气相色谱法测定糖平煎复方中苍术酮含量

田嘉铭 于小红 王银月 王 旭 王治宝 王 金 卢金铭

1.河北北方学院药学系，张家口，075000，中国

2.河北省神经药理学重点实验室，张家口，075000，中国

3.河北建筑工程学校，保定，071000，中国

糖平煎由黄芪（14 g）、黄连（6 g）、麸炒苍术（10 g）、元参（10 g）、山药（10 g）、荔枝核（6 g）、丹皮（6 g）、桑叶（8 g）、僵蚕（10 g）等多种药材组成［1］，具有降糖降脂、健脾疏肝、益气淡渗、清热燥湿、活血凉血等作用［2］。目前关于糖平煎的研究主要集中在药效及降糖机理方面［3-5］，而关于质量控制方面的研究却少有报道。糖平煎复方中苍术具有健脾益气、燥湿化痰之功，对于表现为“脾虚、肝郁、痰淤”的2 型糖尿病具有重要意义。苍术酮为苍术的主要有效成分之一，本实验通过研究，建立了气相色谱内标法测定糖平煎中苍术酮含量的方法，为糖平煎的质量控制提供了依据。

1 仪器与试药

GC-7900 气相色谱仪及配套设备，Techcomp 天美有限公司；D-7900 色谱工作站，氢火焰离子检测器（flame ionization detector，FID）；苍术酮标准品，天津一方科技有限公司，批号AB026A；萘，上海研拓生物科技有限公司；乙醚，天津市化学试剂二厂，批号 120904；麸炒苍术，张家口张恒中药饮品有限公司，批号 100701；黄芪，河北祁新中药颗粒饮片有限公司，批号20 140312；玄参，张家口张恒中药饮品有限公司，批号 100901；山药，张家口张恒中药饮品有限公司，批号 110501；丹皮、黄连、桑叶、僵蚕、荔枝核购自同仁堂。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：PEG-20M 毛细管色谱柱（30 m×0.25 mm× 0.25 μm）；进样口温度290 ℃，检测器温度300 ℃。柱升温程序：起始温度150 ℃，保持5 min，以2 ℃·min-1升温至164 ℃，保持1 min，再以3 ℃·min-1升温至200 ℃，保持2 min。载气为氮气，纯度≥99.999%，流速1 mL·min-1；分流进样，分流比40∶1，进样量1 μL。分别取对照品、供试品溶液在前述色谱条件下进行气相检测，萘的出峰时间为3.54 min，苍术酮出峰时间为15.91 min，与相邻色谱峰分离度较好，样品运行时间为28 min，结果见Fig.1。

Fig.1 Chromatogram of reference solution and sample solution a Naphthalene b Atractylone

2.2 标准溶液配制

精密称取苍术酮对照品10.5 mg，置于10 mL容量瓶中，乙醚溶解并稀释定容至刻度，得浓度为1.05 mg·mL-1的苍术酮对照品储备液。

精密称定44.0 mg 萘，置于5 mL 容量瓶中，乙醚溶解并稀释定容至刻度，作为内标储备液。

精密量取对照品储备液0.1、0.2、0.5、1.0、2.0 mL分别置于25 mL 容量瓶中，随后分别加入内标储备液0.5 mL，乙醚定容至刻度，配成含有内标（176 μg·mL-1）的系列对照品溶液。

2.3 供试品溶液制备

取已干燥粉碎的糖平煎粗粉5.0 g，置于具塞锥形瓶中，加入正己烷100 mL（料液比为1∶20），称重，超声提取30 min，冷却至室温，补足缺失质量，上清液过0.22 μm 微孔滤膜，精密吸取续滤液2 mL 置于10 mL容量瓶中，加入内标储备液0.5 mL，乙醚定容至刻度，摇匀，即得。

2.4 方法学考察

2.4.1 线性关系、检出限和定量限

取“2.2”项下系列苍术酮标准溶液，按“2.1”项下色谱条件进样测定，以苍术酮与内标萘峰面积比值（Y）对苍术酮浓度（C）进行线性回归，得线性回归方程为：Y=1.2687X-201.624，r=0.9997，苍术酮在4.2～84.0 μg·mL-1范围内，线性关系良好。逐级稀释标准溶液，以信噪比（signal-to-noise ratio，S/N）≥3 计算检测限为0.42 μg·mL-1，以信噪比（S/N）≥10 计算定量限为1.40 μg·mL-1。

2.4.2 精密度实验

取同一对照品溶液按“2.1”项下色谱条件下连续进样6 次，每次1 μL，计算苍术酮峰面积与内标峰面积比值的相对标准偏差（relative standard deviation，RSD）为0.86%，表明仪器精密度良好。

2.4.3 重复性考察

取糖平煎样品6 份，按“供试品溶液制备”项下方法配制供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件分别进样1 μL，计算苍术酮含量RSD 值为1.24%，表明方法重复性良好。

2.4.4 稳定性考察

取糖平煎样品6 份，按“供试品溶液制备”项下方法配制供试品溶液，分别于0、1、2、4、6 h 按“2.1”项下色谱条件进样1 μL，计算苍术酮含量RSD 值为1.37%，表明样品溶液在室温下放置6 h 稳定。

2.4.5 回收率实验

取已测含量的糖平煎粉末9 份，每份4 g，分别精密加入对照品储备液适量，然后按“2.3”项制备供试品溶液，制成加样回收率供试液，按“2.1”项下色谱条件进样，测定并计算加样回收率，结果见Tab.1。

Tab.1 Sample recovery test

2.5 样品测定

分别取不同时期配制的糖平煎样品5 份，按“供试品溶液制备”项下方法配制供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件进样1 μL，计算苍术酮含量为（1.13±0.03）mg·g-1。

3 讨论

影响糖平煎挥发油提取物中苍术酮与其它组分分离的主要因素有进样口温度、升温程序、色谱柱流量、分流比等参数。实验发现，进样口温度过低时，色谱峰有拖尾现象，升高进样口温度，则峰形较好。程序升温速率过快时，样品中苍术酮与其它成分难以有效分离，当升温速率降为2 ℃·min-1，能达到较满意的分离度。分别选择分流比为10∶1、20∶1、30∶1 和40∶1 进样，计算检测限（10 倍基线噪声）分别为0.98、1.06、1.22 和1.40 μg·mL-1，分流比越大时，杂质峰虽也相应提高，但响应值提高更多，综合考虑，本实验选择分流比为40∶1。

与外标法相比，内标法可以减少由于标准曲线拟合和测量重复性引入的不确定度，可以减少系统误差，具有更高的精密度与准确度［6-8］。本实验建立的方法简便快捷，适用性和专属性良好，有利于糖平煎复方的质量控制。