TREM-1在大鼠脑出血后继发性脑损伤中的作用机制〔1〕

2020-07-13段红玲孙新刚张咪咪侯雅芝

临床医药实践 2020年7期

关键词：继发性脑损伤脑组织

段红玲，孙新刚，张咪咪，侯雅芝

(1.山西医科大学，山西太原 030001；2.山西医科大学第二医院，山西太原 030001；3.山西省心血管病医院，山西太原 030024)

髓系细胞触发受体-1(TREM-1)是介导炎症发生与放大并导致组织损伤的关键介质[1]，但与脑出血(ICH)后继发性脑损伤形成的关系不明[2]。本研究拟探索TREM-1在大鼠ICH后继发性脑损伤形成中的作用机制，报告如下。

1 材料与方法

1.1 实验动物及分组

健康雄性SD大鼠36只，体质量250～300 g。采用随机数字表法将大鼠分为假手术组、ICH组、ICH+LP17组，每组12 只，其中6 只用于检测脑组织含水量，6只用于实时荧光定量PCR(RT-PCR)法检测TREM-1通路的表达。

1.2 动物模型制作

参照文献[3]方法，采用自体注血法制作ICH模型。将100 μL自体新鲜股动脉血注入大鼠尾状核，制作大鼠脑出血模型；所有动物均于术后3 d处死。ICH+LP17组采用上述相同手术后，再于术后30 min使用TREM-1特异性抑制剂(LP17)实施干预，LP17(3.5 mg/kg)使用时将其溶于0.5 mL生理盐水中经大鼠腹腔注射[4]；假手术组采用相同手术过程但不注血。

1.3 脑组织含水量检测

大鼠麻醉后迅速断头取脑，用滤纸吸干脑组织表面水分，称量湿重，再将脑组织置于100 ℃的恒温干燥箱烘烤24 h称取其干重，脑组织含水量(%)=(湿重-干重)/湿重×100%[5]。

1.4 RT-PCR法检测TREM-1通路的表达

采用TRI zol法提取血肿周围脑组织细胞总RNA[6]，严格按照反转录试剂盒说明书操作步骤将RNA反转录为cDNA，并进行荧光定量PCR操作，分别以TREM-1、P38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)、细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)与β-actin的比值表示其相对水平。

1.5 统计学方法

2 结果

2.1 各组大鼠脑组织中TREM-1和p38MAPK及ERK1/2表达水平比较

与假手术组相比，ICH组血肿周围脑组织中TREM-1，p38MAPK及ERK1/2的表达均升高；与ICH组比较，使用LP17后，TREM-1及其下游的p38MAPK和ERK1/2表达均明显减少，但仍高于假手术组(见表1)。

表1 三组脑组织中TREM-1和p38MAPK 及ERK1/2表达水平比较

2.2 三组大鼠脑组织含水量比较

与假手术组相比，ICH组和ICH+LP17组大鼠脑组织含水量显著增多，差异有统计学意义(P<0.05)。与ICH组相比，ICH+LP17组的大鼠脑含水量显著降低(P<0.05)(见图1)。

图1 三组大鼠脑含水量比较图

2.3 大鼠脑组织TREM-1表达与p38MAPK/ERK1/2表达及脑含水量的相关性

大鼠脑组织中TREM-1的表达与p38MAPK(r=0.850，P<0.001)(见图2A)及ERK1/2(r=0.815，P<0.001)(见图2B)的表达和脑组织含水量(r=0.827，P<0.001)(见图2C)均呈正相关。

3 讨论

ICH是一种具有高病死率及高致残率的神经系统疾病，继发性脑损伤是导致其预后不佳的重要原因[2]，积极探讨继发性脑损伤的形成机制并进行干预，其临床意义重大。炎症反应在ICH后继发性脑损伤形成过程中起重要作用[7]，多种炎性介质已被证实与ICH后继发性脑损伤的形成密切相关[7-8]，但到目前为止，尚无针对这些炎症介质的药物可应用于临床并观察到明确疗效[8]，提示仍有其他炎性因子的参与。TREM-1是导致多种炎症反应发生与放大的关键介质[9]，TREM-1是否与ICH后炎症反应及后续脑损伤有关目前尚无研究。本研究发现ICH大鼠血肿周围脑组织中TREM-1表达明显升高，说明TREM-1可能与ICH后脑组织损伤的形成密切相关。结果表明，TREM-1可通过激活下游p38MAPK/ERK1/2途径参与ICH后继发性脑损伤的形成，抑制TREM-1的表达，可使ICH大鼠脑组织损伤明显减轻，这一研究结果可为探索ICH后继发性脑损伤的形成机制提供新思路，提示TREM-1有望成为治疗ICH后继发性脑损伤的药物作用新靶点。