浒苔粉对凡纳滨对虾生长、免疫及抗应激的影响

2020-08-04席庆凯刘天骥李洪琴韩朋志孙春华

中国饲料 2020年13期

赵敏，席庆凯，刘天骥，李洪琴，韩朋志，孙春华，燕磊 *

（1.山东新希望六和集团有限公司，山东青岛266061；2.四川新希望六和科技创新有限公司，四川成都 610101）

浒苔（Enteromorpha）属绿藻门（Chlorophyta）、石莼目（Ulvales）、石莼科（Ulvaceae），适应能力和自然繁殖能力较强，是一种野生藻类资源的优势种，广泛分布在我国东南沿海（王建伟等，2007）。近年来，由于全球气候变暖及水体富营养化，导致浒苔等海洋绿藻大量增殖，形成“绿潮”，给沿岸生态环境构成极大危害（孙修涛等，2008）。浒苔营养全面，膳食纤维、矿物质及必需氨基酸含量丰富，且含有浒苔多糖、多肽、生物碱、皂苷、多酚、叶绿素等生物活性物质，具有抗氧化、抗菌及提高免疫力等多种生物学功能，是一种极具开发价值的海洋藻类食品及饲料资源（林英庭等，2015）。如何科学合理利用浒苔资源，增加其生态效益和经济效益已成为当前亟待解决的重要任务。目前已有学者围绕食品添加剂（朱兰兰等，2009）、药用（孙文等，2011）、饲料（杨心愿，2018；刘开永，2004）等方向开展相关研究，而在水产饲料中添加适宜比例的浒苔粉，能够促进水产动物生长，提高饲料效率（卢青，2015）。然而目前鲜有关于浒苔粉对凡纳滨对虾作用效果的研究，因此本研究将浒苔粉添加到饲料中饲喂对虾，研究其对凡纳滨对虾生长、免疫及抗应激的影响，以期为浒苔粉在对虾饲料中的应用提供参考。

1 材料与方法

1.1 浒苔粉及饲料配方本试验所用浒苔粉由青岛海大生物集团有限公司提供，其他试验原料由公司内部提供。试验配制2种饲料，在对照组基础上用2%浒苔粉替代米糠粕。试验饲粮组成及营养水平见表1。

1.2 试验动物及饲养管理本试验在新希望饲料研究院即墨特水养殖基地进行，试验对虾选取初始体质量为2.7 g体格壮、活力好、规格整齐、无明显疾病的对虾35000尾，随机分成2个处理，每组5个重复，每个重复3500尾对虾，每个养殖池面积为15 m2。分别投喂以上两种饲料，即对照组、浒苔粉组饲料。试验周期为70 d。

表1 试验饲粮组成及营养水平（干物质基础）%

饲养管理参照刘君华（2017）的研究方法，每日投料 4 次（06:00、10:00、14:00、18:00），每周对投饵量进行调整。水池内配置充氧设施，并定时开启，以保证虾池中溶解氧＞5 mg/L，盐度为31‰自然海水，水温23～32℃，pH 7.5～8.5，氨氮浓度低于1.0 mg/L，亚硝酸盐浓度低于0.01 mg/L。

1.3 样品收集饲养试验结束时，将试验虾禁食24 h，然后计算每个水泥池试验虾的数量并称取总重量，用于计算试验虾存活率（SR）、末重（FBW）、质量增加率（WG）、特定生长率（SGR）和饲料转化率（FE）。生长性能计算公式如下：

质量增加率/%=（W2-W1）×100/W1；

特定生长率/（%/d）=（LnW2-LnW1）/T×100；

饲料转化率/%=F/（W2-W1）；

成活率/%=终末虾尾数/初始虾尾数×100。

式中：T为试验天数；W2为试验结束时各处理虾的平均体质量，g；W1为试验开始时各处理虾的平均体质量，g；F为试验期间所用饲料总重。

试验结束前2 d，用氯化铵配制不同氨氮浓度（2.0、1.7、1.4、1.1、0.8、0.5 mg/L）的水体环境进行预试验，确定该养殖条件下试验虾在36 h对氨氮的半致死浓度。统一配制预试验得到半致死浓度的氨氮水体，每个重复取20尾虾进行12、24、36、48 h的攻毒试验，并测定每个时间点试验虾的死亡率。

试验结束后，每池随机选取6尾试验虾取肝胰脏，并置于-80℃冰箱保存，用于分析胰蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶、酚氧化酶（PO）、超氧化物歧化酶（SOD）活性。

1.4 样品分析将饲料样品烘干（105℃）至恒重，采用凯式定氮法（VELP，UDK142 automatic distillation unit，意大利）测定粗蛋白质含量，索氏抽提法测定脂肪含量（SOX416，Gerhardt，瑞典），失重法测定灰分含量；肝胰脏样品送至南京建成生物科技有限公司测定相关酶活性。

1.5 数据统计采用SPSS 17.0软件对数据结果进行独立样本T检验分析，数据以“平均值±标准差”表示，差异显著水平为0.05。

2 结果

2.1 生长性能和饲料效率浒苔粉对凡纳滨对虾生长性能和饲料效率的影响如表2所示，其中浒苔粉组终末均重、质量增加率、特定生长率均高于对照组，但两个试验组之间无显著性差异（P＞0.05）；浒苔粉组饲料转化率和成活率较对照组提高109.7%和 36.4%（P＜0.05）。

表2 浒苔粉对凡纳滨对虾生长性能和饲料效率的影响

2.2 消化酶活性指标浒苔粉对凡纳滨对虾消化酶活性的影响如表3所示，添加浒苔粉有提高胰蛋白酶活性的趋势（P=0.057）；浒苔粉组脂肪酶和淀粉酶活性较对照组提高47.1%和26.5%（P＜ 0.05）。

表3 浒苔粉对凡纳滨对虾消化酶活性的影响U/mg prot

2.3 免疫酶活性指标浒苔粉对凡纳滨对虾免疫酶活性的影响如表4所示，浒苔粉组超氧化物歧化酶活性较对照组提高31.9%（P＜0.05）；浒苔粉组酚氧化酶活性高于对照组，但两个试验组之间差异不显著（P＞0.05）。

表4 浒苔粉对凡纳滨对虾非特异性免疫酶活性的影响

2.4 氨氮耐受性浒苔粉对凡纳滨对虾氨氮耐受性的影响如表5所示，浒苔粉组12 h死亡率、36 h死亡率及48 h死亡率低于对照组，但各试验组之间无显著性差异（P＞0.05）；浒苔粉组24 h死亡率较对照组降低58.8%（P＜0.05）。

表5 浒苔粉对凡纳滨对虾氨氮耐受性的影响%

3 讨论

3.1 浒苔粉对凡纳滨对虾生长性能及饲料效率的影响浒苔中含有丰富的鲜味氨基酸（徐大伦，2004）、甜菜碱（Li-jun 等，2002）及二甲基-β-丙酸噻亭（DM-SP）（王亮，2012）等对水产动物具有诱食作用的营养物质，在饲料中添加一定量的浒苔粉可以提高水产动物的生长性能及饲料利用率（单俊伟等，2016；李永等，2012）。 Asino 等（2011）研究发现，在饲料中添加浒苔可以显著提高大黄鱼（Larimichthys crocea）的特定生长率，而且大黄鱼的存活率均达到97%以上。闫杰等（2012）研究发现，添加浒苔粉可以显著提高梭鱼（Lizahaematocheila）的特定生长率，降低饲料系数。另有研究表明，在饲料中添加一定量的浒苔粉可以提高大菱鲆（Scophthalmus maximus）的生长性能、存活率及饲料效率（李红艳等，2016；卢青等，2015）。本研究发现，浒苔粉组终末均重、质量增加率及特定生长率均高于对照组，但差异不显著（P＞0.05），而浒苔粉组饲料转化率及成活率均显著高于对照组（P＜0.05），这与王万骞等（2015）的研究结果一致。这可能是浒苔中多种诱食成分能够很好的促进对虾摄食，而且浒苔本身营养成分可以满足对虾的生长需求，从而摄食浒苔粉饲料的对虾生长性能及饲料效率表现较优，这与杨小强等（2000）发现的养殖在生有浒苔等海藻的室外水泥池对虾的生长速度明显要快于养殖在室内水池中的对虾相符合；另外，浒苔对动物生长的促进作用机制也可能是由浒苔内含有的多糖类、脂类、萜类等多种生物活性物质共同作用的结果（Cho，2010）。另外，本研究发现，浒苔粉组对虾胰蛋白酶活性高于对照组，但差异不显著（P＞0.05），而浒苔粉组脂肪酶和淀粉酶活性显著高于对照组（P＜0.05）。这与杜恒裔等（2019）研究发现的饲粮中添加0.2%浒苔多糖可显著提高肉鸡空肠内容物糜蛋白酶、胰蛋白酶和脂肪酶活性一致。

3.2 浒苔粉对凡纳滨对虾免疫及抗应激的影响众所周知，免疫学指标能够反映机体的免疫功能和生理状况，超氧化物歧化酶可反映机体清除多余自由基的能力，是一种重要的抗氧化酶；酚氧化酶活性与机体免疫能力呈正向相关，酚氧化酶活性高，机体抵抗细菌感染的能力强（Palmer等，2010；Mucklow 等，2004）。研究表明，浒苔粉可以提高海参（Apostichopus japonicas）（李猛等，2017）、大菱鲆（Scophthalmus maximus）（单俊等，2016）、花鲈（Lateolabrax japonicus）（高瞻等，2015）等水产动物的免疫能力。本研究发现，浒苔粉组超氧化物歧化酶活性显著高于对照组（P＜0.05），这与秦博等（2015）在海参中的研究结果一致。这可能是因为浒苔粉中的浒苔多糖是一种广谱的非特异性免疫刺激剂，提高了对虾机体免疫能力。对虾高密度养殖环境中，粪便、残饵分解不充分均会导致水体氨氮浓度过高，进而引起虾体内多种酶的活力异常、机体代谢功能失常、免疫力下降、获得氧的能力降低等，从而影响对虾生长，最终诱发对虾死亡（李永，2012）。已有研究表明，脊尾白虾（梁俊平等，2012）、斑节对虾（李永等，2012）、克氏原螯虾（钟君伟等2013）等虾的死亡率都随着氨氮浓度的升高或者中毒时间的延长而逐渐增加。本研究发现，在氨氮应激试验中，浒苔粉组死亡率低于对照组，推测可能是浒苔粉中丰富的浒苔多糖能够有效地清除自由基，增加机体抗菌、抗病毒能力，进而提高了机体免疫力，这与徐大论等（2006）的研究结果一致。