金关片对小鼠高尿酸血症的药效作用研究

史琳莉 杨芳炬 郑焱江 梁 楠 植茂辉

［1.华润三九（雅安）药业有限公司，四川 雅安 625000；2.四川大学，四川 成都 610042；3.成都医学院，四川 成都 610083］

金关片是由雷公藤、续断、山药、细辛、附子（制）、茯苓、桑枝、桂枝、鹿角霜、秦艽、丹参、枸杞子、牛膝、鸡血藤、黄精、淫羊藿、薏苡仁、黄芪共18味中药经加工制成的片剂，具有补益肝肾、祛寒止痛、活血通络的功效，增强肾上腺皮质功能，调整免疫等作用［1］。临床上主要用于治疗类风湿性关节炎、强直性脊柱炎，对痛风所致的关节疼痛、肿胀等症状有显著改善效果［2］。本实验从动物实验角度，通过饲喂小鼠酵母膏建立高尿酸血症模型［3］，观察金关片对该模型的血清中尿酸（UA）、尿素氮（BUN）、肌酐（Scr）的含量影响，对金关片治疗高尿酸血症作用进行药效学评价，为金关片的临床运用提供理论基础和实验依据。

1 材料

1.1 实验动物

健康昆明种小鼠，SPF级，雄性，体质量20～22 g，四川大学实验动物中心提供，合格证号：SCXK（川）2009-09。

1.2 药物与试剂

金关片［华润三九（雅安）药业有限公司，国药准字Z20054153，规格：0.3 g/片］用时研磨成极细粉末溶于0.5%的CMC-Na溶液制成混悬液备用，高、中、低剂量的质量浓度分别为120、60、30 mg/mL。别嘌醇片（江苏方强制药厂，国药准字H20033683）用0.5%CMC-Na配制成质量浓度2 mg/mL药液。酵母粉（成都云鸿科技发展有限公司，进口分装，500 g/瓶）用0.5%CMCNa配制成质量浓度1.5 g/mL溶液。尿酸试剂盒（南京建成生物工程研究所提供）。尿素氮试剂盒（脲酶法）（南京建成生物工程研究所）。肌酐试剂盒（除蛋白法）（南京建成生物工程研究所提供）。TG16G台式高速离心机（湖南凯达科学仪器科学有限公司）。

1.3 统计学处理

应用SPSS20.0统计软件。计量资料以（）表示，采用t检验。P<0.05为差异有统计学意义。

2 方法与结果

2.1 造模给药同时进行组实验

2.1.1 分组与造模［3］小鼠随机分为6组，每组10只，分别为：阴性对照组（5%CMC-Na溶液20 mL/kg）、模型组（酵母膏20 mL/kg）、阳性药对照组（酵母膏+别嘌醇40 mg/kg，相当于1倍临床等效剂量）、金关片高剂量组（酵母膏+金关片2.4 g/kg，相当于4倍临床等效剂量）、中剂量组（酵母膏+金关片1.2 g/kg，相当于2倍临床等效剂量）、低剂量组（酵母膏+金关片0.6 g/kg，相当于1倍临床等效剂量）。除阴性对照组外，各组造模方法参照文献［3］执行。各组每天给予酵母膏30 g/kg灌胃，每天1次，连续7 d，第3日时开始灌胃相应药液，每日1次，连续4 d。

2.1.2 标本采集与检测 于第7日末次给药30 min后，各组动物经眼眶后静脉丛取血，按照试剂盒说明书测定小鼠血清中UA、BUN、Scr的含量。

2.1.3 各组血清中UA、BUN、Scr水平比较 见表1。造模后，与阴性对照组比较，模型组小鼠的UA、BUN、Scr含量均显著升高（P<0.01）；与模型组比较，各给药组均显著降低BUN水平（P<0.05或P<0.01），同时，除金关片低剂量组外，高、中剂量组及阳性药对照组均显著降低UA、Scr水平（P<0.05或P<0.01）；与阳性药对照组比较，金关片各剂量组降低BUN水平无明显差异，高剂量组降低UA水平亦无明显差异，但高剂量组降低Scr水平较阳性药对照组显著（P<0.05）；金关片各剂量组间比较，高剂量组降低UA水平较中、低剂量组显著（P<0.05），高、中剂量组降低Scr水平较低剂量组显著（P<0.05），其余各组指标无明显差异（P>0.05）。说明金关片对高尿酸血症形成过程中BUN水平升高有明显的降低作用，并对高尿酸模型小鼠诱发的Scr、UA升高也有明显降低作用，尤其是金关片高、中剂量效果更为显著。

表1 各组血清中UA、BUN、Scr水平比较（±s）

表1 各组血清中UA、BUN、Scr水平比较（±s）

与阴性对照组比较，◆◆P<0.01；与模型组比较，∗P<0.05，∗∗P<0.01；与阳性给药组比较，▲P<0.05，▲▲P<0.01；与金关片高剂量组比较，#P<0.05；与金关片低剂量组比较，●P<0.05。下同

组别阴性对照组模型组阳性药对照组金关片高剂量组金关片中剂量组金关片低剂量组n 10 10 10 10 10 10 UA（μmol/L）168.17±20.93 230.55±34.90◆◆158.26±7.09**175.25±23.85**202.16±29.03*▲▲#214.20±21.26▲▲#BUN（mg/L）189.49±26.08 272.09±52.16◆◆209.82±28.02**204.34±41.74**219.93±41.74**232.26±52.14*Scr（μmol/L）208.54±30.58 276.09±60.86◆◆232.03±21.82**198.80±29.34**▲224.58±31.70**260.68±26.22#

2.2 造模后给药组实验

2.2.1 分组与造模［3］小鼠随机分为6组，每组10只，分别为：阴性对照组（0.5%的CMC-Na溶液20 mL/k）、模型组（酵母膏20 mL/kg）、阳性对照药组（酵母膏＋别嘌醇40 mg/kg，相当于1倍临床等效剂量）、金关片高剂量组（酵母膏＋金关片2.4 g/kg、相当于4倍临床等效用量）、中剂量组（酵母膏＋金关片1.2 g/kg，相当于2倍临床等效用量）、低剂量组（酵母膏＋金关片0.6 g/kg，相当于1倍临床等效用量）。除阴性对照组外，各组造模方法参照文献［3］执行。各组每天给予酵母膏30 g/kg灌胃，每天1次，连续7 d。造模结束后再灌胃相应药液，每日1次，连续3 d。

2.2.2 标本采集与检测 末次给药30 min后，各组动物眼眶后静脉丛取血，按照试剂盒说明书测定小鼠血清中UA、BUN、Scr的含量。

2.2.3 各组血清中UA、BUN、Scr水平比较 见表2。表2数据可见，与阴性对照比较，模型组UA、BUN水平显著升高（P<0.01），但Scr水平无明显差异（P>0.05）；与模型组比较，金关片高剂量组显著降低UA、BUN水平（P<0.05），阳性药对照组亦显著降低UA、BUN（P<0.01）；金关片各剂量组间比较，高剂量组降低UA作用较低剂量组显著（P<0.05），其余各指标无明显差异（P>0.05）。说明金关片在小鼠高尿酸模型形成后给药，也具有降低血清UA水平作用，且高剂量组对高尿酸模型所致的BUN升高也具明显降低作用。

表2 各组血清中UA、BUN、Scr水平比较（±s）

表2 各组血清中UA、BUN、Scr水平比较（±s）

组别阴性对照组模型组阳性药对照组金关片高剂量组金关片中剂量组金关片低剂量组n 10 10 10 10 10 10 UA（μmol/L）168.17±20.93 202.04±21.98◆◆165.89±9.56**177.38±15.15*192.25±16.69 200.04±35.30#BUN（mg/L）189.49±26.08 248.76±29.83◆◆206.21±27.25**215.26±45.23*223.31±40.52 232.28±39.53 Scr（μmol/L）208.54±30.58 222.18±34.71 206.82±57.32 196.51±22.92 204.53±29.48 219.43±38.01

2.3 造模同时给药实验与造模后给药实验结果比较见表3。两组试验对尿酸、尿素氮、肌酐水平的影响比较结果表明：两组均有降低模型小鼠血清UA、BUN、Scr含量作用，但造模同时给药试验组中金关片各剂量降低UA、BUN水平均较造模后再给药组显著（P<0.05或P<0.01）；造模同时给药试验组中，金关片高、中剂量降低UA水平均比造模后再给药组显著（P<0.01），而两试验组低剂量降低Scr水平无明显差异。说明金关片在模型形成过程中给药较模型形成后给药疗效更为显著，提示金关片在高尿酸形成过程中给药具有良好对抗UA升高作用。

表3 各组造模时与造模后给药实验比较（±s）

表3 各组造模时与造模后给药实验比较（±s）

与高剂量组比较，∗P<0.05，∗∗P<0.01；中剂量组间比较，▲▲P<0.01；低剂量组间比较，#P<0.05

组别金关片高剂量组（n=10）金关片中剂量组（n=10）金关片低剂量组（n=10）Scr（μmol/L）77.29±37.64 25.67±16.22**77.29±35.70 17.65±9.35▲▲15.41±34.60 2.75±13.04时间造模时造模后造模时造模后造模时造模后UA（μmol/L）54.76±11.60 24.67±15.45**27.85±7.30 9.80±9.16▲▲15.81±14.56 2.01±17.51#BUN（mg/L）67.72±40.90 33.50±20.35*52.17±21.69 25.45±18.96▲▲39.84±24.14 16.47±17.69#

3 讨 论

人体在正常嘌呤饮食状态下，非同日两次空腹血UA水平无论男性还是女性高于420 μmol/L，即称为高尿酸血症［4］。长期的高尿酸血症，在体内可形成尿酸盐沉积。尿酸盐沉积在不同部位即产生不同的临床表现，当尿酸盐沉积于关节处，引起关节炎症表现时，即称为痛风［5］，临床表现为高尿酸血症、反复发作的痛风性关节炎、痛风石沉积及痛风性肾病等［6］。随着生活水平的提高和饮食结构的改变，高尿酸血症和痛风的发病率呈逐年上升趋势。痛风和高尿酸血症现已成为仅次于糖尿病的第二大代谢性疾病，严重危害人们的身心健康［7］。流行病学调查显示，近20年来美国痛风患病率达3.9%，而欧洲的痛风患病率为3.2%［8］。在我国痛风发病率逐年上升，目前已超过5 000万人，部分沿海城市人群的痛风患病率达1.14%，而高尿酸血症的患病率高达13.19%［9］。高尿酸血症患者中约10%左右会出现临床痛风症，而多数人虽有持续血UA水平增高但无痛风发作，称之为特发性高尿酸血症。但需要注意的是，UA水平越高、高UA持续的时间越长，发生痛风的可能性就越大，可以说高尿酸血症是痛风发生发展最重要的生化基础［10］。近年来越来越多临床研究表明，高尿酸血症与高血压、肾脏疾病、糖尿病、心血管疾病的发生、发展密切相关［11］。因此，早期发现尿酸升高、高尿酸血症，降低尿酸水平是预防与治疗高尿酸血症、痛风，以及高血压、肾脏疾病、糖尿病、心血管等相关疾病的关键。

现代药理研究表明，金关片处方中多味药物具有降低UA的作用。其中山药的甲醇提取物可显著抑制黄嘌呤氧化酶，从而抑制UA的生成［12］；附子可显著降低血清中Scr、UA水平，降低肾UA，由此起到较好的肾脏保护作用［13］；秦艽能降低高尿酸血症模型大鼠的UA值，增加大鼠24 h尿量和UA排泄量［14］；杨彩凤等通过研究中药治疗高尿酸血症组方规律发现，牛膝、薏苡仁组合是治疗高尿酸血症的常见组合及常见核心用药［15］，这个组合也使用在金关片的处方中。金关片治疗高尿酸血症可能与其处方中多种成分协同发挥降低UA生成，增加UA排泄等作用有关。

本试验通过大量酵母膏（20 mL/kg）灌胃建立高尿酸血症模型，1周后，小鼠血清中UA水平显著升高，Scr、BUN水平也显著升高。给予金关片后，UA、BUN、Scr水平均显著降低，且在高尿酸血症形成过程中给药较病症形成后给药疗效更为显著，提示金关片对临床高尿酸血症患者具有良好的治疗并控制症状发展的应用价值。