河南省部分规模化养猪场猪圆环病毒2型的流行病学调查

金喜新 王宏亮 陈海涛

摘要 [目的]了解河南省部分地区猪圆环病毒2型的感染情况，以便更好地掌握该病的流行现状。[方法]应用聚合酶链式反应技术（PCR）对来自河南省12个不同地区的250个疑似PCV2感染送检样品进行检测。[结果]总体阳性率为91.20%。河南东部、西部、南部、北部、中部地区部分养猪场PCV2的阳性率分别为81.82%、90.70%、89.66%、96.30%和93.75%。不同规模养猪场的PCV2阳性率也存在差异，大型养猪场、中型养猪场、小型养猪场的PCV2阳性率分别为94.19%、92.68%和86.59%。[结论]猪圆环病毒2型在河南省已经普遍流行，应引起足够的重视，各养猪场也应采取相应的防控措施：优化断奶仔猪的饲养环境;坚持自繁自养和全进全出的饲养模式;加强对猪群的饲养管理;认真落实防疫工作;感染较严重的病猪予以淘汰，感染较轻的病猪隔离饲养。

关键词 猪圆环病毒2型;PCR;调查;防控防疫

Abstract [Objective]To understand the infection situations of porcine circovirus type 2 in some areas of Henan Province，and better grasp the current status of the disease.[Method] Polymerase chain reaction （PCR） assay was used to detect 250 samples suspected of PCV2 infection from 12 different areas of Henan Province.[Result]The overall positive rate was 91.20%.The positive rates of PCV2 were 81.82%，90.70%，89.66%，96.30% and 93.75% receptively in eastern，western，southern，northern and central part of Henan swine farms.PCV2 positive rates in large pig farms，medium pig farms and small pig farms were 94.19%，92.68% and 86.59%，respectively.[Conclusion]The porcine circovirus type 2 has been wide prevalent in Henan Province.Swine farms should take corresponding preventive measures to prevent PCV2，by optimizing the feeding environment of weaned piglets，persisting in the breeding mode feeding，strengthening the management of pig breeding，conscientiously implementing epidemic prevention work.Pigs infected with more serious diseases should be eliminated，and pigs infected with less severe diseases should be kept in isolation.

Key words Porcinecircovirus type 2;PCR;Investigation;Prevention and control of disease

豬圆环病毒属于圆环病毒科圆环病毒属、单股环状无囊膜DNA病毒[1]。目前报道的猪圆环病毒可分为PCV1、PCV2、PCV3三个基因型。PCV1在猪群中广泛存在，对猪没有致病作用，可在PK15细胞系增殖但不产生细胞病变（CPE）[2]。PCV2对猪群具有广泛的致病性[3]，可引起仔猪断奶后多系统衰竭综合征（postweaning multisystemic wasting syndrome，PMWS）[4]，猪繁殖障碍（reproductive disorders）、猪皮炎与肾病综合征（porcine dermatitis and nephropathy syndrome，PDNS）、仔猪先天性震颤（congenital tremor，CT）等，这一系列的临床表现统称为猪圆环病毒相关疾病（porcine circovirusassociated disease ，PCVAD）[5]。2001年，我国报道猪群中存在PCV2感染[6]，且蔓延至很多省市。近年来，PCV2引起的PCVAD在我国的发生与流行呈上升趋势，已成为严重危害养猪业的重要病原之一。2016年，美国科学家Phan和Palinski几乎同时报道了一个新的PCV基因型，即PCV3[7-8]。PCV3最早是从发生PMWS等病症的母猪或仔猪体内检测出来，且同时发现病猪PCV2检测呈阴性。2017年我国首次在广东省的发病猪群中检测到PCV3[9]。

目前，猪圆环病毒病已成为对生猪养猪业威胁最大的传染病之一。河南省是生猪养殖大省，每年出栏大量的生猪，然而因为该病的影响，每年都会造成巨大的经济损失，严重制约着河南省生猪养殖业的持续健康发展。为了解河南省PCV2的感染情况，以便更好地实施动物疫病防控工作，笔者通过建立PCR方法在河南多地猪场进行了PCV2流行病学调查。

1 材料与方法

1.1 病料来源 来自河南省12个不同地区的疑似PCV2感染的250份送检样品，包括脾、肺、肝、肾、扁桃体及腹股沟淋巴结组织样品。

1.2 引物设计及合成

利用基因分析软件Primer Premier 5.0，参照GenBank中的PCV2基因序列（登录号AF055391）设计1对PCV2特异引物。PCV487F为5′-CTGTTTTCGAACGCAGTGCC-3′;PCV487R6为5′-GCATCTTCAACACCCGCCT-3′。该引物可特异性扩增出487 bp大小的基因片段，引物由上海生工生物工程技术服务有限公司合成。

1.3 病料处理与DNA提取

采集病料中脾、肺、肝、肾、扁桃体及腹股沟淋巴结组织，加入PBS液稀释并充分研磨，反复冻融3次，6 000 r/min，离心5 min，取上清液至灭菌离心管中，置于-80 ℃冰箱中保存备用。按照病毒核酸提取试剂盒操作步骤提取病毒DNA，置于-20 ℃冰箱中保存备用。

1.4 PCR扩增

以提取的病毒DNA为模板，用1对PCR引物进行PCR扩增。引物浓度为20 pmol/μL，dNTPs浓度为2.5 mmol/L，MgCl2浓度为25 mmol/L，rTaq酶为5 U/μL，整个PCR反应体系为50 μL。PCR反应体系如下：10× Buffer 5 μL，dNTPs 5 μL，MgCl2 4 μL，引物各1 μL，模板DNA 10 μL，rTaq酶0.5 μL，加超纯水至50 μL，然后瞬时离心，进行PCR扩增。PCR反应程序如下：94 ℃预变性3 min;94 ℃45 s，58 ℃45 s，72 ℃45 s，共30個循环;72 ℃延伸8 min。PCR产物经1%琼脂糖凝胶电泳检查。

2 结果与分析

2.1 样品的PCR检测结果

运用PCV2检测引物对样品进行PCR扩增，阳性样品能够扩增出487 bp 特异性条带，其中部分琼脂糖凝胶电泳图如图1所示。由表1可知，在采集的250份病料中，228份样品呈PCV2阳性，阳性率为91.20%。

2.2 不同地区的样品检测结果

将12个不同地区送检的250份样品按照河南省东部（商丘市、周口市）、西部（南阳市）、南部（驻马店市、信阳市）、北部（焦作市、新乡市等）、中部（开封市、禹州市）划分为5部分，结果显示河南省东、西、南、北部、中部地区部分养猪场的PCV2阳性率分别为81.82%、90.70%、89.66%、96.30%和93.75%。其中北部地区部分生猪养殖场PCV2的阳性率最高，为96.30%;东部部分生猪养殖场的PCV2阳性率最低，为81.82%（表2）。

2.3 不同规模养猪场的样品检测结果

根据不同养猪场年出栏商品肉猪量的不同将其划分为大型养猪场（10 000头以上）、中型养猪场（3 000～5 000头）、小型养猪场（3 000头以下）。对检测结果进行统计，结果显示不同规模养猪场的PCV2阳性率存在差异，大型养猪场、中型养猪场、小型养猪场的PCV2阳性率分别为94.19%、92.68%和86.59%。其中大型养猪场的PCV2阳性率最高，为94.19%;小型养猪场的PCV2阳性率最低，为86.59%（表3）。

3 结论与讨论

此次PCV2样本检测结果表明，河南省部分规模化养猪场PCV2的阳性率为91.2%。2009年，胡慧等[10]在河南省采集226份猪血样，应用ELISA方法对样品进行检测，结果表明PCV2的阳性率为53.10%。此次调查PCV2的阳性率显著高于53.10%，此次调查样本的来源全部为疑似发病的病猪，此次样品来源为健康猪群，但都检测出PCV2阳性样品。究其原因，可能与PCV2在猪群中感染率较高有关，但因病毒含量不高，并未使感染猪表现出典型的临床症状，也可能与猪群中是否存在猪繁殖与呼吸综合症、猪伪狂犬病、猪瘟等其他免疫抑制病的流行有关[11]。

河南省不同地区规模化养猪场PCV2的阳性率存在差异，这与2012—2013年马少强等[12]在河南省不同地区采集的338份样品检测结果相同，PCV2在河南省已经普遍流行，但部分养猪场户的防控意识相对薄弱，导致该病毒在该地区大肆传播。不同类型的养猪场PCV2的阳性率也有差异，但都较高，这可能与饲养管理过程中操作不够规范、生物安全意识不强、疫苗防疫措施落实不到位等有关。

4 PCV2的防控措施

因为PCV2目前尚无特效的治疗方法，要防控PCV2就必须以预防为主，采取综合性防治措施，将PCV2的危害降低至最小。

4.1 加强对断奶仔猪的饲养管理 防控猪圆环病毒病的有利时期主要在仔猪断奶后的3～4周龄，此段时期，养猪场对断奶后仔猪进行疫苗接种、转栏、并群、分群以及更换饲料、阉割等饲养管理操作工作，这些工作都是断奶仔猪产生应急刺激的主要因素。因此，在PCV2感染比较严重的养猪场，建议延迟仔猪断奶至30日龄左右。断奶时，应保持仔猪原地不动，母猪迁移出哺乳舍，并保证仔猪圈舍内有充足的水和饲料供给，以减少猪群之间的相互打斗，尽可能减少对仔猪产生的应激，也减少了PCV2在不同猪群中的传播。仔猪断奶后的10 d内，最好不要更换饲料，加强对猪群的饲养管理，注意圈舍的通风、温度控制，加强环境消毒工作。对仔猪的疫苗接种以及阉割等最好在断奶后7～10 d内分开进行，避免上述2项工作对仔猪一次性刺激过强。在疫苗接种时，应注意周边养猪场的疫病流行情况做出相应的防疫措施，防止过早或多次对仔猪进行免疫接种，尽可能减少对仔猪的不良刺激。

4.2 坚持自繁自养和全进全出的饲养模式 养猪场如果经常引进不同品种的种猪，由于个体健康状态和免疫力不同，将会使种猪群的免疫状态出现波动，加上可能会因为某个环节操作的疏忽大意而将含有隐性感染的种猪引进种猪场，从而使病原菌在种猪群中蔓延扩散，或许爆发其他一系列的疫病，而这一系列的疫病反过来又会使PCV2的疫情加重。综上所述，经常引进不同品种的种猪也是使养猪场PCV2以及其他相关综合征加重或爆发的一个危险因素[13]，因此，建议养猪场应尽量减少外来种猪的引进，坚持自繁自养的饲养模式，这样可以使隐性病原菌感染的概率降到最低。同时，养猪场还应对不同生长阶段的猪群采取全进全出的饲养模式，利于减少猪群感染PCV2以及其他病原的机率。

4.3 加强猪群日常管理，提供良好的饲养环境 不同生长阶段的猪群营养需求有较大差异，不同类型的饲料应按照其功能性供给不同生长阶段的猪群，从而保证猪群的全面均衡的营养需要，确保其正常的生长发育。同时，对于饲料的品质也要严格的把控，对于劣质、发霉的饲料应及时淘汰。在猪群的管理上，不同生长阶段的猪群应分开圈养，不混群饲养，猪舍内的环境应保持对猪群生长发育最有利的情形下，同时，应对猪舍进行定期消毒。猪舍在进猪之前应对猪舍进行彻底的打扫和消毒工作，包括入口设置消毒池以及杀虫灭鼠等工作。养猪场内不养殖其他动物（如猫、狗等），否则也会造成疾病的传播。另外，在不同的季节应对猪舍内的温度实施监控，做好适当的降温或升温工作，同时应保证猪舍的通风、定时进行氨气检测。养猪场应建立独立的粪污排放系统，集中收集粪污并进行发酵处理。养猪场应与周围的环境隔离，对于外来人员、外来车辆和物品应进行严格的消毒工作，有效切断PCV2传播途径。

4.4 严格落实猪群的免疫接种 对于PCV2感染严重的养猪场，应严格实施有计划地疫苗免疫接种。仔猪在3～4周龄首免，间隔3周进行加强免疫;后备母猪配种前做基础免疫2次，产前一个月加强免疫1次;经产母猪产前1个月免疫1次;公猪和其他成年猪实施普免，每半年免疫1次。按照制定的免疫程序对猪群进行常规免疫接种后，应定期采集猪群的血液样本进行抗体监测工作，及时掌握疫苗接种的免疫效果。此外，还应做好猪瘟、猪伪狂犬病、猪细小病毒病等其他常见疾病的基础免疫工作，防止混合感染的发生。在实际生产中，也可以制备自家苗来预防PCV2，但制作和使用自家苗一定要严格按照规范流程进行，避免给猪场带来新的问题[14]。

4.5 合理做好對已感染猪群的防治 由于PCV2现在还没有特效的治疗方法，因此各养猪场应做好综合性预防工作，除了日常的饲养管理、检疫和消毒工作外，为了能更好地提高猪群的免疫力，可在饲料中适当添加中药作为添加剂，如党参、白术等，对防控猪圆环病毒相关疾病有一定帮助[15]。对发病猪，视发病轻重情况，对其采取隔离饲养或无害化处理。对于一些发病症状较轻的病猪，应予以隔离饲养。对于发病较为严重的病猪应予以淘汰和无害化处理，避免对其他猪群造成感染。

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