荆条蜜炮制前后黄酮类化合物含量及其抗氧化活性研究

重庆师范大学生命科学学院 邓先丽 王林玲

蜂蜜是蜜蜂采集植物花蜜、分泌物或昆虫的排泄物，经过一定的反应后在蜂巢中精制和成熟的物质，富含黄酮类和酚酸化合物[1-2]。根据蜜源组成，蜂蜜可分为单花蜜和混合蜜。单花蜜以蜜源植物名称命名，荆条蜜就是其中之一，是我国的四大名蜜之一，其液态呈浅琥珀色，结晶呈乳白色，含有大量的还原糖、矿物质元素[4]。丰富的物质组成，为其生物学活性提供理论依据。荆条蜜具有抗氧化活性和延缓衰老的功效[3]。具有保肝作用，且功能发挥与酚类物质相关[4]。曹炜等人的研究表明，荆条蜜中酚酸类物质在一定浓度与其抗氧化活性呈现剂量效应关系[5]。荆条蜜的生物学活性，为其药理价值奠定了基础。蜂蜜经过炮制后，可作为中药辅料。但是对荆条蜜经炮制后的物质变化以及抗氧化活性变化鲜有研究。本研究对荆条蜜进行高温炼制，检测了其总黄酮含量及抗氧化活性，为荆条蜜的药用研究提供理论指导。

1 材料与方法

1.1 样品处理

根据Ota等人的方法，做部分修改[6,7]。称取新鲜荆条蜜10 g，在 80℃、120℃、150℃、180℃条件下，分别加热 10 min、30 min、60 min。样品制备：（1）分别精确称取2 g处理后的样品，10 ml蒸馏水充分溶解后备用。（2）精确称取2 g高温处理的样品，10 ml ph=2的盐酸水溶液混合均匀，3000 r/min离心5 min。与等体积XAD-2大孔树脂混合，过柱，按甲醇与树脂体积比1∶2洗脱，旋转蒸发后置于4℃冰箱保存备用。

1.2 样品总黄酮测定[4]

称取芦丁标品4 mg，充分溶解于10 mL甲醇，制成0.4 mg/mL芦丁标准液。按照比例用50%甲醇将芦丁标准液稀释至0.07、0.13、0.2、0.27、0.33 mg/ml。取稀释液 0.072 mL 至 96 孔板，加入0.012 mL5%亚硝酸钠，混匀，静置10 min。加入0.012 mL硝酸铝，混匀，静置10 min。再加入0.012 mL4.5%氢氧化钠溶液，以50%甲醇溶液定容至0.3mL，充分混匀，静置10 min后在510 nm处测定吸光值，求得标准曲线和吸光值：y=12.33x-0.0077，R2=0.9977。测定上述两种处理样品的吸光值，计算出样品中的总黄酮含量。

1.3 DPPH抗氧化[8]

吸取0.1 mL上述两种处理过的蜂蜜样品至96孔板，加入配置好的DPPH甲醇溶液0.2mL，避光1 h，于519 nm处测定吸光度；未加入样品的DPPH甲醇溶液为空白组。DPPH自由基清除率公式：清除率（%）=（（A0-A1）/A0x100%）式中：A1为样品管吸光值，A0为空白组吸光值。

1.4 数据处理

结果表示为三个平行测量的平均值±标准偏差（SD）。统计分析用软件SPSS16.0单因素反差分析样品间的显著性。

2 结果与讨论

2.1 样品总黄酮测定结果

荆条蜜经高温炮制处理后，经标准曲线计算出总黄酮含量发生显著性变化。处理蜂蜜经150℃、30 min和60 min，180℃处理后，总黄酮含量显著增加，相较于未经处理的蜂蜜而言，增加了247倍[9]。研究表明荆条蜜中的总黄酮含量为19～39毫克芦丁每千克，本研究测得含量较之偏低，但经炮制后含量明显偏高。蜂蜜醇提取物总黄酮含量与处理蜂蜜基本一致，相对于未处理蜂蜜醇提取而言增加了39倍，并且在120℃、30 min处理后含量也显著增加，见表1。蜂蜜炮制温度和时间对其总黄酮化合物含量具有显著影响。

2.2 对DPPH自由基清除作用

处理蜂蜜和其醇提取物对DPPH自由基的清除作用均在不同程度有所增加。处理蜂蜜的半抑制浓度随处理温度和时间的增加而减小，在150℃、30min处理达到IC50最低值0.03 g，其中未经处理蜂蜜的IC50为0.21g。醇提取物在180℃、10min处理后IC50最低值与处理蜂蜜相同，见表1。李菁研究蜂蜜加工抗氧化活性变化，发现抗氧化活性增强，本研究与之结果一致[10]。因此，经炮制处理后的蜂蜜及其醇提取物在一定程度上增加了DPPH自由基清除作用。

3 结论

蜂蜜炮制会改变其理化性值。本文采用高温炮制荆条蜜，酶标仪检测总黄酮含量和DPPH自由基清除作用。结果表明在150℃、30 min和60 min，180℃处理后，蜂蜜和醇提取物的总黄酮含量显著性增加，分别增加了247倍、39倍。DPPH自由基清除活性随着处理温度和时间的增加而增加，蜂蜜和醇提取物IC50最小值均为0.03 g。荆条蜜经炮制后总黄酮含量显著性增加，DPPH自由基清除活性增强，高温炮制蜂蜜对其药理作用具有积极的影响。

表1 处理蜂蜜和醇提取物总黄酮含量及抗氧化活性