银杏叶质量标准的对比分析

周云鸿 王军

摘 要 对比分析了《中国药典》2015年版、《美国药典》第41版、《欧洲药典》第9.0版中银杏叶质量标准的异同，其中上海上药杏灵科技药业股份有限公司所执行的企业标准总黄酮醇苷≥0.80%，萜类内酯≥0.40%，限度标准最为严格；而USP41在定性鉴别项下检查项目最为详细，采用了高效薄层色谱法（HPTLC）。上药杏灵针对银杏叶所制定执行的质量标准大部分项目处于较高水平，为行业良性发展和临床安全用药提供了保障。

关键词 银杏叶 质量标准 总黄酮醇苷 萜类内酯

中图分类号：R286； R921 文献标志码：C 文章编号：1006-1533（2020）15-0109-06

Contrastive analysis of quality standards of ginkgo leaves

ZHOU Yunhong1*， WANG Jun2**（1. Shanghai TCM Co.， Ltd.， Shanghai 200082， China； 2. SPH Xingling Sci. & Tech. Pharmaceutical Co.， Ltd.， Shanghai 201703， China）

ABSTRACT The similarities and differences between Xinglings corporate standard and the Chinese Pharmacopoeia， the United States Pharmacopoeia and the European Pharmacopoeia were analyzed. The results showed that the corporate standard for the total flavonol glycosides （≥0.80% ） and terpenoids （≥0.40%） implemented by Xingling was the strictest in limit criteria and USP41 had the most detailed inspection items under qualitative identification， using high-performance thin-layer chromatography（HPTLC）. Most of the effective ingredient content quality standards formulated and implemented by Xingling for Ginkgo biloba were at a high level， which can provide a guarantee for the benign development of the industry and the clinical safety of drug use.

KEY WORDS Ginkgo biloba； quality standards； total flavonol glycosides； terpenoids

銀杏科植物银杏（Ginkgo biloba L.）原产于中国，其药用成分主要存在于叶、种仁和外种皮[1]。银杏叶具有抗氧化、清除体内自由基、选择性抵抗血小板活化因子、降血脂、改善血液循环、保护肝脏、提高免疫力、抗炎、抗病毒、抗肿瘤、抗抑郁及抗衰老等作用[1-3]，临床上广泛应用于神经退行性疾病、动脉粥样硬化、哮喘、非酒精性脂肪肝、镇痛、糖尿病并发症[4-6]等疾病的治疗和对老年痴呆等疾病的预防[7]。

目前针对银杏的研究主要集中在银杏叶及其制剂的开发和应用方面，《中华人民共和国药典》2015年版（以下简称ChP2015）[8]、《美国药典》第41版（以下简称USP41）[9]及《欧洲药典》第9.0版（以下简称EP9.0）[10]均收录有银杏叶及其制剂的相关质量标准。已有文献报道，将各国药典中银杏叶提取物的质量标准、提取物中银杏酸限度等方面进行对比[11-13]，却鲜有对银杏叶质量标准的对比。本文将各国药典中银杏叶质量标准进行对比分析，同时结合上海上药杏灵科技股份有限公司（以下简称“上药杏灵”）企业标准，探讨各标准之间存在的异同，为质量标准的规范化、国际化提供依据和参考，避免“银杏叶事件”的重演。

1 鉴别项的异同

各标准在鉴别项下均对银杏叶性状进行了描述。其中USP41最为详细， ChP2015较为简练，上药杏灵企业标准与ChP2015保持一致。总体而言，各标准在性状描述上传达的信息没有较大差异。

1）显微鉴别 ChP2015未对银杏叶作规定，但USP41与EP9.0有相应要求，且USP41对粉末鉴定和叶的组织切片鉴别进行了详细介绍，要求更加严格。由于绝大部分银杏叶在中国市场上是以叶子的形式进行流通，并且银杏叶又是其科属种目下唯一品种，不存在难以区分的伪品，故显微鉴别的必要性不大；而在欧美市场上，大量的银杏叶药材是以粉末的形式进行交易[14]，故设置显微鉴别项具有一定必要性。

2）薄层色谱鉴别 USP41采用高效薄层色谱法（HPTLC）对银杏叶中黄酮类成分和萜类内酯进行鉴别。普通薄层色谱法（TLC）存在展开时间长、效率低、分离度差等问题；高效液相色谱法（HPLC）则存在物质成本、时间成本高等问题；而HPTLC因其制备薄层板所采用的微粒粒度分布较窄，可以大幅提高灵敏度和分辨率[15]，同时操作又较为便捷快速，在美国药典中是定性鉴别的常用方法。ChP2015采用银杏叶对照药材进行鉴别，同时通过萜类内酯对照品对其进行鉴别；USP41通过黄酮和萜类内酯对照品分别对银杏叶进行鉴别；EP9.0则只对黄酮进行鉴别。各标准相比，欧美药典因其收载的天然药物较少，对照药材获取渠道更少，故大多采用对照品单体进行鉴别，而且USP41通过HPTLC法对黄酮和萜类内酯两类物质同时进行规定，更为严格。根据我国国情，采用对照药材来进行鉴别相比采用对照品而言，成本更低、更加省时，且同样能达到定性鉴别的效果。

2 含量测定项的异同

2.1 总黄酮醇苷的对比分析

1）色谱条件 上药杏灵与各国药典均采用HPLC法，以甲醇-水-磷酸系统作为流动相，等度或梯度洗脱，检测波长为360 nm或370 nm。条件上没有明显的差异，对检测结果的影响较小。

2）对照品溶液 上药杏灵与ChP2015以甲醇配制槲皮素、山奈素、异鼠李素的混合对照品溶液；USP41要求分别配制3种对照品溶液，时间、物质成本相对较高；EP9.0采用槲皮素作为单一对照品进行定量。

3）供试品溶液 各国标准均先利用盐酸水解黄酮醇苷，再对苷元进行测定。区别在于：上药杏灵与ChP2015均采用索氏提取，三氯甲烷除杂后再用甲醇进行提取，制备步骤繁琐，时间较长，且三氯甲烷毒性较强；USP41仅采用乙醇-盐酸-水溶液水浴回流提取，较为简便；EP9.0要求先用丙酮提取，提取液浓缩除去丙酮后再加甲醇、盐酸后离心，取上清液水浴，较为复杂。

4）计算方法 上药杏灵及ChP2015均为一次进样，利用校正因子分别计算3种成分含量后相加，简便易行； USP41则对3种成分逐一測定，外标法计算相加，得到总黄酮醇苷含量，相对复杂；EP9.0以槲皮素为单一对照，以 3种成分的峰面积总和来计算，相对准确性较差。

5）限度要求 上药杏灵对银杏叶中总黄酮醇苷的含量规定为不得少于0.8%；各国药典对总黄酮醇苷含量均规定了下限，其中以ChP2015最低。对比发现，企业标准高于各国药典标准。

总体而言，总黄酮醇苷项下，各标准在对照品溶液配制、样品处理方法、计算方式等方面均稍有差异，但以上药杏灵所执行的测定计算标准方法最为简便，限度要求最为严格。

2.2 萜类内酯的对比分析

1）色谱条件 各标准均采用蒸发光散射检测器进行检测，但流动相稍有差异：上药杏灵与ChP2015采用甲醇-四氢呋喃-水系统等度洗脱，USP41则采用甲醇-水梯度洗脱。

2）对照品溶液 USP41以甲醇-水（1∶1）为稀释液，同时配制4种内酯成分的不同浓度对照品溶液各5份，即一次检测需要配制至少20份对照品溶液，较为繁琐复杂，且物质成本高；其余二者只需配制4种成分的混合对照品溶液，大为省时省力。

3）供试品溶液 USP41采用甲醇水溶液对样品多次涡旋振荡、水浴加热后离心，加入缓冲盐溶液，上硅藻土柱，乙酸乙酯洗脱，步骤繁杂耗时；其余二者通过石油醚除杂，甲醇提取后上硅藻土柱，甲醇洗脱，较为简便。

4）计算方法 各标准均采用蒸发光散射检测器，其中USP41利用对照品峰面积的对数值与成分浓度的对数值存在线性关系的特点，通过最小二乘法建立标准曲线，分别计算4种成分含量后相加；上药杏灵与ChP2015通过外标两点对数方程计算4种成分的含量，极大程度上减小了工作量。

5）限度要求 参与对比的各标准以USP41要求最低，仅规定萜类内酯含量不得少于0.1%；ChP2015较前者提升了2.5倍；上药杏灵执行标准为不得少于0.40%

EP9.0未对银杏叶中萜类内酯的含量进行规定。

3 其他项的异同

各标准在杂质、水分、总灰分等其他项中的要求基本一致，但其中USP41和EP9.0对杂质规定要求茎的部分不得超过3%和5%；ChP2015规定杂质不得超过2.0%，总灰分不得超过11%，并在此基础上，增加酸不溶性灰分不得超过2%，以及浸出物不得少于25%的要求。USP41还对农药残留和微生物限度做了规定，是各标准中要求最为严格的，要求细菌数不得过105 cfu/g，霉菌和酵母菌数不得过103 cfu/g，革兰阴性菌不得过103 cfu/g，不得检出沙门氏菌、大肠埃希菌和金黄色葡萄球菌。USP41规定微生物的原因可能与美国部分产品将银杏叶粉碎后直接口服有关。此外，只有上药杏灵企业标准对黄酮苷元的峰面积比进行了规定。针对银杏叶中的重金属含量，目前各国药典均未做详细规定。ChP2015仅针对某些特殊中药材品种中的重金属、农药残留等作了含量检查的限定，但其中并不包含银杏叶。根据《中华人民共和国药典》2015年版四部0212药材和饮片检定通则、2341农药残留量测定法修订草案的公示，将重金属、农药残留列入药材和饮片检定通则：要求药材及饮片（植物类）铅、镉、砷、汞、铜分别不得超过5、1、2、0.2、20 mg/kg；药材及饮片（植物类）禁用农药种类升级成33种。虽然目前《中国药典》2020年版尚未正式发布实施，但基于现有公开资料显示，上述变更极有可能正式纳入修订内容。从中可以明显看到，国家更加严格地把控中药材质量的趋势以及进一步提升质量标准的决心。

一直以来，上药杏灵除了在有效成分含量的控制上，设定了高于国家乃至国际标准之外，在重金属、农药残留方面，也是严格按照国家标准进行质量控制。企业所用银杏叶各项禁用农药均未检出；各重金属及有害元素均低于《中华人民共和国药典》2015年版四部0212药材和饮片检定通则修订草案所规定的限度。

4 讨论

综上所述，上药杏灵企业标准在检查项目、检查方法等方面与ChP2015一致，但在限度要求上普遍高于各国药典：企业标准总黄酮醇苷要求≥0.80%，萜类内酯要求≥0.40%，项目设置的限度水平已经达到欧美药典的数倍。

总体而言，各参比对象中以USP41所规定的检查项最为详细，但是以上药杏灵所执行的限度標准最为严格。从这点上看，上药杏灵作为以银杏酮酯系列产品为主打的中成药企业，对于自身的的定位较为清晰——在全国乃至世界范围内，争做银杏行业的领军企业。企业从银杏叶源头开始把控，设置行业高标准，既保证了自身产品的质量，又促进了行业的良性发展。当然，不可否认国内标准与欧美药典标准在某些方面（如重金属、农药残留、微生物的检测）存在差距。对此，企业应当有的放矢，结合实际情况制定或提升质量标准，不可为了国际化而盲目照搬欧美标准。

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