巨噬细胞阳性蛋白-3α、半胱氨酸蛋白酶抑制剂A及前梯度蛋白-2在鼻咽癌患者中的表达及预后判断

金光裕 岳艳

(陕西省核工业二一五医院耳鼻咽喉头颈外科 咸阳 712000；2.陕西中医药大学附属第二医院耳鼻咽喉头颈外科 咸阳 712000)

鼻咽癌是我国发病率较高的耳鼻喉恶性肿瘤之一。虽然放射治疗(简称放疗)是目前未发生远处转移鼻咽癌的重要治疗方式，但是仍有部分发生远处转移的鼻咽癌患者，放疗难以发挥良好的效果[1-2]。评估鼻咽癌患者预后影响因素非常必要。研究发现，巨噬细胞炎性蛋白-3α(macrophage inflammatory protein-3α，MIP-3α)在炎症[3]及肝癌[4]、舌状细胞癌[5]等肿瘤患者体内呈现高表达状态，并且参与多种肿瘤细胞的侵袭、转移过程。半胱氨酸蛋白酶抑制剂(cystatin A)，与肿瘤的发生、发展、浸润、转移密切相关。MIP-3α和cystatin A可用于评估鼻咽癌患者的预后[6]。另外，人前梯度蛋白2(anterior gradient-2，AGR-2)在乳腺癌[7]、卵巢癌[8]、胰腺癌[9]、前列腺癌[10]中均呈现高表达，有研究[11]显示AGR-2在鼻咽癌的转移过程中发挥一定作用。本研究检测MIP-3α、cystatin A及AGR-2在鼻咽癌患者中的表达，分析其评估鼻咽癌预后的价值。

1 资料与方法

1.1 资料 收集2012年1月～2013年1月在我院就诊的90例鼻咽癌患者。所有患者未接受过病理活检，无远处转移征兆，纳入试验后进行活检前未接受放射化学治疗(简称放化疗)。最终病理分期依照我国2008版标准。入组后，所有患者原位肿瘤及相应淋巴结所接受的放疗累积量为68～74 Gy和64～70 Gy，其余部位则为50～56 Gy。Ⅰ～Ⅱ期患者仅接受单纯放疗，Ⅲ～Ⅳa期患者联合放化疗。

1.2 方法 采用免疫组织化学法检测MIP-3α、cystatin A及AGR-2在鼻咽癌组织样本及癌旁组织中的表达。对所有患者进行为期5年的随访，记录患者在随访期内的总生存率(OS)、局部无复发生存率(LRFS)及无远处转移生存率(DMFS)。

1.3 统计学处理 采用SPSS11.0统计软件。患者资料如为连续性变量，则以均数±标准差记录，离散型变量以例数表示；两样本均数的比较采用两样本t检验，率的比较采用卡方检验，生存分析采用Kplan-Merier曲线(K-M曲线)，Cox比例风险模型分析影响鼻咽癌患者预后的相关因素。以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 MIP-3α、cystatin A及AGR-2的表达及与患者临床特征的相关性 鼻咽癌患者癌组织MIP-3α阳性49例(54.4%)，癌旁组织MIP-3α阳性22例(24.4%)，两者差异有统计学意义(χ2=23.320,P<0.001)；癌组织cystatin A阳性59例(65.6%)，癌旁组织cystatin A阳性25例(27.8%)，两者差异有统计学意义(χ2=25.804,P<0.001)；癌组织AGR-2阳性53例(58.9%)，癌旁组织AGR-2阳性28例(31.1%)，两者差异有统计学意义(χ2=14.029,P<0.001)。根据MIP-3α、cystatin A及AGR-2检测结果表达阳性与否分组，结果发现：Ⅲ～Ⅳa期患者的MIP-3α阳性率高于Ⅰ～Ⅱ期患者(P=0.005)；≥45岁鼻咽癌患者cystatin A阳性率高于<45岁患者(P=0.013)；Ⅲ～Ⅳa期患者的AGR-2阳性率高于Ⅰ～Ⅱ期患者(P<0.05)。详见表1。

表1 患者基本信息

2.2 鼻咽癌患者生存分析 采用K-M曲线分析不同表达水平的MIP-3α和cystatin A阳性患者的OS、LRFS和DMFS，结果发现，MIP-3α阳性患者的OS、DMFS差于MIP-3α阴性患者(P<0.05)，但2组间LRFS差异无统计学意义(P>0.05，图1)；cystatin A阳性患者的OS、LRFS、DMFS均差于cystatin A阴性患者(P<0.05，图2)；AGR-2阳性患者的OS、DMFS均差于AGR-2阴性患者(P<0.05)，2组间LRFS差异无统计学意义(P>0.05，图3)。

图1 不同MIP-3α表达患者的OS、LRFS、DMFS 注：A.OS；B.LRFS；C.DMFS。

图2 不同cystatinA表达患者的OS、LRFS、DMFS 注：A.OS；B.LRFS；C.DMFS。

图3 不同AGR-2表达患者的OS、LRFS、DMFS 注：A.OS；B.LRFS；C.DMFS。

2.3 多变量Cox风险比例回归 将年龄、性别、患者分期、MIP-3α及cystatin A作为变量对患者OS、LRFS及DMFS进行Cox风险比回归分析，结果发现：性别对肿瘤患者预后无影响；对OS而言，T3～4期患者、N3及cystatin A阳性患者的风险更高，预后更差(T3～4：HR=3.89；N3：HR=4.26；cystatin A阳性，HR=5.23)；对LRFS而言，T3～4期患者、AGR-2阳性患者的预后差于T1～2期(T3～4：HR=13.76；AGR-2阳性：HR=6.77)；对DMFS而言，年龄≥45岁、N3期以及MIP-3α阳性患者的预后更差(年龄≥45岁，HR=4.01；N3：HR=4.75；MIP-3α阳性，HR=8.69)。详见表2。

表2 多变量Cox风险比例回归

3 讨论

趋化因子是一种由多种细胞分泌的低相对分子质量细胞因子，可以介导细胞的趋化和转移。肿瘤细胞可表达多种趋化因子及趋化因子受体，调控多种细胞的生理活动。MIP-3α是一种T细胞及未成熟树突状细胞的有效诱导物，并且可以招募调节T细胞迁移至鼻咽癌部位从而导致免疫抑制，辅助肿瘤细胞对抗正常机体的防御作用。MIP-3α可以通过吸引内皮细胞、促进血管增生以及影响细胞活性以促进肿瘤细胞增殖及转移。研究发现，MIP-3α表达增加与口腔鳞癌之间存在关系[12]。MIP-3α可通过结合其受体CCR6促进胰腺癌的侵袭。本实验发现，MIP-3α在54.4%的鼻咽癌患者阳性率高于癌旁组织，说明鼻咽癌也存在MIP-3α高表达。通过分析MIP-3α表达与临床结局之间的关系，我们发现高级别鼻咽癌患者存在高水平MIP-3α表达，且MIP-3α表达与患者OS、DMFS之间存在联系。

侵入周围组织并发生转移是肿瘤细胞的重要特性。细胞外基质的降解及渗透是肿瘤细胞转移的重要步骤。特异性蛋白水解酶高表达，可以促进上述过程的发生。特异性蛋白水解酶包括丝氨酸蛋白酶、基质金属蛋白酶、溶酶体半胱氨酸蛋白酶B等，都与肿瘤转移密切相关。组织蛋白酶与cystatin相互作用可导致细胞外基质降解。该过程与肿瘤生长、血管生成、肿瘤侵袭及转移有关。已有研究显示，cystatin A与肿瘤患者更差的预后相关[13]。在本研究中，我们发现cystatin A高表达与鼻咽癌患者更差的OS、LRFS、DMFS相关。

目前，许多研究都发现AGR-2在恶性肿瘤的侵袭、转移中扮演了重要角色。已有项目对AGR-2用于肿瘤诊断及预后判断的效果进行了研究[10,13]，发现AGR-2在肿瘤患者细胞质内呈现高表达。同时有研究[14]表明，AGR-2在鼻咽癌患者呈现高表达，并且与鼻咽癌转移有关。本研究发现，不同分期患者的AGR-2表达水平存在差异，且AGR-2不同表达水平患者的OS及DMFS之间存在差异。在多变量Cox分析中发现，鼻咽癌患者T、N分期与预后密切相关，但MIP-3α、cystatin A以及AGR-2同样也是鼻咽癌患者某些结局指标的有效预测因子。

生物标记物在鼻咽癌的诊断及预后判断中具有较为重要的意义。相比于传统的影像学及病理检查，采用生物标记物作为鼻咽癌诊断或预后的判断指标更为简便可行，更能为患者接受。本研究发现，MIP-3α、cystatin A及AGR-2在鼻咽癌组织中高表达，与肿瘤病理分期密切相关。在此基础上，通过5年随访，分析患者生存情况发现，MIP-3α、cystatin A及AGR-2阳性患者的预后较差，MIP-3α、cystatin A及AGR-2是影响鼻咽癌患者预后的独立危险因素。这些结果提示，在临床上，MIP-3α、cystatin A及AGR-2可能作为生物标志物用于评估鼻咽癌患者生存预后的重要指标。