大豆不溶性膳食纤维促花青素稳态化初探
2020-08-18陈冬霞文连奎
陈冬霞,贺 阳,薛 海,苏 鑫,张 弛,文连奎
(1.吉林农业大学食品科学与工程学院,吉林长春 130118;2.吉林工商学院旅游学院,吉林长春 130507)
0 引言
花青素是一类属类黄酮类水溶性天然色素,广泛存在于自然界中,在山葡萄(Vitis amurensisRupr)中含量尤为丰富。山葡萄花青素具有强抗氧化性,可以保护眼睛和肝脏、预防癌症等[1-2],但其易受光、温度、pH值、氧等因素影响,在提取、加工及产品贮藏过程中易出现褪色或变色,色泽稳定性降低导致其在食品等领域的应用受限[3-4]。因此,花青素稳态化是其作为天然色素广泛应用亟待解决的关键问题。
花青素与多糖、类黄酮、生物碱、氨基酸、有机酸等发生辅色反应可以提高花青素的稳定性[5-6]。有研究表明,膳食纤维能够与多酚类物质相互作用,增加其稳定性[7]。豆渣中膳食纤维含量可达50%~60% (干基),其中大豆不溶性膳食纤维(Soybean Insoluble Dietary Fiber,SIDF) 含量占总膳食纤维的90%[8],目前尚未得到充分利用。
采用SIDF促山葡萄花青素稳态化,为花青素稳态化及山葡萄、SIDF开发利用提供理论依据。
1 材料与方法
1.1 主要材料、试剂及设备
SIDF制备,将SIDF粗粉置于粉碎机中粉碎25 min,过筛,分别制得100,200,300,400,500目的SIDF粉,纯度>90.5%,产品含水量为3.5%;山葡萄花青素参照He Yang等人[9]方法制备,纯化后的花青素提取物质量浓度为 2.5 mg/mL。
浓盐酸(37%)、无水乙醇,北京化工厂提供;磷酸氢二钠,天津市光复科技发展有限公司提供;柠檬酸,Aladdin实业公司提供;pH值3.0磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液(PBS)制备,将浓度为0.2 mol/mL的磷酸氢二钠溶液与浓度为0.1 mol/mL的柠檬酸溶液混合,用蒸馏水定容至1 000 mL备用。
HH-4A型数显恒温水浴锅,常州普天仪器制造有限公司产品;HR2841型多功能粉碎机,德国Sartourius公司产品;SPX-250B-D型振荡培养箱,上海博迅实业有限公司医疗设备厂产品;T6型紫外可见分光光度计,北京普析通用仪器有限责任公司产品。
1.2 方法
将SIDF与花青素按一定比例混合,以pH值3.0的PBS缓冲液定容至30 mL体系,使花青素的质量浓度为0.1 mg/mL,于30℃条件下避光反应一段时间,制备稳态化体系,按试验设计进行SIDF与花青素辅色反应[10];未稳态化处理花青素溶液为对照;对SIDF与花青素稳态化效果进行评价。
1.2.1 单因素试验设计
以 SIDF 质量浓度 (1,2,3,4,5 mg/mL)、SIDF粒径大小 (100,200,300,400,500目)、SIDF与花青素反应时间(10,20,30,40,50 min)为考查因素,每个因素水平试验时,其他因素以中间水平值为定值,以稳态化花青素溶液在λ521nm处的吸光值和辅色率为指标,对其稳态化效果进行评价。
稳态化花青素稀释适当倍数后,在最大吸收波长λ521nm处测定吸光值,并根据文献[11-12],按公式(1) 计算样品的辅色率(Copigmentation rate,C)。
式中:A——稳态化花青素溶液的吸光度;
A0——未稳态化处理花青素溶液的吸光度。
1.2.2 正交试验设计
在单因素试验基础上,选取SIDF质量浓度、SIDF粒径大小、SIDF与花青素反应时间3个因素的最佳水平进行L9(34)正交化试验,以稳态化花青素溶液在λ521nm处的吸光值作为指标评价稳态化效果。
1.3 SIDF与花青素稳态化效果评价
按正交试验组确定的最佳条件制备稳态化体系,未稳态化处理花青素溶液为对照,按下述方法对花青素与SIDF稳态化效果进行评价。
1.3.1 稳态化花青素辅色率评价
按公式(1)计算最佳条件制备的稳态化花青素体系辅色率。
1.3.2 稳态化花青素光、热稳定性评价
参照文献[13-16]并作适当改动,将样品置于日光照射,分别在0,5,10,15,20 d或100℃下加热0,30,60,90,120 min,于λ521nm处测定吸光度,按公式(2) 计算样品溶液色泽的保存率(Retention rate,R)。
式中:At——花青素稳态化与未稳态化在光或热下不同处理时间后的吸光度;
A1——未稳态化处理且未经光或热处理时花青素溶液吸光度。
2 结果与分析
2.1 SIDF与花青素稳态化单因素试验结果分析
2.1.1 SIDF质量浓度对花青素稳定性的影响
SIDF质量浓度对花青素稳定性的影响见图1。
图1 SIDF质量浓度对花青素稳定性的影响
由图1可知,当SIDF质量浓度达到3 mg/mL时,与质量浓度为0.1 mg/mL的花青素反应效果最好,在λ521nm处的吸光值为0.636±0.006,辅色率为24%。当质量浓度逐渐增加,吸光值基本趋于稳定,与He Y等人[6]研究有机酸浓度对花青素辅色的影响具有相同趋势,这可能是SIDF质量浓度过高,使得过量的SIDF颗粒无法与花青素溶液稳定络合。因此,当花青素质量浓度为0.1 mg/mL时,选择SIDF质量浓度为0.2,0.3,0.4 mg/mL,进行正交试验设计。
2.1.2 SIDF粒径大小对花青素稳定性的影响
SIDF粒径大小对花青素稳定性的影响见图2。
图2 SIDF粒径大小对花青素稳定性的影响
由图2可知,当粒径为300目时,吸光值达到一个较高水平,有较好的反应效果,在λ521nm处的吸光值为0.646±0.006,辅色率为26%。由于粒径逐渐变小,颗粒细微化,粉体比表面积增大,进而增大了与溶液的接触面积,对溶液起增效作用;而当目数大于300目时,吸光值趋于平缓,可能是因为SIDF粒径过于细微,出现疏水作用等排斥力,使得一些颗粒无法与花青素稳定络合[17]。因此,选择SIDF粒径大小为200,300,400目,进行正交试验设计。
2.1.3 反应时间对花青素稳定性的影响
花青素与SIDF反应时间对花青素稳定性的影响见图3。
图3 花青素与SIDF反应时间对花青素稳定性的影响
由图3可知,当花青素与SIDF避光反应时间为30 min后,混合溶液的吸光度趋于平缓,此时的吸光值为0.560±0.006,辅色率为22%。同时考虑经济与效果,选择花青素与SIDF反应时间为20,30,40 min,进行正交试验设计。
2.2 SIDF与花青素稳态化正交试验结果分析
花青素与SIDF稳定性正交试验见表1。
由表1可知,SIDF添加量、SIDF粒径大小、反应时间对花青素稳态化后的吸光值均有不同的影响,正交试验中综合吸光值最高的组合是A2B2C2,即吸光度为0.675±0.006。由表2中方差分析SIDF添加量及SIDF粒径大小对花青素稳态化有显著影响(p<0.05),而加热时间对花青素稳态化影响最小;同时极差R可以看出,因素B(SIDF粒径大小) 的R值最大,是主要影响因素,其次是因素A(SIDF添加量),而因素C(反应时间)影响较小。各因素对花青素稳定性影响程度为B>A>C,即SIDF粒径大小>SIDF质量浓度>反应时间。
表1 花青素与SIDF稳定性正交试验
SIDF与花青素稳定性方差分析见表2。
表2 SIDF与花青素稳定性方差分析
由表1中k值可知,极差分析所得最优组合为A2B2C2,即SIDF质量浓度为3 mg/mL,SIDF粒径大小为300目,反应时间为30 min。由于此组合并未出现在正交试验号中,故以A2B2C2进行3次验证试验,测定吸光值为0.681±0.006,比未稳态化处理花青素的吸光值(0.511±0.011) 提高32%。
2.3 SIDF与花青素稳态化评价结果分析
2.3.1 稳态化花青素辅色率评价结果分析
图4 花青素溶液与加入SIDF花青素溶液辅色率比较
花青素溶液与加入SIDF花青素溶液辅色率比较见图4。由图4可知,SIDF(3 mg/mL,300目) 和花青素于30℃下避光反应30 min,在λ521nm处的吸光值为0.640±0.006,辅色率为25%;未稳态化处理花青素吸光值为0.51±0.011,说明SIDF与花青素辅色效果良好,稳态化作用明显。
2.3.2 稳态化花青素光稳定性评价结果分析
不同放置时间对混合溶液色泽保存率的影响见图5。
图5 不同放置时间对混合溶液色泽保存率的影响
稳态化花青素溶液吸光值高于未稳态化处理花青素溶液,日光20 d后稳态化花青素溶液吸光度为0.355±0.006,未稳态化处理花青素吸光度为0.285±0.011;稳态化花青素溶液色泽保存率均高于未处理花青素溶液,日光20 d后稳态化花青素溶液色泽保存率为69.60%,比未稳态化处理花青素高13.72%。
结果表明,加入SIDF能够提高花青素在日光条件下的颜色稳定,使花青素具有较高的吸光值与保存率。这可能由于SIDF的吸附作用[18-19],使花青素更好地附着在SIDF微粒上,从而提高了花青素的光稳定性。
2.3.3 稳态化花青素热稳定性评价结果分析
不同加热时间对混合溶液色泽保存率的影响见图6。
图6 不同加热时间对混合溶液色泽保存率的影响
稳态化花青素溶液吸光值均高于未稳态化处理花青素溶液,稳态化花青素溶液在100℃下加热120 min后,吸光度为0.341±0.006,未稳态化处理花青素吸光度为0.256±0.011。稳态化花青素溶液在100℃加热120 min后的色泽保存率为66.86%,比未稳态化处理的花青素溶液高16.67%。
结果表明,加入SIDF能够提高花青素在热暴露条件下的颜色稳定性,同时使花青素具有较高的吸光值和保存率。这与曝光稳定性有相似的结果,同样可能由于SIDF的吸附作用[18-19],使花青素更好地附着在SIDF微粒上,从而提高了花青素的稳定性。
3 结论
当SIDF质量浓度为3 mg/mL,粒径大小为300目,反应时间为30 min时,SIDF对花青素的稳态化效果最佳,此时吸光度为0.681±0.006,辅色率为33.26%。经日光20 d处理,其吸光度0.355±0.006,色泽保存率69.6%,比未处理花青素溶液高24.56%和13.72%;经100℃加热120 min,其吸光度0.341±0.006,色泽保存率66.86%,比未处理花青素溶液高33.20%和16.67%。
关于SIDF与花青素互作体系结构和分子交互作用形式仍有待深入研究,且有研究表明花青素可能起到益生元的作用,从而促进结肠健康[20],其代谢物能够促进有益双歧杆菌和乳酸杆菌的生长;膳食纤维能够通过肠道菌群的变化,起到降血糖、降血脂和改善肠胃功能的生理作用[21]。