不同品种青稞中总多酚、总黄酮含量及抗氧化性比较

夏 陈 向卓亚 朱永清 邓俊琳 杨开俊 刘廷辉 陈 建 林长彬 李 可 赵旭珠

(1. 四川省农业科学院农产品加工研究所，四川 成都 610066;2. 四川甘孜州农业科学研究所，四川 康定 626000)

青稞(HordeumvulgareLinnvar. nudum Hook.f.)，禾本科大麦属植物，因籽粒外露，又被称为裸大麦、裸麦和元麦[1]，是中国藏民的主要粮食和酿造青稞酒的主要原料，分布于青海、西藏和四川甘孜州、阿坝州等高寒地区[2]。因籽粒颜色差异青稞被分为黑、紫、蓝、白等类型[3]。研究[4-5]发现，青稞内部营养成分差异与籽粒颜色密切相关，颜色越深其营养价值越高。因富含葡聚糖、多种多酚类化合物及黄酮类化合物，青稞能有效降血脂、降血糖、预防心血管疾病、提高人体免疫力及抗病毒、抗癌等[6]。

徐菲等[7]研究发现青海青稞中蛋白质含量最高，而四川青稞中总淀粉和灰分含量最高。孟胜亚等[8]发现藏青2000和1127号青稞中β-葡聚糖和粗蛋白含量较高。而关于不同地区、不同品种和不同粒色青稞的功能成分及生物活性的研究较少，且多集中于对不同产地青稞总多酚、总黄酮与抗氧化性的描述性统计学分析，尚未有研究将不同产地、品种与粒色青稞中功能成分进行集中比较分析。试验拟通过对西藏拉萨和四川甘孜州的11种青稞进行活性成分分析，探讨不同品种和不同产地青稞中总多酚、总黄酮含量及其抗氧化活性差异，以期为青稞品种的进一步开发研究及品类培育种植提供参考。

1 材料与方法

1.1 原料

选取11种青稞(收获时间为2017年9月)作为试验样品(见表1)，经粉碎、过40目筛，样品粉末密封后于-18 ℃保存备用。

1.2 试剂

福林酚、乙醇、甲醇、盐酸、氯化钾、硝酸铝、氢氧化钠、无水乙醇、亚硝酸钠：分析纯，成都市科龙化工试剂厂；

水溶性维生素E、没食子酸、芦丁(纯度≥98%)：北京索莱宝科技有限公司；

其他试剂均为国产分析纯。

1.3 试验方法

1.3.1 总黄酮含量的测定 参照罗磊等[9]的方法，略作修改。用80%甲醇溶液超声提取青稞中黄酮，向提取液中加入10 μL质量分数为 25%的NaNO2反应6 min，加入10 μL 10% AlCl36H2O反应5 min后，分别加入30 μL 1 mol/L NaOH、100 μL蒸馏水，测定510 nm处吸光值。以芦丁质量浓度为横坐标，吸光值为纵坐标，绘制标准曲线，其线性回归方程为y=5.208x+0.041，R2=0.999,线性范围0～175 μg/mL。

表1 11种青稞信息表

1.3.2 总多酚含量的测定 参照申迎宾等[10]的方法略作修改，提取液中加入20 μL福林酚试剂，混合均匀，放置5 min，加入质量分数为5%的Na2CO3溶液0.16 mL，室温下避光反应60 min，测定765 nm处吸光值。以没食子酸质量浓度为横坐标，吸光值为纵坐标，绘制标准曲线，其线性回归方程为y=0.004x+0.082，R2=0.999，线性范围4.29～275.00 μg/mL。

1.3.3 抗氧化活性分析

(1) ABTS+自由基清除能力：参照Cheng等[11]的方法略作修改。取20 μL青稞消化液，加入20 μL 80%甲醇溶液和160 μL ABTS混合溶液(7 mmol/L ABTS溶液与2.45 mmol/L过硫酸钾)，混匀避光反应6 min，测定734 nm处吸光值。以水溶性VE的质量浓度为横坐标，吸光值为纵坐标，绘制标准曲线，其回归方程y=-0.006x+0.471 4，R2=0.997 1，线性范围0.0～47.5 μg/mL。

(2) DPPH自由基清除能力：参照向卓亚等[12]的方法略作修改。取50 μL待测液，加80 μL 80%甲醇(含1%甲酸)，再加入100 μL 0.2 mmol/L DPPH溶液，混匀，避光反应30 min，测定517 nm处吸光值。以水溶性VE质量浓度为横坐标，吸光值为纵坐标，绘制标准曲线，得回归方程y=0.947 2x-2.95，R2=0.996 0，线性范围5.94～95.00 μg/mL。

1.4 数据处理

采用SPSS 17.0软件进行聚类分析，通过单因素方差分析(ANOVA)和Duncan多重比较方法进行显著性分析，P<0.05表示差异具有显著性，结果用(平均值±标准差)表示(n=3)。

2 结果与分析

2.1 总多酚含量

由表2可知，11种青稞总多酚含量为0.74～1.49 mg/g，变异系数达28.43%，说明青稞基因型的差异对总多酚含量影响较大[13]。其中QB35号青稞总多酚含量为1.49 mg/g，接近刘小娇等[14]测定的最大值(1.2～1.5 mg/g)。西藏青稞X9、X10和X11中总多酚含量显著高于四川青稞，说明产地环境条件是影响青稞籽粒品质和活性成分素含量的首要因素，种植环境的差异影响青稞中多酚类物质的组成及含量[13]，与Abdel-Aal等[15]的结果一致。除S5外，相同产地青稞品种中深色青稞总多酚含量略高于浅色青稞的，四川青稞S1含量为1.04 mg/g，显著高于其余浅色青稞。阎秀峰等[16]发现在低温和干旱条件下，多酚类化合物和黄酮类化合物等植物的次生代谢产物含量均较高。朱勇[17]发现藏青25、藏青320、长黑青稞和肚里黄4种青稞中酚类化合物含量受青稞颜色的影响。Gong等[18]发现有色青稞总多酚含量高于无色青稞的。

2.2 总黄酮含量

由表2可知，11种青稞总黄酮含量为0.09～0.57 mg/g，变异系数高达60.71%，说明青稞基因型的差异对总黄酮含量影响较大。其中青稞QB35号总黄酮含量为0.57 mg/g，接近邢玉晓[19]测定的最大值(0.32～0.58 mg/g)。西藏青稞X9、X10和X11中总黄酮含量显著高于四川青稞，说明环境条件和品种对青稞中总黄酮含量影响显著。

2.3 抗氧化活性比较

由表3可知，DPPH自由基清除能力最高的可达4.18 mg/g，且不同品种青稞DPPH自由基清除能力存在显著差异；而ABTS自由基清除能力差异更明显，但与总多酚和总黄酮结果一致。西藏青稞提取物均表现出较强的ABTS自由基清除能力，且显著高于四川青稞的。

表3 11种青稞的抗氧化活性†

2.4 相关性分析

由表4可知，ABTS自由基清除能力与青稞中总多酚和总黄酮含量呈极显著正相关，说明青稞中多酚类物质和黄酮类物质对其表现出的抗氧化性起着重要的作用，与Zheng等[20]的结论一致。

2.5 聚类分析

由图1可知，11种青稞样品主要分为两大类。其中S1、S2、S3、S4、S5、S6、S7和S8为一类，其产地为四川；X9、X10和X11为一类，其产地为西藏。西藏青稞总多酚、总黄酮含量显著高于四川青稞，说明通过青稞中总多酚、总黄酮含量可以进行产地的大致区分，与总多酚、总黄酮含量结果一致。当进一步缩短类间距时，11种青稞样品主要分为3大类，其中S2、S3、S4、S6和S8为第一类，S5、S7和S1为第二类，X9、X10和X11为第三类。第二类青稞品种均为黑青稞，第一类为白青稞。综上，通过聚类分析能将不同品种青稞的产地进行大致区分，为其品种的进一步开发利用提供依据。

3 结论

结合对青稞主要活性成分研究现状，对11种青稞的总黄酮、总多酚含量和抗氧化活性进行测定分析，发现西藏青稞中总多酚、总黄酮含量显著高于四川青稞的，且与青稞抗氧化性呈极显著正相关；不同品种青稞中总多酚、总黄酮含量存在显著差异，其中西藏QB31、QB35和隆孜青稞中总多酚、总黄酮含量显著高于其他品种的。后续可扩大更多产地及品种数量且对青稞中多酚化合物及其他功能活性进行深入研究。

表4 青稞中总多酚、总黄酮和抗氧化活性的相关性分析†

图1 11种青稞种质的聚类图