食品中4种AFT（B1、B2、G1与G2），具体如下。

选择2014年1月-2016年12月 在我院收治的96例面神经炎病人,其中男性66例,女性30例,年龄在10-76岁之间。

再次，也是最为重要的原因是由于女性在分娩前后激素水平的变化，直接导致产后抑郁症的发生。在妊娠期间，孕妇体内的雌激素和孕激素水平长时间处于较高水平，而雌激素具有多种神经调节功能，分娩后雌激素水平突然降低，影响了神经调节的功能，有可能导致情绪抑郁。

1 材料和方法

1.1 材料与试剂

从市面上采购花生、玉米、燕麦片等。制备AFT的B1、B2、G1与G2混合标准液（前两者的质量浓度均为1 μg/mL，后两者均为 0.3 μg/mL）。乙醇、甲醇均为色谱纯，甲酸为分析纯，超纯水。

1.2 仪器和设备

选用6430三重四极杆液质联用系统及相关配套设施检测AFT，还有净化柱、电子天平、超声波清洗器与超纯水仪等设施。

1.3 仪器参数

1.3.1 色谱条件

分别量取25 g试样，将其依次放入到容积为250 mL的锥形瓶内，而后把100 mL乙腈-水溶液加入其中，连续快速搅拌3 min，将如上制得的混合液通过定性滤纸与Mycosep 226真菌毒素净化柱，以获得净化液，提取适量通过0.22 μm滤膜，采集待测。

1.3.2 质谱条件

选Agilent ZORBAX Eclipse XDB-C18柱（4.6 mm×50 mm，1.8 μm）作为色谱柱；流动相为0.1%甲酸-甲醇（3∶2）；设定流速0.4 mL/min；柱体温度35 ℃；进样量为5 μL。

对各试样反复进行5次进样，检测到各组分对应的峰面积，测算相对标准偏差（RSD），以评估方法的精密度。为检测该方法的回收率，提取3份试样，依次添加体积不同的标准液，测算出加标回收率。

表1 4种AFT的MRM扫描参数

1.4 处理试样

（3）SD大鼠CRF模型制备：SD大鼠适应性饲养7 d，以10%水合氯醛溶液ip麻醉，常规消毒铺巾，从右背部切口打开腹腔，静脉夹夹住肾蒂后用高频电刀切除2/3右肾，止血后复位肾脏（正常组以相同步骤打开腹腔，暴露肾脏后复位，避免牵拉肾脏）。2周后于第2次手术切除左侧肾脏。造模4个月后，以10 mL/kg的给药体积连续给药6周（正常组和模型组给予相同体积的生理盐水），并于实验结束当天采集血液，分离血清，用试剂盒测定Cr、BUN含量。

1.5 线性范围和检测限

当甲醇和水相比例为3∶2时，4种组分于5 min内陆续出峰，取得了最佳的分离效果[2]。

1.6 精密度和回收率试验

选取喷雾电离源作为离子源，基于正离子模式加以扫描；干燥气流速、温度依次为12 mL/min、345 ℃；雾化气压力为50 psi；毛细管电压4 000 V；质量扫查范畴100～500 m/z。4种AFT的MRM扫描参数见表1。

（3）矿料级配设计。上面层采用AC—16型沥青混合料，设计时考虑含砂量对混合料性能造成下降，故将设计级配沿规范要求中值适当上移，具体见表3。

2 结果和分析

把标准样品液稀释为数个不同浓度梯度，按浓度由低至高顺序进样5 μL，横、纵坐标分别设定为进样浓度、峰面积，进行线性回归分析。

取用浓度存在差异的标准液，依照设定的色谱、质谱条件进样，基于峰面积（y）与试样含量（x）绘制标准曲线，获得相应的线性方程与有关系数，并测算出检出限与定量限。具体见表2。

表2 黄曲霉素的线性范围、回归方程、相关系数与检出限

依照1.6方法开展精密度与回收率试验，测算RSD，精密度检测结果见表3[3]。

表3 黄曲霉素RSD测算情况统计

分析表2内的数据后，发现RSD均＜5.0%。进行回收率试验，发现样品的回收率均在80.0%～94.5%。综合各种数据信息后，认为该检测方法的精密度与回收率均较好。

3 讨论

本实验研究中建立了LC-MS/MS法检测食品内AFT，使用甲醇和水等进行洗脱，于质谱正离子模式下进行监测，4种组分于5 min内整体分离，B1、B2、G1与G2的检出限依次是0.11、0.009、0.012 μg/kg与 0.008 μg/kg，加标回收率均值为80.0～94.5%，RSD＜5.0%，均符合相关限量规范要求。LC-MS/MS检测食品内AFT，有过程快速、灵敏度高、精确可靠等诸多优势，值得推广。