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地黄饮子HPLC指纹图谱研究

2020-08-06郭司群迟晓雪

中国民族民间医药·下半月 2020年5期
关键词:饮子项下甲酸

郭司群 迟晓雪

【摘 要】 目的:建立地黄饮子的高效液相色谱指纹图谱,对其成分进行分析。方法:利用HPLC-DAD方法,梯度洗脱,测定10批自制地黄饮子的指纹图谱,确定其共有峰并进行认定。结果:10批自制地黄饮子得到的色谱指纹图谱有18个共有峰,通过与对照品的保留时间及紫外光谱的比对,确定5号峰为马钱苷。结论:地黄饮子的高效液相紫外指纹图谱特征性、专属性强,可结合含量测定用于全面控制中药制剂地黄饮子的质量。

【关键词】 地黄饮子;高效液相色谱;指纹图谱

【中图分类号】R284.1   【文献标志码】 A    【文章编号】1007-8517(2020)10-0057-04

Abstract:Aim to establish the HPLC-DAD fingerprint of Rehmannia Drink and analyze its components. Methods: HPLC-DAD and gradient elution were used to determine the fingerprints of ten batches of self-made Rehmannia Drink. Result: There were 18 peaks in the chromatogram fingerprint obtained from ten batches of self-made Rehmannia Drink. By comparing with the retention time and UV spectrum of the control, the No.5 peak was identified as loganin. Conclusion: the HPLC-DAD fingerprint of Rehmannia Drink was characteristic and specific, which can be used to control the quality of Rehmannia Drink.

Keywords:Rehmannia Drink;HPLC-DAD;Fingerprint

地黄饮子出自《黄帝素问宣明论方》,主治瘖痱证,症见舌强不能言,足废不能用,口干不欲饮,苔黄腻,脉沉、细弱。地黄饮子是传统的经典方剂,该方临床应用广泛,多用于治疗阿尔茨海默病、糖尿病、心血管疾病及中风等一系列疾病[1],应用十分广泛。地黄饮子由熟地黄、山茱萸、五味子、巴戟天、麦冬、薄荷、石菖蒲、石斛等15味药材组成。目前地黄饮子主要集中在动物AD(阿尔茨海默病)模型的药效学研究[2]和血中移行成分研究的血清药物化学方面[3],而体外成分的质量控制研究较少。由于复方制剂组方药材较多成分复杂,其药效不仅仅取决于某个成分,因此本实验立足于对地黄饮子的指纹图谱进行研究,找出共有成分,为其更加准确全面的进行质量控制提供理论依据。

1 仪器与试药

Wasters600-996 高效液相色谱仪(二级管阵列检测器);TGL-16G-C高速冷冻离心机(上海安亭科学仪器厂);H66MC型超声震荡仪(昆山市超声仪器有限公司);熟地黄、山茱萸、五味子、巴戟天、麦冬、薄荷、石菖蒲、石斛、远志、附子、肉苁蓉、茯苓、肉桂、大枣、姜(购于哈尔滨三棵树药材市场,经黑龙江中医药大学谢宁教授鉴定为正品);自制10批地黄饮子(按生产日期编制批次);乙腈、甲醇、甲酸(色谱纯,美国迪马公司);甲酸胺(分析纯,天津科密欧试剂有限公司);马钱苷对照品(批号:111640-201707 ,中国食品药品检定研究院)。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱:Shim-pack XR-ODSⅡ2.0 mmid×75 mm(SHIMADZU);流动相:采用乙腈(A)-0.1%甲酸+10 mmoL·L-1甲酸胺(B)体系,梯度洗脱程序为乙腈浓度梯度5.0%(0 min),5.0%~50%(0~10 min),50%~80%(10~15 min),80%~95%(15~17 min)。柱温:30℃;流量:0.3 mL-1;检测波长:254 nm;进样量:10 μL。

2.2 溶液的制备

2.2.1 对照品溶液 精密稱取马钱苷对照品10 mg,分别置于50 mL容量瓶中,加甲醇溶解并稀释至刻度摇匀即得对照品溶液。

2.2.2 供试品溶液 取地黄饮子组成15味药材各15 g,混匀粉碎,粉末放于烘箱中烘至恒重,取地黄饮子粉末1 g或单味药材粉末66 mg,置于10 mL容量瓶中,加甲醇至刻度定容,浸泡20 min后超声30 min,上清液3000 r ·min-1离心15 min,过0.45 μm滤膜,取续滤液作为样品溶液。

2.3 精密度试验 取同一批地黄饮子粉末,按2.2.2项下供试品制备方法制备样品溶液,连续进样5次,按2.1项下色谱条件测定。结果表明,共有峰的保留时间RSD(%)小于1%,峰面积的RSD(%)小于1%,符合指纹图谱要求。

2.4 重复性试验 取自制5批地黄饮子粉末,按2.2.2项下供试品制备方法制备样品溶液,平行制备5份供试品溶液,按2.1项下色谱条件进行测定,结果各共有峰峰面积的RSD(%)小于1%,保留时间的RSD小于1%,表明方法重现性良好,符合指纹图谱的要求。

2.5 稳定性试验 取上述地黄饮子粉末,按2.2.2项下供试品制备方法制备样品溶液,按2.1项下色谱条件分别在0、4、8、16、24 h进行测定。结果表明,各共有峰的保留时间和峰面积的RSD(%)均小于1%,表明样品在24 h内稳定性良好。

3 地黄饮子指纹图谱的建立

取10批自制地黄饮子粉末,按2.2.2项下供试品制备方法制备样品溶液,按2.1项下色谱条件进行测定,采集指纹图谱(见图-1),以马钱苷峰作为参照峰(S峰),共选取标定了18个共有峰(共有峰总面积占总峰面积的 70%以上)(见图2)。计算各共有峰峰面积与参照峰峰面积的比值(相对峰面积),并使用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2004A 版)》,对10 批地黄饮子指纹图谱进行相似度评价,设置样品参照谱,采用平均数法生成对照指纹图谱,手动多点校正,不同批次的相似度在0.889~0.979之间。见表1。

4 主要色谱峰的鉴定

按与样品相同的色谱条件分析得到马钱苷对照品的HPLC色谱图。采用保留时间对照法,对样品中5号成分进行定性分析,采用HPLC-DAD紫外检测技术,将所得图谱的形状、吸收带位置及相对强度与马钱苷对照品紫外光谱图进行比较。发现5号峰保留时间和紫外光谱图均与马钱苷相同(见图3、图4),所以确定5号成分为马钱苷。

5 讨论

本实验考察有机相:甲醇、乙腈和水相:水、磷酸水、0.1%甲酸+10 mmoL·L-1甲酸胺体系,实验结果表明乙腈-0.1%甲酸+10mmoL·L-1甲酸胺体系所得色谱图中色谱峰较多且分离度较好,故选用此体系。采用二极管阵列检测器,考察220 nm、240 nm、254 nm、280 nm、300 nm和330 nm处的图谱特征,当波长为254 nm时,成分较多且基线平滑,最终确定波长为254 nm。

地黄饮子具有滋肾阴、补肾阳、开窍化痰的功效,多用于脑血栓、脑血管意外、中风、泛发性神经皮炎、老年病等多种脑部疾病的治疗。山茱萸具有补益肝肾的功效,与地黄饮子滋肾阴、补肾阳之功效相吻合。而马钱苷属环烯醚萜苷类,是山茱萸中的主要药效成分之一,对神经系统具有镇静、抗惊厥的作用,对非特异性免疫功能也有增强作用,能促进巨噬细胞吞噬功能,延缓衰老[4],这与地黄饮子用于脑部疾病的功用相吻合。对于其他17种共有成分同样可依据上述的保留时间,紫外图谱对照法,进行进一步的定性分析研究,从而为地黄饮子体外质量控制研究提供更加全面的依據。参考文献

[1]张喜武,刘美欣,谢宁,等.地黄饮子现代研究进展[J].中医药信息,2017,34(5):124-128.

[2]于淼,谢宁,关慧波,等.地黄饮子对AD模型大鼠脑内Aβ生成的干预机制[J].中华中医药杂志,2016(6):2281-2284.

[3]郭司群,朱魁元,谢宁,等.地黄饮子血清药物化学研究[J].中国实验方剂学杂志,2011,17(8):74-78.

[4]候家玉,方泰惠.中药药理学[M].北京:中国中医药出版社, 2007:253-255.

(收稿日期:2020-02-25 编辑:刘斌)

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