BRD4、Ki-67、SSBP1水平与胃癌前病变进展的关系及在胃癌早期诊断中的价值

2020-07-28贾文卓

国际检验医学杂志 2020年14期

张竹，许乐△，贾文卓

(北京医院/国家老年医学中心/中国医学科学院老年医学研究院:1.消化科;2.普外科,北京 100730)

胃癌是世界范围内最为常见的一种恶性肿瘤，病死率较高，预后多不良，对人们生命健康造成严重威胁。根据2012年国际机构GLOBOCAN系列癌症研究结果，我国胃癌发病率高居全球第5位，病死率也位居第6位[1]。目前，临床对胃癌的治疗以手术切除为主，研究表明即使采用手术、放化疗等综合治疗措施，胃癌患者的5年生存率仍不足30%[2-4]。多数早期胃癌可利用放大内镜联合窄带成像技术进行诊断，并通过病理组织检查确认。胃癌的早期治疗可使患者5年生存率超过90%，因此，胃癌的早期发现、诊断和治疗至关重要[5-7]。线粒体单链DNA结合蛋白(SSBP1)是线粒体DNA合成的关键分子，与线粒体DNA的复制、修复和转录均密切相关，可影响线粒体的生物功能。研究表明，SSBP1与肝癌、乳腺癌等肿瘤的发生密切相关[8]。核抗原Ki-67(简称Ki-67)的表达水平与消化道肿瘤的形成、分化程度、浸润深度、转移以及预后均密切相关[9]。此外，溴结构域蛋白(BRD4)是近年来发现的一个与细胞恶性转化、肿瘤进展相关的生物标志物。但关于BRD4、Ki-67、SSBP1水平与胃癌前病变的相关性及其在胃癌早期诊断方面的研究较少，在此背景下，本研究旨在探讨BRD4、Ki-67、SSBP1水平与胃癌前病变进展的关系及在胃癌早期诊断中的价值，为临床对胃癌的早期诊断和治疗提供依据。

1 资料与方法

1.1一般资料选择2016年3月至2019年3月在本院普外科接受手术切除或消化内镜黏膜下剥离术(ESD)切除或胃镜活检的267例患者，获得的胃组织包括：(1)早期胃癌组织82例(2016年手术切除)；(2)胃癌前病变组织135例(2016-2019年ESD切除)，并经病理证实为低级别或高级别上皮内瘤变；(3)正常胃黏膜上皮组织50例(2017-2018年胃镜活检获得)，病理检查确诊为非萎缩性胃炎。

1.2纳入与排除标准入选病例具有完整的病史资料和随访资料，所有胃癌患者术前均未经化疗和放疗。

1.3方法所有入组研究对象胃组织标本经4%甲醛固定，常规脱水后石蜡包埋。设置厚度为2 μm连续切片。单克隆抗体Ki-67购自丹麦DAKO公司。免疫组织化学法采用Envision两步法，具体操作步骤按说明书进行，以磷酸盐缓冲液代替一抗作为阴性对照。检测SSBP1的组织切片采用枸橼酸缓冲液高温高压法进行抗原修复，加入兔抗人SSBP1抗体(1︰200)，4 ℃冰箱孵育过夜，次日取出置于37 ℃恒温箱孵育30 min，DAB显色，苏木精复染，以磷酸盐缓冲液代替一抗作为阴性对照。BRD4抗体1︰1 000稀释，4 ℃过夜，之后加入相应二抗，其余步骤同上。

1.4结果评价安排两名有经验的临床病理医师以双盲法进行分析，Ki-67、BRD4阳性物质在细胞核内，每张切片均在光学显微镜下选择10个高倍视野(×400)，每个视野均进行100个细胞计数，计算同类细胞中BRD4阳性细胞的比例。阳性细胞比例≤5%为0分(阴性)，阳性细胞比例在>5%～30%为1分(弱阳性)，阳性细胞比例在>30%～60%为2分(中等阳性)，阳性细胞比例>60%为3分(强阳性)。

2 结果

2.1Ki-67、BRD4和SSBP1在正常胃黏膜、胃癌前病变、早期胃癌组织内的表达情况正常胃黏膜组织中仅有3例Ki-67阳性，胃癌前病变组织中有65例Ki-67阳性，早期胃癌组织中有69例Ki-67阳性。各组织Ki-67阳性率比较，差异有统计学意义(χ2=77.021，P<0.05)。见表1。

表1 Ki-67在正常胃黏膜、胃癌前病变、早期胃癌组织内的表达情况

2.2BRD4在正常胃黏膜、胃癌前病变、早期胃癌组织内的表达情况正常胃黏膜组织中仅有4例BRD4阳性，胃癌前病变组织中有81例BRD4阳性，早期胃癌组织中有73例BRD4阳性。各组织BRD4阳性率比较，差异有统计学意义(χ2=84.481，P<0.05)。见表2、图1。

表2 BRD4在正常胃黏膜、胃癌前病变、早期胃癌组织内的表达情况

图1 BRD4在胃组织的表达情况(×400)

2.3SSBP1在正常胃黏膜、胃癌前病变、早期胃癌组织内的表达情况正常胃黏膜组织中仅有2例SSBP1阳性，胃癌前病变组织中有62例SSBP1阳性，早期胃癌组织中有71例SSBP1阳性。各组织SSBP1阳性率比较，差异有统计学意义(χ2=87.100，P<0.05)。见表3。

表3 SSBP1在正常胃黏膜、胃癌前病变、早期胃癌组织内的表达情况

3 讨论

研究表明，胃癌的发生、发展是多种基因参与、多个步骤的复杂过程，涉及癌基因激活和抑癌基因的失活等。这些基因的表达及蛋白功能的增强或减弱，会使细胞增殖失控，发生侵袭转移，从而推动肿瘤进展。同时，近年来的临床研究发现胃癌的早发现、早治疗可显著提高患者5年生存率，有效改善患者预后。但由于目前缺乏能够反映早期胃癌及癌前病变的指标，临床医师很难在胃癌早期进行诊断。筛选能够反映胃癌病情进展的生物学指标，用于早期胃癌及癌前病变的诊断具有重要意义。因此，本研究选择BRD4、Ki-67及SSBP1 3个与肿瘤进展密切相关的指标作为研究对象，分析其在胃癌早期病变中的诊断价值。

本研究表明，50例正常胃黏膜组织中仅有3例Ki-67阳性，135例胃癌前病变组织中有65例Ki-67阳性，82例早期胃癌组织中有69例Ki-67阳性。各组织Ki-67阳性率差异有统计学意义(P<0.05)。Ki-67是一种重要的核增殖标记物，研究表明其在未分化的精原细胞、上皮基底层细胞、外周血淋巴细胞中均有一定程度的表达，且可影响细胞的增殖，可用于评估肿瘤的良恶性程度、肿瘤分化程度，与肿瘤分化和转移均相关。Ki-67还可作为评估恶性肿瘤治疗效果和预后的分子标志物。Ki-67在胃黏膜肠化生、低级别上皮内瘤变、高级别上皮内瘤变以及肠型胃癌组织中的阳性率及表达水平逐渐升高。但由于缺乏临床跟踪随访研究，Ki-67判断胃癌病情进展的可靠性和准确性还需要进一步的临床研究验证。

本研究中BRD4在正常胃黏膜、胃癌前病变、早期胃癌组织内表达水平的结果表明，各组织BRD4阳性率差异有统计学意义(P<0.05)。BRD4是BET家族的重要成员，有研究表明其与肿瘤的进展相关[10]。YOKOYAMA等[11]利用急性髓性白血病小鼠筛选了已知染色质调节因子的shRNA文库，发现BRD4在急性髓性白血病发病过程中发挥了重要作用，该研究同时使用BRD4 shRNA和BRD4小分子抑制剂进行在体试验，结果表明二者均可发挥一定的抗白血病作用[12]。结合本研究结果，随着病情的进展，胃癌组织BRD4的阳性率更高，因此可认为BRD4参与了胃癌的发病，可用于胃癌的早期预测。

本研究中正常胃黏膜、胃癌前病变、早期胃癌组织SSBP1阳性率差异有统计学意义(P<0.05)。SSBP1定位于线粒体基质和拟核，是一种同源四聚体，其主要功能为参与线粒体DNA的复制和转录。近年来对肿瘤组织的研究发现，肿瘤组织存在大量的mtDNA突变，尤其是DD310区内的突变更丰富，而SSBP1也位于该区域，因此认为SSBP1的突变可能引起mtDNA的突变，当这种突变累积到一定程度即可导致各种肿瘤的发生[13]。