研究GeneXpert检测在结核分支杆菌及其利福平耐药性检测中的应用

黎志刚

广东省佛山市高明区慢性病防治站，广东佛山 528500

结核病是常见慢性传染疾病之一，其主要是因为结核分枝杆菌感染造成的。结核分枝杆菌的耐药性极易对临床治疗效果造成影响，所以，结核分枝杆菌耐药性的检测非常重要[1]。传统主要通过培养方式检测结核分枝杆菌耐药性，该方法不仅耗时长，而且检测期间存在许多不便，无法满足临床需求[2]。在医学技术飞速发展的背景下，基因芯片在检测结核分枝杆菌耐药性中的使用范围越来越广，且可在短时间内检测耐药性[3]。本实验主要针对GeneXpert检测在结核分枝杆菌及其利福平耐药性检测中的应用效果进行分析，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2017年7月～2019年6月本院接收的涂片阳性肺结核患者80例痰液标本，其中男45例，女35例；年龄58～78岁，平均（64.5±2.4）岁；患病时间1～5周，平均（3.65±0.52）周；经本院伦理委员会批准。纳入标准：（1）确诊为肺结核者；（2）签署知情研究同意书；（3）具备正常沟通、表达和理解能力；（4）有低烧、咳嗽、疲乏、咳痰、胸闷气短、食欲降低及胸痛等病症；（5）与《肺结核诊断标准及处理原则》中肺结核诊断标准相符。排除标准：（1）合并精神异常及心理障碍者；（2）存在肝脏、心脏及肾脏器官功能不全者；（3）合并凝血功能障碍者。

1.2 方法

1.2.1 检测仪器与试剂 结核分枝杆菌及利福平耐药核酸扩增检测系统，GeneXpert（AC Voltage；100-240V；50-60Hz），型号：Cepheid，代理 :天津仪美科技有限公司；试剂产地：瑞典赛沛公司，中国代理：赛沛（上海）商贸有限公司，安全柜，振荡器。

1.2.2 GeneXpert检测 （1）标本处理：将试验所需试剂耗材准备好，并将患者姓名、病例好标记在Cartridge反应盒及前处理管上。后在有螺旋盖的前处理管中放置1mL痰标本，然后添加痰标本2倍体积的痰标本处理液，于振荡器上放置前处理管进行涡旋震荡，时间大约30s，一直到无块状痰标本。（2）加样：在室内静置前处理管15min，然后将Cartridge反应盒打开，通过一次性无菌移样管将2mL处理后样品取出，经加样孔缓慢加入至反应盒内部；（3）测试：将GeneXpert监测仪器及电脑电源开关打开，开始进行GeneXpert检测；（4）分析结核分枝杆菌检测结果和耐药结果。

1.2.3 结核分枝杆菌罗氏培养实验 （1）实验准备、标本处理：在室内放置培养管5～10min，将管外壁上的凝集水擦拭，然后将患者姓名、日期及病例好标记在培养基斜面背面。采取无菌前处理管。利用无菌吸管将1～3mL痰标本吸入到前处理管中，根据标本形状添加1～2倍体积4%氢氧化钠溶液，进行30～60s涡旋震荡，开始计时，总计15min，室温静置；（2）接种：将凝固水弃掉，利用无菌管对前处理的痰标本实施吸取操作，接种0.1mL一直到培养基斜面，拧紧管盖，并置于斜面架上，确保斜面水平向上，并放置在37℃孵箱中，24h后，直立培养管，并继续培养。（3）对生长状况密切观察。

1.3 观察指标

准确记录传统罗氏培养结果、GeneXpert检测结果。

1.4 统计学方法

本研究数据应用统计学软件SPSS21.0，计数资料以百分数表示，采用χ2检验；计量资料以（）表示，采用t检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 传统罗氏培养结果与GeneXpert检测结果比较

痰液标本80份检测标本中，74份符合，符合率为92.50%。基因芯片实验未检出标本与传统培养的快速生长菌株相吻合，具有较高的准确率，见表1。

表1 传统罗氏培养结果与GeneXpert检测结果比较

2.2 GeneXpert检测与传统罗氏培养对利福平耐药检测结果比较

74株结核分枝杆菌分离株，通过传统罗氏培养与GeneXpert检测结核分枝杆菌对利福平耐药性，GeneXpert检测5例耐药，传统罗氏培养检测4例，符合率为80.00%。见表2。

表2 GeneXpert检测与传统罗氏培养对利福平耐药检测结果比较

3 讨论

传统结核疾病检查主要采取传统罗氏培养，利用细菌培养试验方法检测结核分枝杆菌。传统罗氏培养方法对结核分枝杆菌检测存在的主要问题是检测时间长，进而降低了临床应用价值[4-6]。基因芯片技术主要用于基因突变检测，其能够对多个基因类型及突变位点准确、快速检测，同时也可以用于结核分枝杆菌检测。

在科学技术飞速发展的背景下，基因芯片在结核分枝杆菌检测中的使用范围越来越广[7-9]。根据本次实验结果分析，液标本80份检测标本中，74份符合，符合率为92.50%。基因芯片实验未检出标本与传统培养的快速生长菌株相吻合，具有较高的准确率；74株结核分枝杆菌分离株，通过传统罗氏培养与GeneXpert检测结核分枝杆菌对利福平的耐药性，GeneXpert检测5例耐药，传统罗氏培养检测4例，符合率为80.00%。由此可见，结核分枝杆菌及其利福平耐药性检测中，GeneXpert检测应用效果明显，且具有较高的诊断符合率，可为疾病临床诊治提供数据参考，以便更好的治疗疾病，确保良好的治疗效果，以便患者及早恢复健康，融入到正常生活中[10-11]。

基因芯片指的是在基片上固定探针，杂交样本核酸，利用探针分子杂交信号强度获得样品分子序列信息及数量[12]。该检测方法可以检测分析大量样品序列，相比于传统低效率检测方法，其有助于检测效率条[13]。特别是在结核分枝杆菌耐药性检测中，时间消耗在3d以下，同时能够对大量样本检测，具有较高的检测准确率，应用前景良好[14]。但是，基因芯片技术同样伴有一定不足，其无法对全部基因突变位点全面检测，从一定程度上影响了耐药检出率，所以，现阶段，依旧无法将传统罗氏培养全部代替，但是，在医学技术及科学技术进一步发展的同时，基因芯片技术不断完善和更新，同时也获得了更加可靠的检出结果[15-16]。

据有关资料显示，基因芯片在结合分枝杆菌诊断中应用效果明显，其可提高诊断准确率，而且能够在短时间内对利福平耐药性准确诊断，发展空间广，所以，临床应加强对该方法的重视。

总而言之，GeneXpert检测在结核分枝杆菌及其利福平耐药性检测中应用效果明显，其不仅可以快速、准确检出疾病，同时也为临床结核疾病的诊治提供了重要数据参考，值得临床进一步推广。