蛋鸡白血病的诊断

刘勃兴 张志强 史秋梅/河北科技师范学院 河北省预防兽医学重点实验室 071300

1 病料来源

病死澳洲黑鸡，由唐山滦南县某蛋鸡养殖场送样。

2 试验材料

DL2 000 plus DNA Marker，购自中科瑞泰科技有限公司； 2 ×Taq Master Mix，购自康为世纪生物科技有限公司；检测用病毒核酸提取试剂盒，购自北京艾德莱生物科技有限公司。PCR扩增引物合成服务均由上海生工生物公司完成。

3 禽白血病病毒（ALV）的PCR检测

剖检病死鸡，无菌采取病死鸡肝脏、脾脏等组织，用组织匀浆机研磨组织，12000 r离心1 min，取上清提取病毒DNA，提取步骤参照试剂盒说明书进行。以提取的DNA为模板进行PCR检测。ALV通用检测引物为：ALV-F（5 ＇- CGAGAGTGGCTCGCGAGATGG-3 ＇），ALV-R（5 ＇- ACACTACATTTCCCCCTCCCTAT -3 ＇）。PCR目的条带大小2400bp。PCR扩增体系（20μL）为：2×Taq Master Mix 10μL，上、下游引物各 1μL，模 板 1μL，ddH2O 7μL。PCR扩增程序为：95℃预变性10min；94℃变性45秒，55℃退火30秒，72℃延伸90秒，共30个循环；72℃延伸10min。PCR反应结束后用1%琼脂糖凝胶跑胶验证，用凝胶成像系统进行观察。

4 结果

4.1 病死鸡临床及剖检症状

发病鸡为135日龄左右的澳洲黑鸡，产蛋停止。临床剖检，发现其脾脏、肝脏明显肿大，易碎，卵巢糜烂出血。（见图1）

图1 病死鸡剖检结果

4.2 ALV的PCR检测对病死鸡肝脏、脾脏进行ALV的PCR检测，均扩增出约为2400bp条带，与预期的目的片段大小一致。表明病死鸡肝脏、脾脏中均含有ALV（见图2）。

5 结论

图2 ALV的PCR检测

通过对唐山滦南县某蛋鸡养殖场送检的病死进行临床剖检及实验室诊断，确定该养殖场饲养的蛋鸡患有禽白血病，对该地区蛋鸡白血病的防控提供参考。

6 诊断与防治

目前，未发现对禽白血病的有效治疗方法。国内外控制禽白血病的方法为通过对禽白血病的检测，淘汰检测阳性鸡。通过早期的检测淘汰携带禽白血病病毒鸡可减少该病的垂直传播和接触传播的的概率，减少经济损失。

禽白血病的诊断方法大致可分为3类，分别是病毒的分离鉴定、血清学检测方法和分子生物学检测方法。病毒的分离鉴定通过将血浆、血液、肝脏等器官或泄殖腔分泌物等接种于鸡胚或鸡胚成纤维细胞，经培养使病毒增殖，再用PCR、补体结合试验等方法检测，该类方法试验周期长，费用较高，不适合大量检测。血清学检测方法包括中和试验（NT）、酶联免疫吸附试验（ELISA）、间接免疫荧光试验（IFA）、琼脂扩散试验（AGP）等，血清学检测具有特异型强、灵敏度高、耗时较短和可大量检测的优点，但检测可出现假阳性，检测试剂费用高。分子生物学检测方法包括聚合酶链式反应（PCR）、实时荧光定量PCR（RT-PCR）、环介导等温扩增技术（LAMP）。分子生物学检测技术具有特异性灵敏性高、检测时间短、试剂价格低等优点，但该类检测方法对试验要求较高，技术操作复杂。通过上述三类检测方法基本可对禽白血病诊断，对检测出阳性带毒鸡应及时处理，并应定期、多次检测，了解鸡群带病情况。

禽白血病可在鸡群内垂直传播和水平传播，在防控净化时应注意该病的流行病学特征。养殖过程中防止禽白血病在鸡群的垂直传播，做到早诊断早处理，淘汰带毒种鸡、鸡蛋、鸡雏，净化鸡群；防止鸡白血病在鸡群的水平传播，孵育阶段对孵育工具定期消毒，育雏时对鸡舍定期消毒，防止饲料与饮水污染，合理集中处理粪便，加强饲养管理，提高机体免疫力。

至今还没有能有效预防治疗禽白血病的疫苗和药物等，因此，一方面应加快禽白血病的诊断试剂的研制，提高检测的准确性，缩短检测时间，降低检测费用等；另一方面，加快禽白血病预防和治疗药物的研究，攻克禽白血病的预防和治疗的难关，保障我国家禽养殖业的健康发展。