清开灵注射液用细菌内毒素检查法的可行性

程晓岭，张旭，郝欣岭

（神威药业集团有限公司，河北 石家庄 051430）

0 引言

清开灵注射液主要包括胆酸、板蓝根以及黄芩苷等八味中药为主，具有清热解毒、化痰通络、醒脑开窍的功能作用，因此在临床上应用十分广泛。但是现阶段清开灵注射液在2015 年版药典中依然应用家兔法检查热原，但是由于家兔法操作起来十分复杂，要花费较长的检查时间，且成本较高，灵敏度较低，依照2015 年版药典四部细菌内毒素检查方法与热原家兔检查方法的基本要求，对此药物展开对比与研究，结果证明，清开灵注射液可以应用细菌内毒素检查方，进而取代家兔方法检查热原，但是不可忽视药物对于试验本身的干扰性[1]。为了进一步探究细菌内速度检查应用清开灵注射液的可行性效果，现将探究过程与结果进行以下几点分析。

1 材料与设备

1.1 基本材料。此次试验研究选取鲎试剂2 种规格，2 个生产批次（产地：湛江安度斯生物有限公司，灵敏度：0.5 Eu/ml，批次1705412 与1808452，灵敏度0.25 Eu/ml，批次1708642，批次1809167）。细菌内毒素检查用水（产地：湛江安度斯生物有限公司，规格：0.5 mL，批次：1704065），细菌内毒素工作标准物（产地：湛江安度斯生物有限公司，规格10Eu/支，批次：17040821）[2]。热原应用家兔，生命体征健康，同时通过相关检测为合格，清开灵注射液（产地：神威药业集团有限公司，国药准字：Z13020880，批次：170117223、18044365）。

1.2 设备。此次试验选用漩涡式混悬器设施，由天津药典标准仪器厂生产，型号为ZH-2 型；电热恒温水浴箱设备，由江苏金坛市大仪器厂生产，型号为420 型；无热源移液器设备，由上海求精生化试剂仪器有限公司生产[3]。

2 检测方法和结果

2.1 明确内毒素限值。根据我国药典2015 年版4 部1143 标准要求，明确药品、生物制品的细菌内素质限值为（L），根据L=K/M，公式进行计算，其K 值为人体每千克体质量，在1 小时内最大可承受的内霉素计量，注射剂为K=5 Eu/（kg·h），而M 是人用每千克质量1 小时可最大供试品剂量，清开灵注射液的应用一次最大限度的注射量为40 mL，依照药典标准人均体质量根据60 kg 加以计算，注射时间为1 小时，那么M 值为0.667 mL/（kg·h），由此可以得出清开灵注射内毒素的限值为7.5 Eu/mL。

2.2 最大范围稀释倍数的明确。结合药典要求标准，MVD=cL/λ，而c 是供试品溶液的浓度，结合药典，c=1.0 mL/mL，基于上一部分的基础上，已经结合清开灵注射液的应用说明与药典要求，得出L=7.5 Eu/mL，因此鲎试剂的灵敏度即0.5 Eu/mL，使MVD=15。

2.3 鲎试剂灵敏度复核试验分析，依照2015 年片药典的基本要求，如若选用新批号的鲎试剂或者试验基本条件出现变化，都会对检查结果造成影响，因此应该反复进行鲎试剂灵敏度的复核试验分析。选用10 Eu/支细菌内毒素，应用1.0 mL 细菌内毒素检测用水加以溶解，使其在漩涡混合器设备上混匀15 分钟以后，根据制成2λ、1λ、0.5λ 以及0.25λ四个浓度的内毒素标准溶液进行稀释。通过反复复核，4 个批次的鲎试剂浓度最大为2λ 的试管呈阳性，浓度最小0.25λ的试管呈阴性，且阴性对照管以阴性为主，可见此次试验结果真实有效，同时4 个批次鲎试剂0λC 计算结果处于2λ-0.25λ 范围之内，可以将灵敏度为0.5 Eu/mL 作为鲎试剂灵敏度标准。

2.4 干扰试验分析。供试品溶液根据梯度进行稀释，最大达到15 倍的5 个稀释等级溶液，利用标记浓度为0.5 Eu/mL鲎试剂结合我国药典2015 年版四部1143 鲎试剂灵敏度进行复核试验分析，确保每个浓度平行做4 支管，除此之外2 支阴性参照管与2 支试剂品阴性对照管，2 个批次供试品结果一致，详情如表1 所示。

表1 表示灵敏度0.5Eu/mL 批次1705412 与批次1808452 鲎试剂结果分析

分析表1 可知，此次试验具有一定的可行性，但是供试品在稀释15 倍过程中，针对1λ 内毒素鲎试剂干扰的影响，使其结果呈阴性，结合药典的根本要求，这时可以对供试品展开更大倍数的稀释，达到排除干扰的效果，故此进行更大倍数的稀释。

通过观察发现，阴性参照管全部平行管呈阴性，2λ 管呈阳性，0.25 管呈阴性，试验结果有效，1λ 管呈阳性，可以将干扰排除。由此可见，清开灵注射液针对内毒素检查有一定的干扰性，但是稀释30 倍后可以将干扰排除。

2.5 家兔方法检测。选出6 只健康并经过检测合格的家兔，根据我国药典2015 年片一部1142 热原检查方法进行检测，实验结果表明2 批次供试品热原都符合要求。

2.6 对比两种检测结果。此次试验2 破此供试品达到30 倍稀释，结合2015 年版药典四部1143 细菌内毒素检查方法，利用0.5 Eu/支鲎试剂进行检测，结果呈阴性，依照2015 年版药典四部1142 热原检查方法展开检查，结果符合标准要求，此两种检测方法结果相同。

3 讨论

清开灵注射液由中药制成，作为临床常见药物，现阶段沿用家兔方法进行热原检测，不仅浪费精力与时间，还有着较高的成本要求。因此为了优化细菌内毒素检查方法，采用清开灵注射液加以检测，应该在实际的试验中充分考虑药品自身对于试剂的干扰性[4-5]。

此次研究结果表明，清开灵注射液稀释倍数之后，检测结果和热原检查方法的结果相一致[6-9]。经过反复复核研究证实，试验中采用0.25 Eu/mL 鲎试剂检验应用供试品30 倍稀释液时，可以除去药品根本的干扰性。此研究结果与张军霞、郭姣梅、周继春等人研究结果相一致[10]，证明此次研究具有可行性特点。

综上所述，选用清开灵注射液通过30 倍稀释以后，排除对细菌内毒素检查的干扰因素，利用细菌内毒素检查方法展开细菌内毒素检查，可以将固有的热原检查方法所取代，可见清开灵注射液用细菌内毒素检查法具有一定的可行性。