奶茶中甜蜜素含量的测定方法探讨
2020-07-24王汉青
王汉青
（南京市溧水区疾病预防控制中心 江苏 南京 211200）
甜蜜素是一种食品添加剂，国家对它制定了严格的限量使用标准[1]，超量使用会对人体肝脏，肾脏造成伤害[2]，尤其是老年人和儿童比较敏感。奶茶是现在都市比较风糜的饮料，尤其受到年轻人的喜爱，市面上品牌众多，同一品牌也有各种不同风味。有些不法商家为改善产品口味，降低产品成本，违规大量添加，损害了消费者的利益。国务院食品安全委员会也对市场的奶茶作了监测任务，我中心为了顺利完成省里布置的任务，用气相色谱法[3,4]建立一种快速检测奶茶中甜蜜素的测定[5，6]方法，满足工作中的检测要求。
1.材料与方法
1.1 仪器
7890B气相色谱仪[附HP-5毛细管柱（30m×0.32mm×0.25mm）、氢火焰离子化检测器(flame ion-ization detector,FID)]：美国安捷伦科技有限公司；G4513A自动进样器：美国安捷伦科技有限公司；Vortex-1涡旋混合器：上海沪析实业有限公司；UP500HE超声波振荡器：南京垒君达超声电子设备有限公司；TDZ5-WS离心机：湖南赫西仪器装备有限公司；MS105DU电子天平：梅特利-托利多；SC-230冷藏冰箱：青岛澳柯玛股份有限公司
1.2 试剂
1.2.1 甜蜜素标准溶液[GBW(E)082260a,浓度为10.0mg/mL]
1.2.2 氯化钠（分析纯）
1.2.3 亚硝酸钠（50g/L）（分析纯）
1.2.4 硫酸（200g/L）（分析纯）
1.2.5 正庚烷（分析纯）
1.2.6 亚铁氰化钾（150g/L）（分析纯）
1.2.7 硫酸锌（300g/L）（分析纯）
1.3 样品及标准液系列的制备及衍生化
1.3.1 样品制备：称取样品3.00～5.00g于50mL离心管中，加30mL水，超声提取20min,加2mL亚铁氰化钾溶液，混匀，再加入2mL硫酸锌溶液，混匀，离心（3000r/min）10min,过滤，用水分次洗涤残渣，收集滤液并定容至50mL，混匀备用。
1.3.2 标液配制：准确移取1.00mg/mL环己基氨基磺酸标准液0.50mL、1.00mL、2.5mL、5.00mL、10.00mL于50mL容量瓶中，加水定容。配成标准溶液系列浓度为：0.01mg/mL、0.02mg/mL、0.05mg/mL、0.10mg/mL、0.20mg/mL。
1.3.3 衍生化：准确移取标准溶液系列点，制备好的样品各10.0mL于50mL带盖离心管中。离心管置试管架上冰浴中5min后，准确加入5.00mL正庚烷，加入2.5mL亚硝酸钠溶液，2.5mL硫酸溶液，盖紧离心管盖，摇匀，在冰浴中放置30min,期间振摇3次～5次；加入2.5克氯化钠，盖上盖后置旋涡混合器上振动1min,离心（3000r/min）10min，放入1～4℃冰箱静置20min后分层备用。
1.3色谱条件
1.3.1 柱温升温程序：初温50℃保持4min，10℃/min升温至90℃保持0.5min，20℃/min升温至200℃保持3min。
1.3.2 进样口：温度230℃；进样量2uL，分流比1：1。
1.3.3 检测器：氢火焰离子化检测器（FID），温度260℃。
1.3.4 载气：高纯氮气，流量3mL/min。
1.3.5 氢气：30mL/min；空气300mL/min。
2.结果与分析
2.1 标准曲线绘制
分别吸取2μL经衍生化处理的标准系列各浓度溶液上清液，注入气相色谱仪中，可测得不同浓度被测物的响应值峰面积，以浓度为横坐标，以环己醇亚硝酸酯峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，其回规方程为y=10813.04x+3.325 R=0.99991，见图1。
2.2 样品溶液测定
在完全相同的条件下进样2μL经衍生化处理的试样待测液上清液，保留时间定性，根据测得峰面积，由标准曲线得到样液中的组分浓度。试样上清液响应值若超出线性范围，应用正庚烷稀释后再进。平行测定次数不少于两次。
2.3 加标实验
准确称取奶茶样品5.00g于50mL离心管中，准确添加环己基氨基磺酸标准使用液（1.00mg/mL）各1.0mL、2.5mL，得到两种浓度分别为0.200g/kg、0.500g/kg，各加标浓度平行6份，同时测定样品本底,结果表。
表 样品加标回收结果
2.4 回收率和精密度
由表1中可看出在样品中加入两个浓度水平的加标样，每个水平平行测定6次，计算出平均回收率96.5%～102.9%，RSD分别为1.92%和1.33%，符合实验室质量控制要求。
3.结论
通过多次调整改进色谱条件，即色谱柱温的升温程序，进样量，分流比，载气流速等，使得环己醇亚硝酸脂与相近杂峰有了很好的分离度和灵敏度，通过加标实验验证，得到本方法有了很好的准确度和精密度，满足了食品风险监测对奶茶中甜蜜素含量测定的方法要求。
