参芪扶正注射液联合索拉非尼对肝癌术后患者微小RNA-103、趋化因子受体及甲胎蛋白的影响*

陆晓怡 华国栋△ 白 洁 田晓玲 刘 诚 李永恒

1.北京中医药大学东方医院药房 （北京，100078） 2.北京大学肿瘤医院疼痛科

肝癌具有病程短、进程快、死亡率高等特点，特别是中晚期 肝癌患者基本失去了手术指征或者不能单纯采用手术治疗，在临床上多需要采用放疗、靶向、中药等其他疗法配合治疗［1，2］。索拉非尼是作用于苏氨酸／丝氨酸激酶及受体酪氨酸激酶的多激酶抑制剂，是一种小分子靶向药物，可通过抑制血内皮生长因子受体和血小板源性生长因子受体而阻断肿瘤新生血管形成，从而起到抗肿瘤的目的［3，4］。但靶向治疗药长期应用效果不佳，停药后容易复发，且对患者的免疫功能有一定的损伤［5］。中医药治疗恶性肿瘤注重整体性，讲究从本因上根治疾病，在临床应用中具有很好的安全性。参芪扶正注射液是国家二类中药新药，以党参、黄芪为原料，经分离、萃取后含有黄芪总皂苷、黄芪甲苷、党参皂昔、党参多糖、黄芪多糖等有效成分，具有益气补虚、培本固原等功效［6］。肝癌具体的发病机制还不明确，有研究表明，miR-103的异常表达在人类多种恶性肿瘤发生、发展起着重要作用，可能是普遍的肿瘤相关性miRNA。趋化因子（CK）是一种小分子多肽物质，具有趋化和诱导功能，趋化因子受体3（CXCR3）属于G蛋白偶联受体（GPCR）家族成员，可激活级联信号传导途径，共同参与肿瘤恶性增殖和炎性反应［7，8］。甲胎蛋白（AFP）是诊断肝癌的特异性指标，也是反映患者病情的重要指标。本文探讨了参芪扶正注射液联合索拉非尼对肝癌术后患者miR-103、CXCR3、AFP的影响。

1 资料与方法

1.1 研究对象 选取2015年9月至2018年12月在北京中医药大学东方医院诊治的肝癌术后患者88例，根据随机数字表法分研究组与对照组，各44例。两组患者一般资料比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。见表1。

1.2 纳入及排除标准 纳入标准：顺利完成手术，具有术后配合治疗指征；年龄30～70岁；预计生存期≥3个月；医院伦理委员会批准了此次研究且患者知情同意本研究；临床资料完整；患者之前未曾接受索拉菲尼、中药等抗癌治疗；肝功能Child分级A／B级。排除标准：临床资料缺项者；心、肾等重要器官功能衰竭者；怀孕或正在哺乳的妇女；合并有精神疾病、过敏体质者；中枢神经系统转移患者；参与其他研究的患者。

表1 两组患者一般资料比较

1.3 治疗方法 对照组患者给予索拉非尼（江苏先声医药股份有限公司，国药准字H20098743）治疗，口服起始剂量均为400mg，1次／d，每4周为1个周期，治疗观察3个周期。研究组患者在对照组患者治疗的基础上，给予参芪扶正注射液治疗，静脉滴注参芪扶正注射液（丽珠集团利民制药厂，国药准字Z19990065）250 m l，1次／d，3次／周，治疗观察12周。

1.4 疗效标准 显效：维持临床症状消失时间≥4周；有效：维持临床症状显著改善时间≥4周；无效：没有达到以上标准甚至恶化。（显效＋有效）／组内例数×100.0%＝总有效率。

1.5 观察指标 记录两组患者在治疗期间出现的不良反应。在治疗前后采集患者的空腹静脉血2～3 ml，平分为3份，第1份样本离心后（3 000转／min，离心时间5 min，离心半径15 cm）取上层血清，采用酶联免疫法检测血清CXCR3、AFP含量。第2份样本抗凝后，取100μl全血，加入6 ml溶血素，1 500转／min离心5min，倒去上清，加入PBS 6m l，取细胞悬液，提取总RNA，采用数字定量PCR检测miR-103相对表达水平。第3份标本在取得取细胞悬液后加入荧光单抗CD4、CD8，温室避光20 min，上流式细胞仪进行测定CD4、CD8表达水平。

1.6 统计学方法 采用统计软件SPSS 22.0分析，百分比与率等来表示计数数据，均数±标准差来表示计量数据，统计方法方法为χ2、t检验等，检验水准为α＝0.05。

2 结果

2.1 两组患者疗效及不良反应情况 两组患者疗效比较见表2。两组患者治疗期间不良反应差异均无统计学意义（P＞0.05）。

表2 两组患者疗效比较 例

2.2 两组患者治疗后血清CXCR3、AFP含量变化 见表3。

表3 两组患者治疗前后血清CXCR3、AFP含量比较（±s）

表3 两组患者治疗前后血清CXCR3、AFP含量比较（±s）

与本组治疗前比较，*P＜0.05；与对照组治疗后比较，＃P＜0.05

CXCR3（pg／mL）组别 例数AFP（lgμg／L）治疗前 治疗后研究组 44 315.66±30.85治疗前 治疗后167.92±22.18*＃4.87±0.32 1.53±0.12*＃对照组 44 318.98±20.18 231.99±34.82*4.91±0.22 2.78±0.22*

2.3 两组患者治疗前后血miR-103相对表达水平变化 见表4、插页图1。

表4 两组患者治疗前后血miR-103相对表达水平比较

2.4 两组患者治疗前后免疫指标变化 见表5。

表5 两组患者治疗前后免疫指标比较（%，±s）

表5 两组患者治疗前后免疫指标比较（%，±s）

与本组治疗前比较，*P＜0.05；与对照组治疗后比较，＃P＜0.05

组别 例数 CD＋4 CD＋8治疗前 治疗后研究组 44 33.20±2.48治疗前 治疗后40.20±3.19*＃32.98±2.55 25.03±2.55*＃对照组 44 33.77±3.13 37.50±2.59*32.87±3.14 28.44±3.19*

3 讨论

基础研究表明，肿瘤的增殖、转移与细胞的凋亡失衡有着密切联系，而当前针对肿瘤的分子靶向药物多需要诱导肿瘤细胞的凋亡［9］。索拉非尼能够抑制RAF／MEK／ERK信号传导通路，也能阻断肿瘤新生血管的形成，从而抑制肿瘤细胞的生长［10］。中医认为脏腑气血虚亏，脾虚湿聚，六淫邪毒入侵等可使气、血、湿、热、瘀、毒互结成肝癌，其主要以气血虚亏为本，气血湿热瘀毒互结为标，治疗上以标本兼治、扶正祛邪为原则［11，12］。治本之法常以健脾益气、养血柔肝、滋补阴液等法［13］。现代研究显示中医药治疗恶性肿瘤可直接损伤癌细胞的DNA、抑制肿瘤新生血管生长、诱导细胞凋亡，也可增强机体的免疫功能［14］。本研究中索拉非尼治疗术后肝癌可治标，但其常有腹胀、纳差、恶心、乏力呕吐等脾气虚等表现，参芪扶正注射液中党参和黄芪皆有补中益气、健脾和胃之功效，治本的同时降低西医治疗的毒副作用［15］。而本研究显示治疗后研究组的总有效率显著高于对照组，说明参芪扶正注射液的应用能提高疗效。

机体维持正常的免疫功能状态赖于免疫细胞间互相制约和互相协作，产生相应的免疫应答，更好地对异物抗原进行清除［16］。通常CD＋4、CD＋8间的比例恒定有利于保持宿主细胞的免疫功能，而异常表达过可引起免疫紊乱［17］。本研究表明参芪扶正注射液的应用能提高机体的免疫功能。中药能够通过增强巨噬细胞、NK细胞吞噬活性与杀伤活性，提高机体的天然免疫能力［18］。参芪扶正注射液还能通过刺激树突状细胞及共刺激分子，激活T淋巴细胞的增殖活化，改善恶性肿瘤导致的免疫抑制，从而在一定程度上抑制肿瘤的进展［19］。

miRNA在细胞发育、细胞增殖、细胞凋亡、脂类代谢、激素分泌及肿瘤发生等多种生理和病理过程中发挥重要作用［20］。miR-103定位于大约距染色体5q32 18 000 bp处，最初在鼠体内被检测出。miR-103在小鼠肝脏（发生肝癌）中的表达水平显著上升，特别是出现癌转移的转基因小鼠，miR-103上调水平更显著［21］。索拉非尼作为靶向药物，虽然已经过临床研究得到证实和认可，但是部分肝癌患者对接受索拉非尼治疗初始即无效，部分患者则在服用一段时间后出现耐药性［22］。本研究表明参芪扶正注射液的应用能降低血miR-103相对表达水平。从机制上分析，黄芪有提高T细胞免疫功能、提高红细胞免疫功能、增加NK细胞活性等作用，抑制肝癌细胞的生长，减轻其对机体免疫的抑制，提高机体的抗肿瘤免疫功能，从而能抑制miR-103的表达［23］。

肝癌的病理过程往往伴随着微小血管增生和炎性细胞的浸润，CXCL3属于多种氨基酸组成的小分子多肽类型的趋化因子，有利于肿瘤恶性生长和转移，可促进淋巴管新生，并引发血管新生，参与局部炎症反应［24，25］。CXCR3的配体趋化因子能诱导淋巴细胞趋化，能吸引趋化表达CXCR3配体的细胞游走，促使肿瘤细胞紧密黏附于淋巴管内皮细胞，从而促使肿瘤细胞迁移［26，27］。本研究表明参芪扶正注射液的应用能降低机体血清CXCR3、AFP含量。从机制上分析，参芪扶正注射液具有抑制肿瘤生长、提高机体免疫功能的作用；也具有调节荷瘤机体，包括其排毒、抗炎和抗感染等诸多功能，减少血栓对瘤细胞的保护，利于瘤细胞的消除，从而抑制CXCR3、AFP的表达［28，29］。不过本研究也存在一定的不足，研究的病例数相对比较少，且研究的机制研究不够明确，参芪扶正注射液不同剂量对肝癌患者的治疗效果及对肝脏代谢的影响等存在疑问，将在下一步进行深入分析。