臭节草化学成分预试及生物碱成分薄层色谱分析

李剑美，李学玲，周仕顺，王桃林，陶 川，，赵 锋*

（1.云南省高校民族医药资源研究东南亚国际合作重点实验室，云南 普洱 665000；2.云南省高校亚热带药用食用资源开发与利用重点实验室，云南 普洱 665000；3.普洱学院生物与化学学院，云南 普洱 665000；4.中国科学院西双版纳热带植物园，云南 勐腊 666303）

臭节草 （Boenninghausenia albiflora（Hook.）Reichb）为芸香科 （Rutaceae）石椒草属 （Boenninghausenia）的多年生草本植物［1］。《全国中草药汇编》中记载臭节草以全草作药，味辛、苦，性温或寒，具有清热、散瘀、凉血、舒筋、消炎的作用，可治风寒感冒、咽喉炎、腮腺炎、支气管炎、皮下瘀血等，又作驱虫药［2］。普洱地区将臭节草称之为猫脚迹、白虎草，当地民族民间医生以其根或全草入药，主治感冒发烧，消炎，支气管炎，消化不良，跌打，疮疡溃脓。国内外学者研究了与臭节草同科同属的石椒草的化学成分和药理作用，发现石椒草植物的化学成分主要含有香豆素类和生物碱化合物，还含有黄酮、芳香油和谷甾醇类化合物［3-4］；在药理方面其具有抗菌、解痉和钙通道抑制的作用，其自身也能分泌某些物质，能阻止有害昆虫对其宿主植物造成的伤害［5-9］。石椒草属植物共有2种及1变种，分别为石椒草、臭节草和毛臭节草，其中以石椒草研究较为广泛，相对于民间普遍使用的臭节草则无论是化学成分、药理活性和临床研究均较少。中华民族医药资源丰富，很多植物和动物的药材都未能建立起完整的化学成分数据库，因此采用化学预实验的方法了解其所含的类型成分，已经广泛应用于民间或者民族一些常用、疗效较好的药材的筛选研究［10-16］。

1 材料与仪器

1.1 材料

臭节草采集于云南省宁洱县普义乡 （海拔1600m左右）树林下，经中国科学院西双版纳热带植物园标本馆鉴定为芸香科石椒草属臭节草Boenninghausenia albiflora（Hook.）Reichb。取一定量的臭节草药材风干粉碎，过60目筛，密封保存。

1.2 试剂

95%乙醇、石油醚 （60～90℃）、氨水、氢氧化钾、盐酸、氢氧化钠、硫酸、冰醋酸、醋酐、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇、醋酸酐和无水乙醇均为分析纯。其他试剂 （双缩脲试剂、10%α-萘酚乙醇液、斐林 （Fehling）试剂、三氯化铁试剂、溴甲酚绿试剂、碘化铋钾试剂、硅钨酸试剂、碘-碘化钾试剂、三氯化铝试剂、醋酸镁试剂等）均自配。

1.3 仪器

药材粉碎机 （DFT-50A）、电子天平（FA3204B）、数控超声波清洗器 （BK-360C）、电热恒温水浴锅 （HH-6A）、三用紫外仪 （ZF-1）。

2 方法

2.1 化学成分预实验供试液的制备

由于各种类型的化学成分在不同溶剂中的理化性质不同，因此样品提取液包括水提取液、乙醇提取液、酸性乙醇提取液和石油醚提取液。

2.1.1 水提取液

称取样品粗粉10g，浸于100mL蒸馏水中过夜后，放入60℃水浴中加热1h，过滤，得热水提取液，滤液供检查多糖、有机酸、皂甙等成分。

2.1.2 乙醇提取液

称取样品粗粉10g，加95%乙醇100mL，水浴加热回流1h，稍冷后加少量蒸馏水，冷至室温，过滤，滤液分别用50mL石油醚 （60～90℃）萃取两次，分出下层乙醇提取液，浓缩至40～50mL，加95%乙醇50mL溶解后过滤，滤液供检查黄酮、蒽醌等成分。

2.1.3 酸性乙醇提取液

称取样品粗粉5g，加10mL 0.5%硫酸的乙酸溶液，水浴加热回流10min，过滤，滤液供检查生物碱用。

2.1.4 石油醚提取液

称取样品粗粉 1g，加入石油醚 （60～90℃）10mL，滤液供检查挥发油、油脂、萜类、甾体化合物等成分用。

2.2 预试方法

采用 《天然药物化学》和 《中药化学》介绍的传统试管预试方法进行［17-18］。

2.3 臭节草TLC分析方法

2.3.1 臭节草总浸膏的制备

分别称取臭节草茎、叶和根的粗粉5g，加入30mL浓氨水浸润16 h，再加入30mL氯仿超声提取1h，减压过滤，滤液水浴挥干，得样品残渣。

2.3.2 臭节草生物碱的分段提取

将2.3.1的残渣用3.6%HCl超声溶解，过滤，滤液用浓氨水调pH9-10，用氯仿萃取3次，每次10mL，合并氯仿，水浴挥干，再用1mL氯仿溶解，得供试品溶液。

2.3.3 臭节草生物碱薄层层析检查

取上述供试品溶液毛细管点样于硅胶GF254板，采用经氯仿 -甲醇 （9∶1）、苯 -乙醇 （8∶2）、环己烷-二乙胺 （9∶1）、氯仿-丙酮-氨水 （50∶20∶0.3）4种展开剂展开，再用改良碘化铋钾试剂显色，于紫外灯365nm下检视。

3 结果

3.1 化学成分系统预试验结果

根据各类成分特有的化学反应如颜色反应、沉淀反应等做一般定性预实验，从而得知供试品溶液中可能含有的化学成分类型。结果见表1～表4。

表1 臭节草水提取液成分预试验结果

表2 臭节草乙醇提取液成分预试验结果

表3 臭节草酸性乙醇提取液成分预试验结果

表4 臭节草酸性乙醇提取液成分预试验结果

3.2 臭节草生物碱提取分离结果

臭节草生物碱提取分离结果见表5。

表5 臭节草生物碱提取分离结果

臭节草地上部分和地下部分经浓氨水浸润和氯仿超声提取得总浸膏分别为0.5792g和0.4953g，出膏率分别为11.58%和9.90%，所得总浸膏经酸化、碱化处理，再经氯仿萃取得到生物碱提取物，分别为0.0921g和0.0784g，生物碱的粗提取率约为1.8%和1.6%。

3.3 臭节草生物碱薄层分析结果

臭节草生物碱氯仿萃取部分经氯仿-甲醇 （9：1）、苯 -乙醇 （8∶2）、环己烷 -二乙胺 （9∶1）、氯仿-丙酮-氨水 （50∶20∶0.3）4种展开剂展开，用改良碘化铋钾试剂显色。结果表明 （见表6），用氯仿-丙酮-氨水 （50∶20∶0.3）展开的效果最好，显色斑点圆滑，不拖尾；臭节草的茎叶和根分别有6个和4个显色斑点 （见图1），其余三个展开系统未见明显斑点。

表6 臭节草生物碱茎叶氯仿萃取薄层层析检查结果（改良碘化铋钾显色）

图1 臭节草地上部分 （J）和地下部分 （G）生物碱薄层层析检查结果 （365nm）

4 讨论

4.1 关于臭节草化学预实验

通过系统的化学预实验，提示臭节草中可能含有生物碱、有机酸、甙类、黄酮、和还原糖等。其中以还原糖类和生物碱类的反应比较明显，实验结果与文献报道的同属植物石椒草中主要含有的生物碱类物质一致［19-22］。臭节草所含的这些化学成分具有多种生理活性和应用前景，例如，黄酮类化合物是治疗心血管系统疾病的重要药物，还具有保肝、抗菌、抗病毒、解痉等作用［23］；多数生物碱具有抗癌、抗肿瘤、抗炎、抗病毒以及抗血小板凝集、抗心律失常和抗高血压等心血管疾病的作用。所以，它在卫生、医药等方面有着巨大的应用潜能［24］。

4.2 关于臭节草主要化学成分的分析

本试验在对臭节草化学成分预试验的基础上，对反应比较显著的生物碱和糖类分别采用TLC分析检测其大致所含的生物碱种类和采用蒽酮比色法测定了总糖的含量。筛选出了臭节草生物碱最适宜的展开剂为氯仿∶丁酮∶氨水 （50∶20∶0.3），初步观察到臭节草地上和地下部分6种和4种生物碱，所得的生物碱粗提取率分别为1.8%和1.6%，测得总糖含量为5.57%和3.55%。通过对臭节草不同部位生物碱初试和总糖的测定，其实验结果可为臭节草得的开发利用提供参考，得出臭节草具有一定的开发利用价值。然而臭节草作为药用植物，其生物碱和糖类是否具有抑菌抗炎等效果有待进一步的研究。