复方山楂煎剂对大鼠实验性冠状动脉粥样硬化性心脏病模型的影响

李月 李想

【摘要】 目的：觀察复方山楂煎剂对大鼠心肌缺血模型的影响。方法：选取2017年10月26日-2018年1月8日90只SD大鼠，随机分为空白对照组、模型对照组、复方山楂煎剂组（低14.85 g/kg、中29.70 g/kg、高59.40 g/kg剂量组），脂必妥对照组。空白对照组10只，其余各组每组16只，雌雄各半。空白对照组喂饲普通饲料，其余各组喂饲高脂饲料造大鼠冠状动脉粥样硬化性心脏病模型，空白对照组、模型对照组灌胃蒸馏水，其余给药组灌胃相应药物，连续造模并预防给药10周。第5周除空白对照组外，其余各组大鼠分别于皮下多点注射异丙肾上腺素1 mg/（kg·d），隔日1次，共3次。给药第10周检测血清低密度脂蛋白（LDL-C）、高密度脂蛋白（HDL-C）以及血清超氧化物歧化酶（SOD）、乳酸脱氢酶（LDH），取心脏用于HE染色及免疫组化染色检测Caspase-3在心肌组织中的表达。结果：复方山楂煎剂显著降低冠状动脉粥样硬化性心脏病模型大鼠血清LDL-C、LDH，显著提高冠状动脉粥样硬化性心脏病模型大鼠血清HDL-C含量及SOD的活性（P<0.05或P<0.01）;复方山楂煎剂可显著降低冠状动脉粥样硬化性心脏病模型大鼠心肌损伤积分平均值（P<0.05或P<0.01）。复方山楂煎剂可显著降低Caspase-3在冠状动脉粥样硬化性心脏病模型大鼠心肌的表达（P<0.05或P<0.01）。结论：复方山楂煎剂可能通过影响脂质代谢、抗氧化能力及Caspase-3的表达产生调节实验性冠状动脉粥样硬化性心脏病模型大鼠心肌损伤的作用。

【关键词】 大鼠 冠状动脉粥样硬化性心脏病 复方山楂煎剂 细胞凋亡

[Abstract] Objective： To observe the effect of Fufang Shanzha Decoction on myocardial ischemia in rats. Method： Ninety SD rats were selected from October 26， 2017 to January 8， 2018， they were randomly divided into normal control group， model control group and Fufang Shanzha Decoction group （lower 14.85 g/kg， middle 29.70 g/kg，

high 59.40 g/kg dose group）， Zhibituo control group. There were 10 rats in normal control groups， each of the other groups had 16 rats， half male and half female. The normal control group was fed with normal diet， and the other groups were fed with high-fat diet to establish a rat model of coronary atherosclerotic heart disease. The normal control group and the model control group were given distilled water， the other groups were given the corresponding drug. Dosing while modeling for 10 weeks. In the 5th week， except for the normal control group， rats in each group were injected with Isoproterenol 1 mg/（kg·d） at multiple times， once every other day for 3 times. At the 10th week of administration， serum low density lipoprotein （LDL-C）， high density lipoprotein （HDL-C）， serum superoxide dismutase （SOD）， lactate dehydrogenase （LDH） were measured. Detection of myocardial damage by HE staining. The expression of Caspase-3 in myocardial tissue was detected by immunohistochemical staining. Result： Fufang Shanzha Decoction significantly reduced serum LDL-C and LDH in rats with coronary atherosclerotic heart disease， and significantly increased serum HDL-C content and SOD activity in rats with coronary atherosclerotic heart disease （P<0.05 or P<0.01）. Fufang Shanzha Decoction can significantly reduce the mean value of myocardial injury in rats with coronary atherosclerotic heart disease （P<0.05 or P<0.01）. Fufang Shanzha Decoction can significantly reduce the expression of Caspase-3 in the myocardium of rats with coronary atherosclerotic heart disease （P<0.05 or P<0.01）. Conclusion： Fufang Shanzha Decoction may regulate myocardial injury in rats with experimental coronary atherosclerotic heart disease by affecting lipid metabolism， antioxidant capacity and expression of Caspase-3.

2.3 复方山楂煎剂对心肌缺血模型心肌组织中Caspase-3表达的影响 空白对照组心肌组织Caspase-3表达灰度值为（198.75±26.58），模型对照组为（126.73±20.36），SJ低剂量组为（157.25±19.65），SJ中剂量组为（161.64±20.48），SJ高剂量组为（168.51±22.39），脂必妥组为（171.54±24.31）。与空白对照组相比，造模后模型对照组心肌组织中Caspase-3表达显著升高（P<0.01）;与模型对照组相比，SJ低剂量组、SJ中剂量组、SJ高剂量组、脂必妥组Caspase-3表达显著降低（P<0.05或P<0.01）。各组大鼠Caspase-3表达情况，见图2。

3 讨论

动脉粥样硬化指动脉内膜有脂质的沉积，平滑肌细胞增生，胶原纤维增多，形成粥糜样坏死病灶[9]。基本病理改变是在动脉内膜面形成斑块，有脂质条纹，血栓形成和斑块内出血等继发病变，血清中LDL-L升高，HDL-C降低，血管内皮细胞功能受损伤，是激发动脉粥样硬化发生的起始环节。SOD是肌体重要的内源性自由基清除剂，通过歧化方式清除超氧化物，它的活性反映机体对抗自由基损伤的抵抗能力，机体的抗氧化能力有利于保护心肌和动脉内膜[10]。乳酸脱氢酶活性增高主要见于心肌梗死，LDH活性的降低就是抗心肌和动脉内膜保护的体现[11]。高脂饮食诱导大鼠发生冠心病性心肌缺血成模率很低，因此本研究中又采用了高脂饮食联合皮下多点注射异丙肾上腺素诱发心肌缺血模型[12]，既可以考察复方山楂煎剂对冠状动脉模型的影响，又可以考察复方山楂煎剂对心肌缺血模型的影响。本研究通过灌胃给予高脂饲料10周造模，引起了大鼠脂质代谢障碍，结果显示模型大鼠血清LDL-C显著升高，HDL-C显著降低，模型组大鼠血清SOD活力显著降低，抗氧化能力减弱。复方山楂煎剂组对血液中LDL-C、LDH含量的上升均有很明顯的抑制作用，同时HDL-C、SOD含量有明显的提高。因此复方山楂煎剂具有调节脂质代谢及抗氧化的作用。

动脉粥样硬化病变易累及大型弹性动脉，如主动脉及冠状动脉，动脉管腔变窄甚至闭塞可造成脏器的缺血性改变。冠状动脉粥样硬化性心脏病血管管径狭窄达75%以上，则可发生心肌梗死[13]。在冠状动脉粥样硬化性心脏病的基础上心肌暂时性缺血会引起的血管发生痉挛，心肌缺氧使酸性代谢产物刺激感觉神经末梢所产生的反射性症状诱发心绞痛[14]。心肌梗死是由于心肌持久缺血、缺氧所引起的心肌细胞凋亡[15]，可引起心肌细胞凋亡的因素有很多，如氧化应激、细胞因子、钙稳态失衡、线粒体功能异常，本研究中高脂饮食可增加心血管系统发生氧化应激风险，皮下多点注射异丙肾上腺素也可因增加心肌耗氧量而引起心肌损伤，因此本研究诱导心肌细胞凋亡的主要途径为氧化应激[16]。Caspases调节多种生物过程，Caspase-2，3，6，7，8，9，10具有促凋亡的作用，它们以级联的方式切割一系列胞内蛋白，最终导致细胞凋亡。Caspase-14参与角化细胞的分化，但不在炎症或细胞凋亡中发挥作用[17]。Caspase-1，4，5，11，12，13具有促炎性的作用，它们可以介导特异性细胞因子的成熟，还参与细胞凋亡。Caspase活化基本有两种机制，即同源活化和异源活化，Caspase-8，10，9诱导凋亡后，起始Caspase通过adaptor被募集到特定的起始活化复合体，形成同源二聚体构象改变，导致同源分子之间的酶切而自身活化，通常Caspase-8，10，2介导死亡受体通路的细胞凋亡，而Caspase-9参与线粒体通路的细胞凋亡。异源活化是由一种Caspase活化另一种caspase是凋亡蛋白酶的酶原被活化的经典途径，包括Caspase-3，6，7。Caspase-3是细胞凋亡过程中最主要的终末剪切酶[18]，也是CTL细胞杀伤机制的重要组成部分。本研究结果表明复方山楂煎剂可显著降低Caspase-3在模型大鼠心肌的表达，并能显著减轻心肌缺血模型大鼠的心肌损伤。

综上所述，复方山楂煎剂可通过调节脂代谢、抗氧化应激、抗凋亡等作用产生对心肌的保护

作用。

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（收稿日期：2019-11-21） （本文编辑：周亚杰）