高效液相色谱法测定维生素B1硫代硫胺的含量

管绪龙，陈 卉

（江苏巨邦制药有限公司，江苏常州 213300）

维生素B1常见的有硝酸硫胺和盐酸硫胺，是一种重要的维生素。目前国内的生产工艺均以丙烯腈为起始原料合成硫代硫胺，硫代硫胺经过氧化、中和结晶就得到了硝酸硫胺，所以硫代硫胺是维生素B1的一个重要中间体。一般测定硫代硫胺含量使用的是溴酸钾滴定法，原理是溴酸钾与硫代硫胺反应生成溴化钾，稍过量的溴酸钾就与溴化钾反应生成单质溴并使甲基红指示剂褪色。该法中溴酸钾与中间体硫代硫胺中的还原性杂质反应，从而使得结果经常性偏高。为了减少测定偏差，建立了采用高效液相色谱法测定硫代硫胺的含量。

1 仪器和试药

1.1 仪器

美国Agillent 1100型高效液相色谱仪

1.2 试药

甲醇和乙腈均为色谱纯，冰乙酸和1-辛烷磺酸钠为分析纯，硫代硫胺对照品为实验室精制，然后用溴酸钾滴定法标定。

2 方法和结果

2.1 色谱条件

色谱柱：Kromasil C18柱（5μm，4.6mm*250mm）流动相为甲醇∶乙腈∶1%冰乙酸（比例为36∶24∶40）配制的0.005mol/L的1-辛烷磺酸钠溶液，流速为1.0mL/min，检测波长为254nm，进样量为10μL。

2.2 对照品和样品溶液的制备

精密称取硫代硫胺对照品适量，加流动相溶解并配制成浓度约为400μg/mL的溶液。

精密称取样品适量，加流动相溶解并配制成浓度约为400μg/mL的溶液。

2.3 系统适应性

取样品溶液，按照2.1的色谱条件进样，记录色谱图，测量峰面积。硫代硫胺主峰拖尾因子小于2，硫代硫胺主峰与相邻杂质峰的分离度均大于1.5，理论塔板数按照硫代硫胺主峰计算均不低于1 500。

2.4 检测限度

精密称取硫代硫胺对照品适量，加流动相溶解并逐步稀释成一系列浓度的溶液，取10μL进样，当主峰峰高为最大噪音峰高3倍时，进样量即为检测限，本法测定的检测限为0.03μg/mL。

2.5 线性关系考察

精密称取硫代硫胺对照品适量，加流动相溶解并稀释成浓度分别为200μg/mL、300μg/mL、400μg/mL、500μg/mL和600μg/mL的溶液，各取10μL进样测定，记录色谱图，测量主峰面积，以峰面积（y）为纵坐标，进样浓度（x）为横坐标，绘制标准曲线，拟合得到回归方程y=99.467x+213.4，R=0.999 9。在200-600μg/mL，线性良好。

2.6 精密度

取浓度约为400μg/mL的对照品溶液，按照2.1的色谱条件进样，记录图谱，测量峰面积，主成分峰面积的RSD=0.9%（n=6）

表1 精密度试验测定结果

2.7 稳定性

取浓度约为400μg/mL的样品溶液，按照2.1的色谱条件，分别放置0h、2h、4h、6h、8h、12h后进样，记录色谱图，测量主峰面积，计算得到RSD为1.0%（n=6）。表明样品溶液在12h内测定，稳定性良好。

2.8 加样回收率

精密移取已知浓度约为400μg/mL的样品溶液，分别加入同体积浓度约为200μg/mL、400μg/mL、600μg/mL的对照品溶液，每个浓度的溶液均配制3份，按照2.1的色谱条件进样，记录图谱，测量峰面积，用外标法计算硫代硫胺的含量。

表2 加样回收率试验测定结果

2.9 准确性

取3批干燥后的硫代硫胺样品，分别使用本法和溴酸钾滴定法测定含量。

表3 准确性试验测定结果

3 结语

建立了高效液相色谱法测定硫代硫胺的含量，与常规的溴酸钾滴定法相比，能够排除样品中还原性杂质的干扰，使得测定结果更加准确。